益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿大鼠肾脏改善作用研究
2012-01-25李文兵胡昌江吴珊珊高源龙兰艳钟振东
李文兵,胡昌江*,吴珊珊,高源,龙兰艳,钟振东
(1.成都中医药大学药学院,四川成都611137;2.四川省人民医院实验动物研究所,四川成都610031)
益智仁为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实,本草文献始见于唐·陈藏器《本草拾遗》。生品辛温而燥,主要归脾经,以温脾止泻、收摄涎唾力胜;盐炙后可缓和辛燥之性,以温肾固精缩尿为主,如《修事指南》指出:“益智仁盐炒,止小便频数”。中医临床上益智仁常作为君药与乌药、山药配伍组成缩泉丸,用于治疗下元虚冷,小便频数,小儿遗尿等症。课题组前期采用小鼠水负荷多尿模型已证明益智仁盐炙后缩尿作用增强,且其物质基础是“石油醚部位+盐”。本实验比较益智仁盐炙前后有效部位对腺嘌呤致肾阳虚多尿模型温肾缩尿影响,拟从尿量、脏器指数、病理改变三个方面进行研究,初步探讨其作用机理。
1 材料与方法
1.1 实验动物SD大鼠,雄性,体质量180~220 g,清洁级,由四川达硕动物实验中心提供。实验动物生产许可证号:SCXK(川)2008-24。
1.2 药物与试剂益智仁药材产地为海南琼中,经本校生药教研室卢先明教授鉴定确认为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实,盐炙益智仁按筛选出的最佳工艺条件制得[1]。益智仁石油醚部位制备方法为8倍量95%乙醇提取3次,每次1 h,减压回收乙醇,浓缩液用石油醚(60~90℃)萃取至上层无色,所得石油醚部位减压回收后用吐温80配成相应给药浓度。缩泉丸(广东华天宝药业集团有限公司,批号:1005101),腺嘌呤(成都贝斯特试剂有限公司,批号:C2000-1360)。
1.3 仪器切片机(徕卡—1015,德国);TSJ—Q型全自动封闭式组织脱水机;BMJ—Ⅲ型包埋机;PHY—Ⅲ型病理组织漂烘仪(常州市中威医疗仪器有限公司);显微镜Motic BA400等;图像分析软件Motic Images Advanced。
1.4 分组及给药取SD大鼠50只,随机分为正常组、模型组、缩泉丸组、生品组、盐炙品组,每组10只动物。除正常组外,其余各组大鼠均按腺嘌呤200 mg/kg剂量灌胃1个月,从造模后2周即实验第3周开始,连续灌胃给药4周,缩泉丸组给药剂量为1.5 g/kg,生品、盐炙品组剂量为成人日服剂量60倍即9 g生药/kg[2]。实验6周后,测24 h尿量后,处死,分别取肾上腺、肾脏、脾脏、胸腺称定质量,计算脏器指数。并将右肾于10%福尔马林中固定。
2 结果
2.1 对尿量的影响与模型组相比,缩泉丸组、生品组和盐炙品组大鼠24 h尿量均降低,具有显著性差异(P<0.05),表明益智仁石油醚部位对腺嘌呤致肾阳虚多尿大鼠有缩尿作用,结果见表1。
表1 对肾阳虚多尿模型大鼠尿量影响(±s,n=8)Tab.1 Effects of urine volume on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency(±s,n=8)
表1 对肾阳虚多尿模型大鼠尿量影响(±s,n=8)Tab.1 Effects of urine volume on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency(±s,n=8)
注:与正常组比较,**P<0.01;与模型组比较,▲P<0.05。
/mL正常组组别剂量/(g·kg-1)尿量20.81±4.10模型组-31.71±4.60**缩泉丸1.523.95±3.96▲生品组924.61±4.43▲盐炙组924.23±4.68-▲
