接骨膏治疗类风湿关节炎的实验研究

王建辉

湖南省妇幼保健院检验科(湖南 长沙 410008)

接骨膏是根据长江三峡地区民间中医郑贤群先生验方筛选整理而成[1]，主要成分为独正杆、刺老苞、刺五加三味，有消肿止痛、续经、接骨、生肌、抗炎、活络、正骨等功效，大量临床观察表明，该中药适用于各类跌打损伤、关节肿痛、尤其是对类风湿关节炎患者有显著疗效，同时该膏剂使用方便，无毒副作用。现阶段接骨膏已广泛用于类风湿关节炎的治疗，但是对其治疗效果及作用机制还有待于进一步研究。为了探讨接骨膏对风湿关节炎的治疗效果及作用机理，本研究应用接骨膏治疗弗氏完全佐剂诱导建立的类风湿关节炎模型大鼠，观察其临床疗效及其作用机制。

1 材料和方法

1.1实验动物及分组健康Wirst大鼠(由湖南省医学实验动物中心提供)30只，体重200～220 g，随机分为3组，每组10只，即关节炎模型组、接骨膏(5 g/kg·bw)实验组(以下简称实验组)、雷公藤多苷片(6 g/kg·bw)治疗组(以下简称治疗组)。

1.2药品试剂接骨膏制备：分别取独正杆、刺老苞、刺五加根皮晒干，捣碎或切成小块，按独正杆∶刺五加∶刺老苞=2∶1∶1的比例混合加水煎煮，采用膏滋法制备成煎膏剂(每毫升含生药1 g)，成品为棕色稠膏，味甜微苦；雷公藤片由黄石市制药厂生产(批号:040318)，雷公藤多苷片临用时调制(每片含提取物10 mg)；弗氏完全佐剂(SIGMA产品)、IL-8试剂盒由解放军总医院科技开发中心放射免疫所提供；IL-10试剂盒由深圳晶美生物工程公司提供。

1.3弗氏完全佐剂大鼠模型制备与检测方法实验大鼠均在左后足跖皮内注射费氏完全佐剂(0.2 ml/只)致炎，于致炎第8 d灌胃给药;实验组给药剂量5 g/kg·bw，同时关节炎局部外敷接骨膏，关节炎模型组给同等容积生理盐水；治疗组给药剂量6 g/kg·bw，每天给药一次，共21 d。关节炎指数[2]评价(Arthritisindex AI)：记录实验大鼠佐剂性关节炎的严重程度分5级，0级：无红肿；1级：足小趾关节红肿；2级：趾关节、足跖部均红肿；3级：踝关节以下均红肿；4级：包括踝关节，全部红肿。初次免疫后7 d起，每7 d评分1次。用排水法测足爪体积，以足爪肿胀抑制率观察接骨膏对病变的抑制作用。采用放免法检测病变小鼠外周血IL-8、IL-10的含量。取小鼠继发病变左侧踝关节，病理学光镜观察关节滑膜组织、炎性细胞浸润、软骨破坏及骨侵蚀情况。

2 结果

2.1关节炎指数比较分别记录实验组、治疗组大鼠给药前(免疫后7 d)、给药7 d、14 d、21 d的关节炎指数及同期模型组大鼠的关节炎指数(见表1)，显示治疗前模型组、实验组、治疗组关节炎指数无明显区别(P>0.05)。给药后不同时期，实验组及治疗组关节炎指数均明显低于模型组，有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。实验组和治疗组给药后与给药前比较关节炎指数均有显著性差异(P<0.01)，实验组与治疗组之间无显著性差异(P>0.05)。

2.2关节组织病理学观察模型组：踝关节出现明显病变，关节软骨面毛糙凹凸不平、缺损，关节腔变窄，且滑膜组织不同程度增生，滑膜内有大量淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和浆细胞浸润，表面滑膜组织可见灶性坏死，有的滑膜绒毛形成突向关节腔内；实验组及治疗组：病变关节部分可见到不同程度的轻、中度慢性炎症,且软骨表面欠滑,未见明显软骨破坏及骨侵蚀，滑膜细胞仅轻度增生,且排列整齐、细胞形态规则,见少量炎性细胞浸润。

表1 给药前后各组大鼠关节炎指数比较

与同期模型组比较ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与同组给药前比较*P<0.01

2.3对大鼠继发性炎症反应的影响给药后不同时间各组大鼠足肿胀度比较可见(表2),实验组和治疗组在给药7 d后与模型组比较无明显差异(P>0.05),但在给药14 d和21 d后大鼠肿胀度与模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。实验组和治疗组在给药后3个不同时期与给药前比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),实验组和治疗组无差异(P>0.05)。

