XRCC1 194Arg/Trp基因多态与晚期乳腺癌患者铂类方案近期疗效的相关研究

廖瑜倩 万以叶 彭丽香 芦 珊

乳腺癌是中国女性最常见的恶性肿瘤。随着人们对乳腺癌的认识和重视，越来越多的患者诊断时处于疾病早期，通过手术及辅助化疗、放疗、内分泌治疗能够达到长期生存甚至治愈。但是仍有相当比例的乳腺癌患者出现复发转移，需要接受全身化疗。对乳腺癌有效的化疗药物很多，包括紫杉类、铂类、吉西他滨、长春瑞滨、卡培他滨等，如何选择最佳化疗方案，减少不必要的化疗损害显得十分重要。铂类是继蒽环类和(或)紫杉类药物失败之后常常选择的药物，多与长春瑞滨、吉西他滨、紫杉类药物联合使用，单药有效率为20%～30%[1,2]。由于顺铂的致吐性强、需要水化等不良反应，曾经一段时间在乳腺癌患者中的使用有所减少。但是近几年，随着三阴性乳腺癌的提出，以及铂类药物在三阴性乳腺癌中显示出较高的有效率，铂类在乳腺癌治疗中的重要性再次得到关注[3～5]。

碱基切除修复主要修复由氧化、甲基化及放射线引起的小的碱基加合物，XRCC1是碱基切除修复系统(base excision repair，BER)的重要成员，在维持基因组稳定性过程中起关键作用。已有许多研究显示XRCC1 194Arg/Trp基因多态与肿瘤的易感性或化疗敏感性相关[6～8]，但是在乳腺癌患者中的研究很少，我们希望通过本研究明确该基因多态是否与铂类方案治疗的晚期乳腺癌患者的疗效相关，发现可能预测铂类方案疗效的生物标志物，为个体化治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料

2009年9月至今，我院对56例晚期乳腺癌患者采用含铂类(顺铂或卡铂)药物一线治疗。患者均经组织学或细胞学检查确诊，治疗前具有可测量的靶病灶。随访截止至2012年6月。采用实体瘤疗效评价标准(RECIST标准)评价近期疗效，分为临床完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、 疾病稳定(SD)和疾病进展(PD)。根据最佳治疗反应将患者分为临床获益组和非临床获益组。临床获益组包括达到完全缓解、部分缓解和疾病稳定至少6个月的患者。非临床获益组包括疾病稳定小于6个月或疾病进展的患者。本研究中无进展生存期(PFS)定义为治疗开始至疾病出现进展的时间，是反映近期疗效的另一个重要指标。

1.2 基因多态分析

所有患者治疗前抽取2 ml外周静脉血，提取DNA。PCR扩增含Arg194Trp多态位点的DNA片断，引物序列为5’- GCCAGGGCCCCTCCTTCAA和5’- ACCCTCAGACCCACGAGT，产物大小为 485 bp。

将PCR产物与限制性核酸内切酶PvuII于37℃共同温育过夜。酶切产物于2%琼脂糖凝胶电泳下进行检测，应用GDS-8000凝胶成像分析系统观察并记录结果。第194密码子Arg Trp突变后可被PvuII识别，酶切产物有396 bp和89 bp 2个片段，杂合子则产生485 bp、396 bp和89 bp 3个片段，而野生型只有485 bp 1个片段。

1.3 统计学方法

采用 χ2检验分析临床获益组和非临床获益组各基因型分布的差异。用比值比(odds ratios,ORs)及其95%可信区间(confidence intervals,CIs)表示相对风险度，ORs及其95%CIs应用非条件性logistic回归模型计算。所有的统计检验均为双侧概率检验，P<0.05为有统计学显著性差异。采用Kaplan-Meier 法进行单因素生存分析，组间比较采用Log-rank 检验。均应用SPSS 13.0统计软件进行分析。

2 结果

2.1 临床病理特征及治疗情况(表1)

患者均为女性，均为浸润性导管癌。确诊时中位年龄42岁(25～62岁)，复发转移时中位年龄47岁(27～63岁)。36例患者(64.3%)原发灶激素受体阳性，44例患者(78.6%)原发灶HER2呈阴性，三阴性患者16例(28.6%)。手术时局部晚期患者较多，Ⅲ期患者占57.1%。40例患者(71.4%)未接受含紫杉类药物辅助治疗。

一线方案包括多西紫杉醇或紫杉醇联合铂类、吉西他滨联合铂类以及长春瑞滨联合铂类。2例CR，14例PR，7例SD，5例PD，全组患者缓解率为57.1%。7例SD患者中，2例患者疾病稳定维持6个月以上，全组患者临床获益率为64.3%。本组患者中位PFS为10个月。

