hTERT mRNA联合CYFRA21-l、NSE在肺癌检测中的应用研究

刘险峰 孙鲁山 杨治国

(1.包头市卫生局; 2.包头医学院第三附属医院 内蒙古包头 014030)

肺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，肺癌的早期诊断对于患者具有重大意义，血清肿瘤标志物种类较多，其中多种肿瘤标志物与肺癌有关，单一肿瘤标志物检测肿瘤敏感性、特异性不理想。有学者认为多指标联合检测能提高肺癌诊断的阳性率[1]，有助于提高肿瘤检测的诊断率及疗效检测[2]。本文通过检测肺癌组与对照组的人体外周血端粒酶催化亚单位(hTERT mRNA)、细胞角蛋白-19片断抗原(CYFRA21.1)与神经元特异性烯醇化酶(NSE)，对上述3种肿瘤标志物在肺癌诊断中的联合应用做一探讨。

表1 肺癌组与对照组患者3种肿瘤标志物表达水平[(±s),μg/L]

表1 肺癌组与对照组患者3种肿瘤标志物表达水平[(±s),μg/L]

分组 例数 hTERT mRNA* CYFRA21-l NSE肺癌组177 (11.74±5.34)* (7.04±7.70)* (19.57±9.85)*对照组174 1.28±2.46 2.62±1.06 11.58±5.70 P值0.00 0.00 0.00

表2 肺癌组与对照组患者3种肿瘤标志物阳性率比较

表3 肺癌组与对照组患者3种肿瘤标志物表达水平[(±s),μg/L]

表3 肺癌组与对照组患者3种肿瘤标志物表达水平[(±s),μg/L]

组别 例数 hTERT mRNA* CYFRA21-l NSE鳞癌84 11.27±5.42 (9.83±8.77)* (19.44±11.05)*腺癌 39 12.52±5.60 6.22±6.41 19.83±8.25小细胞癌54 11.91±5.05 3.31±4.49 (23.58±9.08)*P值0.467 0.00 0.039

表4 不同组合联合检测对肺癌患者的敏感性、特异性及有效性

1 资料与方法

1.1 一般资料

肺癌组:收集包头医学院第三附属医院2006年1月至2010年12月住院经痰或胸腔积液的脱落细胞检查、纤维支气管镜检查、手术或经皮肺穿刺病理证实的肺癌患确诊患者177例，排弃肺内为转移癌与已接受过放、化疗治疗的肺癌患者。所有患者行胸部CT、ECT全身骨扫描、头颅CT及腹部B超(肝胆系及肾上腺)检查，筛检远处及局部浸润病灶。其中男105例，女72例，年龄42～89岁，平均62.3岁。临床病理类型:鳞癌84例，腺癌39例，小细胞肺癌54例。

对照组:收集包头医学院第三附属医院2005年1月至2010年12月住院的非肺癌者174例，男99例，女75例，年龄40～85岁，平均61.4岁，其中肺炎性假瘤17例、肺良性肿瘤12例、慢性阻塞性肺疾病49例、肺部真菌及细菌性肺炎27例，肺结核39例，肺部无异常健康体检者30例。

1.2 样本采集

3组受试者均在就诊时空腹采集静脉血两管，分别为A、B。

A采集受试者空腹静脉血5mL，EDTA-Na抗凝，3h内经Ficoll分离液分离，反复离心、洗涤细胞，末次离心后弃上清，-70℃低温冰箱保存。

B采集受试者空腹静脉血5mL，不抗凝，-4℃，1000r/min低温离心后，分装血清，置-70℃保存。

1.3 仪器与试剂

实时荧光定量P C R仪(F Q D-33A，杭州博日)，化学发光免疫分析仪(Cobase60，罗氏)，电泳仪(Bio-Rad)，紫外分光光度仪(DU640，Beckman)，紫外透射反射分析仪(W P-9 2-1，永嘉上塘教学仪器厂)，凝胶分析仪(VILBER LOURMAT)。

