前列安通胶囊质量标准研究

刘 勇 韩桂茹 赵志军 安丽娜

(河北省人民医院药学部，河北 石家庄 050051)

前列安通胶囊为前列安通片［1］的改剂型产品，由黄柏、赤芍药、丹参、泽兰、桃仁、乌药、王不留行和白芷组成。改剂型后，处方不变，将片剂制成胶囊剂。根据国家对改剂型品种的要求，重新对质量标准进行提高和简化研究，增订了丹参的薄层鉴别，并对原黄柏和赤芍药的薄层鉴别进行了修订，采用同一样品溶液，将3味药材调整在同一块薄层板上检出。还将丹参中含量低微的单一原儿茶醛［2］定量测定修订为高含量的盐酸小檗碱［3］及丹酚酸 B［3］，方法简便、快捷、实用，结果如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 日本岛津高效液相色谱(HPLC)仪，配有LC－20 AT泵、SPD－M20A二极管阵列检测器、LC－solution色谱工作站;色谱柱:迪马 dimonsil色谱柱(5 μm，4.6 mm ×150 mm)。

1.1.2 药品与试剂 前列安通胶囊(批号 050301、11548001、11548002、11548003)及处方中药材由承德燕峰药业股份有限公司提供;对照药材:丹参(批号120923－200006)、黄柏(批号 121510－200703)、赤芍药(批号121092－200402)，盐酸小檗碱(批号 110713－200911，含C20H18ClNO486.8%)，丹酚酸 B(批号111562－200302)均购自中国药品生物制品检定所。流动相所用乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂、试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别 取前列安通胶囊内容物1 g，加甲醇5 mL，超声处理6 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1 g，赤芍药和丹参对照药材各0.3 g，分别加甲醇3 mL，超声处理6 min，取上清液作为对照药材溶液。吸取上述4种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水(12∶2∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。结果显示，供试品色谱中，在与黄柏对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。再喷以5%香草醛硫酸溶液－乙醇(1∶6)混合溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下随即观察。结果显示，供试品色谱中，在与丹参和赤芍药对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。经空白验证，空白样品(不含黄柏，或赤芍药，或丹参的样品)无干扰(见封3，图1、2)。

2.2 盐酸小檗碱含量测定 黄柏系指川黄柏，为前列安通胶囊处方中的君药，主含盐酸小檗碱，为抗菌消炎、清热解毒的有效成分，且含量比较高，又是以药材原粉的形式加入，其质量的好坏对产品质量具有举足轻重的作用，所以对黄柏的有效成分进行了含量测定。

2.2.1 色谱条件 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈－甲醇－0.1%磷酸(17∶13∶70);检测波长:265 nm;柱温:40℃;流速:1.0 mL/min;理论板数:按盐酸小檗碱峰计算不低于2 000。

2.2.2 溶液制备

2.2.2.1 对照品溶液制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加含0.2%盐酸的70%甲醇溶液制成每 mL含12 μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2.2 供试品溶液制备 取装量差异项下的前列安通胶囊内容物，研细，取0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加含0.2%盐酸的70%甲醇溶液25 mL，称定质量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)15 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2 mL，置10 mL量瓶中，用含0.2%盐酸的70%甲醇溶液，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。

2.2.2.3 空白样品制备 取不含黄柏的样品，按2.2.2.2项下制备方法，制备空白样品溶液。

2.2.3 样品的测定 取上述对照品溶液、供试品溶液及空白溶液各10 μL，分别注入HPLC仪，按照2.2.1项下色谱条件测定，观察空白样品在盐酸小檗碱峰保留时间处有无干扰。以外标一点法计算含量，计算相对标准偏差(RSD)。结果显示，对照品溶液与供试品溶液色谱峰保留时间一致，空白样品无干扰，见图3、4、5，含量测定专属。3批前列安通胶囊样品中盐酸小檗碱含量为5.74～5.84 mg/粒，RSD 为 0.65% ～0.75% ，见表 1。

表1 前列安通胶囊中盐酸小檗碱含量测定结果

图3 盐酸小檗碱对照品HPLC图

图4 前列安通样品HPLC图

图5 空白样品HPLC图

2.2.4 测定波长选择 以波长265 nm作为测定波长。

2.2.5 线性关系考察 取每 mL含盐酸小檗碱0.012 6 mg的溶液，分别进样 2、5、10、15、20 μL，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。计算回归方程。回归方程为:Y=4 560 820.7X－3 366，r=0.999 999。结果显示，盐酸小檗碱进样量在0.025 2～0.252 0 μg，与峰面积呈良好的线性关系。见图6。