表1 56例乳腺癌患者临床病理特征及治疗情况

2.2 XRCC1 194 Arg/Trp基因多态与患者临床获益及无进展生存期的关系

XRCC1 194 Arg/Trp的3种基因型Arg/Arg、Arg/Trp和Trp/Trp在临床获益组和非临床获益组分布频率分别为30.6%、55.6%、13.8%和55.0%、35.0%、10.0%。因病例数有限，将Trp/Trp和Arg/Trp联合分析，Trp/Trp+Arg/Trp基因型患者临床获益率高于Arg/Arg型，分别为73.5%和50.0%，经年龄、分期校正后，P值接近有统计学意义(P=0.055)，见表2。

采用Kaplan-Meier 法分析基因型与患者无进展生存期的关系，见表3。Trp/Trp+Arg/Trp基因型患者2年PFS为43.5%，Arg/Arg基因型患者2年PFS为34.1%，两者比较无显著性差异(P=0.460)。

表2 XRCC1 194 Arg/Trp基因多态与患者临床获益的关系(例，%)

经年龄、分期校正，a为Arg/Trp + Trp/Trp与Arg/Arg比较

表3 XRCC1 194 Arg/Trp基因多态与患者无进展生存期的关系

3 讨论

化学药物治疗是无病生存期短、肿瘤负荷大、存在内脏转移或受体阴性等晚期乳腺癌患者的主要治疗手段，但是肿瘤细胞对化疗的原发或继发性耐药常导致化疗失败。许多学者一直以来都在探索耐药的机制、寻找疗效预测指标[9,10]。铂类药物对肿瘤细胞的杀伤作用主要通过与细胞内亲核的DNA结合，形成Pt-DNA加合物，导致DNA的链间交联或链内交联，引起DNA损伤，从而导致细胞死亡。DNA损伤修复能力的差异可能是决定铂类药疗效的重要因素。

基因多态是指基因组序列出现的不同形式的变异，如插入、缺失、不同数目串联重复和单核苷酸多态性等。这些变异决定了不同个体表型的千差万别；也决定了不同个体对疾病易感性和对药物治疗敏感性的差异。XRCC1是碱基切除修复系统的重要成员，其编码区第194密码子的基因多态可能影响XRCC1蛋白的正常功能，降低DNA修复能力[11]。已有研究报告XRCC1的基因多态与乳腺癌的易感性相关[12,13]。对10项XRCC1基因多态与乳腺癌易感性的相关研究进行荟萃分析，结果显示Arg194-Gln399 单体型发病风险略高于 Arg194-Arg399 (OR = 1.07,95% CI:1.01～1.14)。在欧洲国家进行的研究未发现这一相关性，仅亚洲国家的研究显示，Arg194-Gln399 单体型可能预测乳腺癌的患病风险[14]。

XRCC1基因多态与乳腺癌铂类药物敏感性的研究未见报道。但是在非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈部肿瘤、胃癌中均有研究显示该基因多态与铂类敏感性相关[6,7,15]。在一项包括105例NSCLC患者的研究中，患者经含顺铂或卡铂方案化疗2～3个周期后评价疗效。XRCC1 194 Arg/Trp 或Trp/Trp 患者化疗有效率高于Arg/Arg基因型患者(43.1% 比20.3%；OR 2.97，95% CI 1.15～7.72，P< 0.05)，XRCC1 399 Arg/Arg基因型患者有效率高于Arg/Gln 和Gln/Gln 基因型患者(41.5%比21.2%，OR 2.65，95%CI：1.03～6.87，P<0.05)。XRCC1 194Arg/Trp和399Arg/Arg 基因型有协同作用，194Arg/Trp和399Arg/Arg基因型患者有效率为66.7%，明显高于其他基因型患者(有效率20.0%～23.1%,P<0.001)[16]。Sun等研究纳入82例接受含顺铂或卡铂的方案化疗的进展期NSCLC患者，发现携带XRCC1 194Arg/Trp基因型的患者，铂类方案化疗的有效率显著高于其他基因型患者(风险比为0.429；95% CI 0.137～1.671;P=0.035)[17]。

本组研究结果也显示，携带含Trp的基因型患者临床获益率高于Arg/Arg型，这与国内外其他研究的结果基本一致，提示该基因多态也可能作为晚期乳腺癌患者铂类方案有效性的预测指标。后续我们还将扩大病例数进行进一步的验证。由于铂类药物不良反应较多，这一结果对于指导晚期乳腺癌患者化疗方案的选择具有重要意义。

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