N S E化学发光免疫试剂盒(罗氏)，CYFRA21-1化学发光免疫试剂盒(罗氏)，Simply P总RNA提取试剂盒(杭州博日)，SYBR Green I嵌合荧光法实时RT-PCR试剂盒(大连宝生物)，植物血凝素-P(Sigma-Aldrich公司)。

引物依据Genebank中hTERT、MUCl、GAPDH序列，选定目标片段，并由上海生工生物工程合成。

1.4 测定方法与统计

电化学发光免疫法检测CYFRA21-1、NSE，荧光PCR定量检测法测定(hTERT)mRNA。统计软件使用SPSS，测定结果以以均数±标准差(±s)表示，组间比较使用t检验，计数比较使用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为具有显著性差异。

2 结果

2.1 肺癌组与对照组3种肿瘤标志物表达水平比较

分析比较肺癌组、对照组3种血清肿瘤标志物水平，结果见表1。

*以2—△△Ct表示样品中目的基因初始cDNA相对表达量

*hTERT mRNA外周血表达水平在肺癌组中高于对照组，有显著性差异(P＜0.01)

*CYFRA21-l 血清表达水平在肺癌组中高于对照组，有显著性差异(P＜0.01)

*NSE血清表达水平在肺癌组中远高于对照组，有显著性差异(P＜0.01)

2.2 肺癌组与对照组3种肿瘤标志物阳性率比较

分析比较肺癌组、对照组3种血清肿瘤阳性率，结果见表2。

*hTERT mRNA外周阳性率在肺癌组中高于对照组，有显著性差异(P＜0.01)

*CYFRA21-l阳性率在肺癌组中高于对照组，有显著性差异(P＜0.01)

*NSE阳性率在肺癌组中远高于对照组，有显著性差异(P＜0.01)

2.3 肺癌组不同病理类型患者3种肿瘤标志物水平比较

分析比较肺癌组不同病理类型患者3种肿瘤标志物水平，结果见表3。

*以2—△△Ct表示样品中目的基因初始cDNA相对表达量

*CYFRA21-l血清中表达水平在鳞癌患者中高于腺癌和小细胞癌(P＜0.05)

*NSE血清表达水平在小细胞癌患者中高于鳞癌和腺癌(P＜0.05)

2.4 不同组合的联合检测对肺癌患者的敏感性、特异性及有效性

分析比较不同组合联合检测对肺癌患者的敏感性、特异性及有效性，结果见表4。

3 讨论

肿瘤标志物检测具有取材简便、方法客观、便于筛查的特点，成为肺癌早期发现、早期诊断中的研究热点。但由于多数肿瘤标志物特异度和灵敏度往往不能满足临床要求，因此通过单一标记物检测对肺癌的诊断价值有限。目前研究热点一方面着眼于发现新的肿瘤标志物，另一方面倾向于数种标记物联合检测，以期提高肺癌诊断的灵敏度和特异度，达到对肺癌早期诊断的目的。

3种肿瘤标志物肺癌组阳性率依次为hTERT mRNA(70.62%)、NSE(66.10%)、CYFRA21-l(53.11%)。hTERTmRNA、CYFRA21.1、NSE单独检测时的敏感性在肺癌组与对照组间有显著性差异，3种肿瘤标记物对肺癌患者的检测以hTERT mRNA敏感性最高，具有较高诊断价值。在上述3种肿瘤标志物联合检测中，hTERT mRNA+CYFRA21.1+NSE联合检测肺癌敏感性大大增高，特异性减低不明显，有效性最高为69.92%，在上述几种联合检测中价值最高。其余组合敏感性特异性有效性区分相对不明显，提示其余组合检测肺癌价值亦相对较低。

[1] Raso MG,Wistuba II.Molecular pathogenesis of early-stagenon-small cell lung cancer and a proposal for tissue banking to facilitate identi fi cation of new biomarkers[J].J Thorac Oncol,2007,2(7 Suppl 3):128～135.

[2] 吴建民.对肿瘤标志物的再认识[J].中华检验医学杂志，2005，28(1):11～13.