熟地黄多糖对H22、S180荷瘤小鼠抑瘤作用及存活时间的影响

吴勃岩，王雪，王君龙，徐绍娜，梁颖

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

熟地黄是经生地黄炮制而成，味甘性微温，是常用的补肝肾、益精血中药，功专养血滋阴，填精益髓，广泛用于阴虚、血虚所致的各种疾病。熟地黄多糖是中药地黄的有效成分之一，有资料表明，熟地黄多糖具有抗突变，抗衰老，增强机体免疫功能等作用［1－3］。本实验以不同剂量的熟地黄多糖对荷瘤小鼠进行灌胃给药，观察其肿瘤生长抑制率、生命延长率、肝/体比、脾脏指数的影响，探讨熟地黄多糖的抗肿瘤作用，为临床治疗恶性肿瘤提供科学的实验数据。

1 材料与方法

1．1 材料

动物昆明种小鼠50只，体质量(20±2)g，雌雄各半，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供;瘤株H22、S180腹水瘤株(哈尔滨医科大学附属肿瘤医院)。

1．2 实验方法

1．2．1 熟地黄多糖的提取

实验采取水提醇沉法提取熟地黄多糖。沉淀依次用无水乙醇，丙酮，无水乙醚洗涤，再用三氯乙酸溶液脱蛋白，烘干，得到熟地黄多糖。

1．2．2 肿瘤模型的制备

传代7天后，无菌条件下取生长良好的H22、S180荷瘤小鼠腹水，用生理盐水1∶2稀释，于每只小鼠右前腋下接种0．1ml，待其长为实体瘤，阳性率为100%。

1．2．3 抑瘤率检测

接种后，将小鼠随机分为5组，每组10只。阴性对照组(模型组)，以生理盐水灌胃给药，每日1次，连

基金项目:黑龙江中医药大学优秀青年教师支持项目(2012)

作者简介:吴勃岩(1958－)，女，教授，硕士研究生导师，主要从事中药抗肿瘤研究。

通讯作者:梁颖(1978－)，女，讲师，主要从事中药抗肿瘤研究。

收稿日期:2012－06－18

修回日期:2012－07－12

续10天。阳性对照组(环磷酰胺组)，腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg)，每日1次，连续给药3天。熟地黄多糖高剂量组(1 000mg/kg)、中剂量组(500mg/kg)、低剂量组(250mg/kg);灌胃给药，每日1次，连续10天。停药24h后处死小鼠，称取小鼠体质量，剥离瘤体，计算抑瘤率。

抑制率=［(对照组平均瘤重 －用药组平均瘤重)/对照组平均瘤重］×100%

1．2．4 生命延长率检测

选取昆明种小鼠，雌雄各半，接种瘤株后，随机分为3组，每组10只。阴性对照组，以生理盐水灌胃，每日1次，连续10天。阳性对照组，腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg)，每日1次，连续3天。根据抑瘤率测定，选取抑瘤效果最好的熟地黄多糖中剂量作为最佳剂量组，即500mg/kg/d，灌胃给药，每日1次，连续10天。10天后停止给药，记录其自然生存天数，计算其生命延长率。

生命延长率=［(对照组平均生存天数－用药组平均生存天数)/对照组平均生存天数］×100%

1．3 熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠肝/体比、脾脏指数的观察

取昆明种小鼠雌雄各半，接种H22腹水瘤株后，随机分成3组，每组10只。阴性对照组，灌胃给生理盐水，每日1次，连续10天。阳性对照组，每日腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg)1次，连续给药3天。根据抑瘤率测定，选取抑瘤效果明显的熟地黄多糖中剂量作为最佳剂量设组，以500mg/kg/只的剂量灌胃给药，每日1次，连续10天。末次给药24h后处死小鼠，称取小鼠体质量、肝重及脾重，计算肝/体比和脾脏指数。

1．4 统计学方法

结果以(均数±标准差)表示，以SPSS10．0软件处理，用t检验。

2 结果

2．1 熟地黄多糖对H22、S180荷瘤小鼠的体内抑瘤作用

熟地黄多糖对H22肝癌型肿瘤的抑制情况为熟地黄多糖低、中剂量组的抑制率分别为 30．34%、42.76%，与模型组比较差异极显著(P＜0．01);熟地黄多糖高剂量组抑制率为20．00%，与模型组比较差异显著(P＜0．05);环磷酰胺组与模型组比较差异非常显著(P＜0.01)。

熟地黄多糖对S180肉瘤的抑制情况，熟地黄多糖低剂量组的抑制率为15．38%，与模型组比较差异不显著(P＞0．05);熟地黄多糖中剂量组对S180肉瘤型肿瘤的抑制率为36．36%，与模型组比较差异非常显著(P＜0．01);熟地黄多糖高剂量组的抑制率为27.27%，与模型组比较差异显著(P＜0．05);环磷酰胺组与模型组比较差异非常显著(P＜0．01)。

熟地黄多糖对H22肝癌型肿瘤、S180肉瘤型肿瘤均有抑制作用。但熟地黄多糖低剂量组对H22肝癌型肿瘤的抑制作用要强于对S180肉瘤型肿瘤的抑制作用。结果见表1，表2。