表2 不同时间各组大鼠患侧足肿胀度比较

与同期模型组比较ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与同组给药前比较*P<0.05,**P<0.01

2.4对大鼠外周血细胞因子的影响经灌胃用药3周后，实验组和治疗组大鼠血清中IL-8水平较模型组和给药前明显降低(P<0.05，P<0.01)，而IL-10水平较模型组和给药前明显升高(P<0.01)，且实验组和治疗组无显著差异(见表3)。

3 讨论

RA是一种以慢性炎症为特征的免疫性疾病，是常见的关节病变[3]。主要侵犯全身各处关节，呈多发性和对称性慢性增生性滑膜炎，由此引起关节软骨和关节囊的破坏，最后导致关节强直畸形。证属中医“痹症”。其病因营为卫失调 ，腠理空疏 ，正气虚弱,风寒湿邪侵入经络，引起气血不畅，致使筋骨关节肿胀疼痛，屈伸不利，久之致肾虚骨枯等病症。目前，RA治疗目的主要以缓解症状，控制病情进展，预防关节畸形为主。

表3 各组大鼠外周血IL-8、IL-10的含量

与同期模型组比较ΔP<0.01；*P<0.05,与同组给药前比较**P<0.01

现代药理证明，中草药接骨膏方中的主药能有效改善微循环，消肿止痛，扩张血管，降低毛细血管通透性，减少炎性渗出，促进炎性渗出吸收；而应用于皮下则有活血散瘀消肿止痛之功效。我们采用内服加外用的模式用药后发现，实验组大鼠关节炎指数明显降低,足趾肿胀程度也大大减轻,并且能有效控制大鼠炎症细胞浸润、关节狭窄、软骨和骨的侵蚀破坏，与模型组及治疗前比较均有显著性差异，达到与雷公藤片相似的治疗效果。

细胞因子系维持免疫细胞功能协调运转，相互联络的“信使”，其促炎因子与抗炎因子间的失衡[4]是导致肌体组织免疫损伤和“炎症瀑布”的主要因素。IL-8是免疫和炎症反应的重要调节因子，可以在体内趋化中性粒细胞并改变其受体[5],诱导各种炎症性疾病[6，7]的发生,在类风湿性关节炎的发病过程中也起重要作用，同时IL-8的表达与其活性调控有利于炎症性疾病的治疗。IL-10由CD4+T细胞等分泌，是具有潜在抗炎作用的细胞因子，它可以抑制和终止炎症反应[8]。本实验在应用接骨膏后可见， IL-8活性的释放明显被抑制，而IL-10的水平显著升高，表明病变大鼠体内炎症受到明显抑制。

综上所述，中草药接骨膏对RA大鼠关节的原发性和继发性损害均有明显的抑制作用，表明本方具有良好的益气活血、通络止痛、祛风除湿和抗炎效应，这与该方临床上良好的抗炎消肿和镇痛作用相吻合，值得进一步深入研究。

[1]袁昌锦，付天明，刘敏，等.中草药接骨膏对家兔创伤性骨折愈合作用的实验研究[J].四川中医,2005，23(10)：34-35.

[2]张国恩,杨德华,钱玉中，等.痹康饮合剂治疗大鼠胶原性关节炎的实验研究[J].中成药,2006，28(5)：690-693.

[3]施桂英，栗占国．关节炎诊断与治疗[M]．北京：人民卫生出版社，2009：189-201.

[4]Imada A,et al.Coordinate upregulation of interleukin-8 and growth related gene product alpha is present in the colonic mucosa of inflammatory bowel[J].Scand J Gastroenterol,2001,36:854.

[5]Shebuski RJ,Kilgore KS.Rol of of inflammatory mediators in thrombogenesis[J].Pharmacol Exp Ther,2002,300(3):729-735.

[6]左和宁，杨伟峰，郑晓辉，等.白细胞介素8在溃疡性结肠炎患者肠粘膜中的表达[J].实用预防医学,2010,17(10)：1947-1949.

[7]唐华,刘彩云,王旭霞,等.白介素-8基因-251A/T多态性与急性胰腺炎的相关性研究[J].现代生物医学,2010,20(3):3866-3868.

[8]Peter J,Barnes.The cytokine network asthma and chronic obstructive in asthma and chronic obstructive ulmonarydisease[J].J.Clin.Invest,2008,118(11):3546-3556.