图6 盐酸小檗碱线性关系图

2.2.6 精密度试验 取每mL含盐酸小檗碱0.012 6 mg的对照品及相应的供试品溶液，各进样5次，每次8 μL，测定盐酸小檗碱峰面积，计算RSD。结果显示，盐酸小檗碱平均峰面积为453 528，RSD=0.89%;供试品中盐酸小檗碱平均峰面积为386 497，RSD=0.19%。说明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取2.2.6项下对照品溶液及供试品溶液，继续每隔6 h向HPLC仪进样，考察样品24 h内稳定性。结果显示，对照品盐酸小檗碱RSD=0.92%，供试品RSD=0.26%。说明对照品及供试品在24 h内稳定。

2.2.8 回收率试验 采用加样回收试验。取已知含量的同一批前列安通胶囊9份(批号11548002)，每份0.03 g，按高、中、低剂量，加上一定量的对照品，2.2.2.2 项下，进行提取、制备、测定，计算回收率。结果显示，盐酸小檗碱平均回收率为99.60%，RSD=0.69%。见表2。

表2 样品中盐酸小檗碱回收率试验结果

2.2.9 重复性试验 以高、中、低剂量，取同一批前列安通胶囊(批号:11548002)9 份，按 2.2.2.2 及 2.2.1 项下，进行提取、制备、测定，计算RSD。结果显示，盐酸小檗碱平均含量为16.32 mg/g，RSD=0.57%。说明方法重现性良好。见表3。

表3 盐酸小檗碱含量重复性试验结果

2.2.10 非缓冲盐流动相体系在含盐酸小檗碱药材中的应用 采用含量测定方法中的非缓冲盐流动相体系，还对黄柏、黄连中的盐酸小檗碱进行了定量测定。结果显示，本流动相对2种药材中的盐酸小檗碱波峰也分离良好。见图 7、8。

图7 黄柏药材HPLC图

图8 黄连药材HPLC图

2.3 丹酚酸B含量测定 丹参为前列安通胶囊处方中的主药，提取工艺为水提取。其脂溶性有效成分以丹参酮ⅡA为指标，水溶性成分以丹酚酸B为指标。故本制剂为与《中华人民共和国药典》的测定指标一致，测定制剂中的丹酚酸B含量，以控制提取工艺的稳定性及制剂质量。

2.3.1 色谱条件 色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈－甲醇－甲酸－水(10∶30∶1∶59);检测波长:238 nm;柱温:室温;流速:1.0 mL/min;理论板数:按丹参酚酸B峰计算不低于2 000。

2.3.2 溶液制备

2.3.2.1 对照品溶液制备 精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇配制成原液，再取一定量原液，加50%甲醇制成每mL含丹参酚酸B 0.02 mg溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.3.2.2 供试品溶液制备 取装量差异项下前列安通胶囊内容物，研细，取0.2 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加50%甲醇18 mL，超声处理3 min，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.2.3 空白样品制备 取不含丹参的样品，按2.3.2.2项下制备方法，制备空白样品溶液。

2.3.3 样品测定 取上述对照品、供试品及空白溶液各10 μL，分别注入 HPLC 仪，按照 2.3.1 项下色谱条件测定，观察空白样品在丹酚酸B峰保留时间处有无干扰。以外标一点法计算含量，计算RSD。结果显示，对照品溶液与供试品溶液色谱峰保留时间一致，空白样品无干扰，见图9、10、11，含量测定专属。3批前列安通胶囊样品中丹酚酸 B 含量为 1.32～1.41 mg/粒，RSD 为 1.09% ～1.21%，见表 4。

表4 前列安通胶囊中丹酚酸B含量测定结果

图9 丹酚酸B对照品HPLC图

图10 前列安通样品HPLC图

2.3.4 测定波长选择 采用 SPD－M20A二极管阵列HPLC仪，对丹酚酸B对照品和前列安通样品中相应色谱峰分别进行光谱扫描。结果显示，丹酚酸B有4个吸收峰，分别在238 nm、254 nm和288 nm、238 nm和288 nm处波峰最灵敏，且对照品与供试品波峰基本一致，因此采用最灵敏的波峰238 nm为测定波长。