表1 熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用的影响(±s)

表1 熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用的影响(±s)

分组 熟地黄多糖(mg/kg) 环磷酰胺(mg/kg) n 平均瘤重 抑瘤率(%)模型组 － －10 1．45 ±0．21 －环磷酰胺组 － 40 10 0．46±0．08＊＊ 68．28熟地黄多糖低剂量组 250 － 10 1．01±0．12＊＊ 30．34熟地黄多糖中剂量组 500 － 10 0．83±0．15＊＊ 42．76熟地黄多糖高剂量组 1000 － 10 1．16±0．23*20．00

表2 熟地黄多糖对S180荷瘤小鼠体内抑瘤作用的影响(±s)

表2 熟地黄多糖对S180荷瘤小鼠体内抑瘤作用的影响(±s)

注:与阴性对照组比较，*P ＜0．05;＊＊P ＜0．01。

分组 熟地黄多糖(mg/kg) 环磷酰胺(mg/kg) n 平均瘤重 抑瘤率(%)模型组 － －10 1．43 ±0．22 －环磷酰胺组 － 40 10 0．43±0．09＊＊ 69．39熟地黄多糖低剂量组 250 － 10 1．21±0．36 15．38熟地黄多糖中剂量组 500 － 10 0．91±0．30＊＊ 36．36熟地黄多糖高剂量组 1000 － 10 1．04±0．33*27．27

2．2 熟地黄多糖对H22、S180荷瘤小鼠生命延长率的实验结果

熟地黄多糖(500mg/g)能延长H22、S180荷瘤小鼠的存活时间，延长率分别为38.56%和44.62%，与模型组比较差异非常显著(P＜0.01);环磷酰胺组的延长率分别为26.06%和40.62%，与模型组比较差异非常显著(P＜0.01)。结果见表3，表4。

表3 熟地黄多糖对S180荷瘤小鼠生命延长率的影响(±s)

表3 熟地黄多糖对S180荷瘤小鼠生命延长率的影响(±s)

分组 熟地黄多糖(mg/kg) 环磷酰胺(mg/kg) n 生存天数 生命延长率(%)模型组 － －10 16．10 ±1．45 －环磷酰胺组 － 40 10 22．60±2．82＊＊ 40．62熟地黄多糖组 500 － 10 23．75±2．92＊＊#44．62

表4 熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠生命延长率的影响(±s)

注:与阴性对照组比较，＊＊P＜0．01;与模型组比较，*P ＜0.05;与阳性对照组比较，#P ＜0．05。

分组 熟地黄多糖(mg/kg) 环磷酰胺(mg/kg) n 生存天数 生命延长率(%)模型组 － －10 16．00 ±1．41 －阳性对照组 － 40 10 20．17±1．17* 26．06熟地黄多糖组 500 － 10 22．17±1．72＊＊#38．56

2．3 熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠的肝/体及脾指数影响的实验结果

给药组与模型组之间小鼠的肝/体比及脾指数都存在差异(P＜0．05)，说明熟地黄多糖可以提高机体免疫功能，增强体质;给药组的脾指数与环磷酰胺组之间也存在差异(P＜0．05)，表明熟地黄多糖在抑制肿瘤的同时，对机体重要器官的损伤较环磷酰胺小。见表5。

表5 熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠脾指数、肝体比的影响(±s，n=10)

表5 熟地黄多糖对H22荷瘤小鼠脾指数、肝体比的影响(±s，n=10)

注:与模型组比较，*P ＜0．05;与环磷酰胺组比较，#P ＜0．05。

分组 脾指数(mg/g) 肝/体(mg/g)环磷酰胺组8．77 ±1．85 62．69 ±3．91模型组 9．76 ±2．63 66．96 ±3．77熟地黄多糖组 6．33 ±1．12*# 60．18 ±5．08*

3 讨论

熟地黄是生地黄的炮制品，性甘微温，归肝肾经，具有补血滋阴、益精填髓、长肌肉，生精血，补五脏内伤不足，通血脉，利耳目，黑须发的功效，是很好的滋阴补血药，被称为“壮水之主，补血之君”，是传统的补益延寿中药。熟地黄多糖是地黄的主要活性成分之一，本实验通过观察荷瘤H22、S180小鼠的抑瘤率、生命延长率、脾脏指数、肝/体比以及用药前后的体质量等指标变化，对熟地黄多糖的体内抗肿瘤作用进行了探讨。结果表明，熟地黄多糖对H22、S180荷瘤小鼠肿瘤生长都具有较强的抑制作用，并能延长荷瘤小鼠存活时间，研究结果提示，熟地黄多糖对H22肝癌型肿瘤的抑制作用要优于对S180肉瘤型肿瘤的抑制作用。中医理论认为，“正气存内，邪不可干”，机体的正气强弱对疾病的产生和发展有直接的影响。熟地黄作为补益类的中草药，可以提高机体的免疫机能，增强机体抵御疾病的能力。本实验通过用药组和对照组对荷瘤小鼠生存时间影响的比较，提示熟地黄多糖能显著地提高机体的正气，抑制肿瘤的生长，增强机体的免疫功能，延长存活时间。