2.2 对脏器指数的影响与模型组相比,各给药组肾上腺指数均降低,但无统计学意义(P>0.05)。缩泉丸组和盐炙品组肾脏指数与模型组相比具有极显著性差异(P<0.01),生品组具有显著性差异(P<0.05)。脾脏指数与模型组比较,缩泉丸组、生品和盐炙品组均具极显著性差异(P<0.01)。胸腺指数与模型组相比,各组均具极显著性差异(P<0.01)。表明益智仁石油醚部位对肾阳虚多尿大鼠肾脏、脾脏、胸腺具有保护作用,且对肾脏保护作用以盐炙品组最佳,结果见表2。
表2 对肾阳虚多尿模型大鼠脏器指数影响±s,n=8)Tab.2 Effects of organ index on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency±s,n=8)
表2 对肾阳虚多尿模型大鼠脏器指数影响±s,n=8)Tab.2 Effects of organ index on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency±s,n=8)
注:与正常组比较,*P<0.05,**P<0.01;▲P<0.05,与模型组比较,▲▲P<0.01。
组别肾上腺/‰肾脏/‰脾脏/‰胸腺/‰正常组0.111 5±0.022 85.07±0.262.29±0.211.02±0.19模型组0.232 7±0.051 6**20.98±3.10**1.66±0.26*0.42±0.10**缩泉丸0.184 7±0.025 816.03±1.92▲▲2.66±0.33▲▲0.93±0.18▲▲生品组0.195 8±0.045 816.26±2.77▲2.50±0.55▲▲0.88±0.14▲▲盐炙组0.167 5±0.037 515.67±1.97▲▲2.49±0.24▲▲0.83±0.21▲▲
2.3 对肾脏病理变化的影响
2.3.1 肉眼观察正常组大鼠肾脏表面光滑、颜色鲜红,质地柔软,大小适中;模型组大鼠肾脏表面凹凸不平,颜色灰白,质地较硬,体积较正常组相比明显增大;各给药组肾脏体积较模型小、色泽、外观明显改善。
2.3.2 光镜观察正常组大鼠肾组织皮、髓质分界清楚,肾小球、肾小管、肾间质均无异常改变。模型组大鼠肾脏出现(1)肾小球病变:肾小球呈分叶状,约2/3发生萎缩或代偿性肥大,球囊壁毛细血管基底膜轻度增厚,系膜细胞增多。(2)肾小管病变:肾小管可见咖啡色腺嘌呤结晶,部分肾小管有萎缩变小或扩张,扩张的肾小管内偶见蛋白管型或颗粒管型。多数肾小管上皮细胞发生水肿,退变线粒体肿胀。水肿明显的上皮细胞继而发生坏死,或脱落掉入管腔内形成细胞管壁。(3)肾间质病变:肾间质内纤维组织明显增生,伴淋巴细胞、单核细胞浸润,甚至形成淋巴滤泡状结构。少数小动脉壁增厚,单核细胞内亦可见咖啡色晶状结晶。缩泉丸和益智仁盐炙前后与模型组相比均有不同程度的改变,但对肾小管的病理改善作用以盐炙品为佳,见图1。
图1 肾脏组织病理光镜图(HE,×200)Fig.1 Pictures of renal pathological(HE,×200)
3 讨论
3.1 腺嘌呤致大鼠肾阳虚是比较公认动物模型,模型表现符合中医肾阳虚典型证候,且造模成功后具有明显尿量增加,是研究益智仁温肾缩尿作用的理想模型。但该模型是通过对肾脏的直接毒性作用,而出现类似肾阳虚的症候表现[3],且随着病程的进展,肾单位大量丧失,导致肾功能衰竭[4-6]。选用该模型研究时造模剂量和时间是关键,而目前对于该模型的文献报道方法不尽相同[7-12]。因此,前期对造模剂量和时间进行了预试,结果表明腺嘌呤剂量在200 mg/kg灌胃4周效果较为满意。
3.2 实验结果表明,益智仁对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏、脾脏、胸腺指数均有显著改善,但对肾脏作用盐炙品较生品明显增强;对模型大鼠肾小球、肾小管和肾间质病变与模型组相比,生品和盐炙品均有明显改善作用,但在电镜下观察,盐炙品对肾小管坏死或萎缩、代偿扩张及上皮细胞水肿改善作用较生品强,这与益智仁盐炙入肾,温肾缩尿作用增强的传统认识一致,且进一步验证了益智仁温肾缩尿物质基础是“石油醚部位+食盐”的正确性。
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