图11 空白样品HPLC图

2.3.5 线性关系考察 取每mL含0.054 3 mg丹酚酸B溶液，分别进样 2、4、8、16、25、30 μL，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程。回归方程为:Y=1 395 836.5X+4006，r=0.999 992。结果显示，丹酚酸 B 进样量在0.108 6 ～1.629 μg，与峰面积呈良好的线性关系。见图12。

图12 丹酚酸B线性关系图

2.3.6 精密度试验 取每mL含21 μg丹酚酸B的对照品及相应供试品溶液，各进样5次，每次20 μL，测定丹酚酸B峰面积，计算RSD。结果显示，丹酚酸B平均峰面积为775 229，RSD=0.46%;供试品中丹酚酸B平均峰面积为625 332，RSD=0.59%。说明仪器精密度良好。

2.3.7 稳定性试验 取2.3.6项下对照品溶液及供试品溶液，继续每隔5 h向HPLC仪进样，考察样品12 h内稳定性。结果显示，对照品丹酚酸B RSD=0.46%，供试品RSD=0.41%。说明对照品及供试品12 h内稳定。

2.3.8 重复性试验 以高、中、低剂量，取同一批前列安通胶囊(批号050301)样品 9 份，按 2.3.1 及 2.3.2.2 项下，进行提取、制备、测定，计算RSD。结果显示，丹酚酸B平均含量为2.14 mg/g，RSD=0.53%。说明方法重现性良好。见表5。

表5 丹酚酸B含量重复性试验结果

2.3.9 回收率试验 采用加样回收试验。取已知含量同一批前列安通胶囊(批号050301)样品9份，每份0.06 g，按高、中、低剂量，加一定量丹酚酸 B，按 2.3.2.2 项下，进行提取、制备、测定、计算回收率。丹酚酸B平均回收率为99.12%，RSD=0.48% 。见表 6。

表6 样品中丹酚酸B回收率试验结果

3 讨论

3.1 本研究采用同一简单的甲醇超声样品与对照药材溶液，在同一块薄层板上，在不同的检视条件下同时鉴别了黄柏、赤芍药和丹参药材。方法简便，斑点清晰，丹参的樱红色斑点等为首次报道。

3.2 文献报道，盐酸小檗碱的含量测定方法有HPLC法［4］、分光光度法［5］及薄层扫描法［6］等。使用频率最高的是HPLC法。目前，生物碱类的HPLC测定，如苦参碱、氧化苦参碱、麻黄碱、马钱子碱、乌头碱等，其流动相基本都是缓冲盐体系，不仅流动相的配制麻烦，在流动相中还要添加十二烷基硫酸钠，或磺酸钠，或四氢呋喃等物质［3，7］，溶质增多，密度增大，压力增高，很易损坏色谱柱与仪器检测系统。在色谱柱冲洗过程，稍有不慎色谱柱的柱效降低很快，波峰发生变形。测定完毕后，色谱柱的冲洗过程也比较麻烦。本研究为克服上述弊端，通过探讨，首次建立了采用非缓冲盐流动相体系，测定药材及制剂中盐酸小檗碱含量，方法简便快捷，波峰分离良好。非缓冲盐流动相体系的探讨成功，结束了盐酸小檗碱测定的缓冲盐时代，延长了色谱柱的使用寿命，为生物碱类的快捷、无污染、低成本测定发挥了重要作用。

3.3 前列安通胶囊提高后的质量标准与原标准比较，增加了君药黄柏的含量测定，含量限度定为盐酸小檗碱不得少于4.8 mg/粒。并将丹参中含量低微的指标成分原儿茶醛不得少于0.018 mg/粒，修订为高含量的有效成分丹酚酸B不得少于1.0 mg/粒。以君、臣药中高含量有效成分为指标进行质量控制，有效提高了含量测定实际意义。

［1］ 国家药品食品监督管理局.国家中成药标准汇编:外科妇科分册［M］.2002:100.

［2］ 韩桂茹，张少杰，姚振林，等.丹七片中4种成分的HPLC定量测定［J］.中成药，2005，27(11):1259－1263.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版:一部［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:286－287，70－71，300－301.

［4］ 周家才，梁玉梅，邱震.HPLC法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量［J］.安徽医药，2009，13(3):267－269.

［5］ 王大杰.荧光分光光度法测定小檗碱的含量［J］.成都大学学报:自然科学版，2005，24(4):262－264.

［6］ 杨辉.TLCS法测定复方黄连颗粒中盐酸小檗碱的含量［J］.安徽医药，2006，10(1):25－26.

［7］ 国家食品药品监督管理局国家药品标准.YBZ 06102009［S］.