不同产地青果中没食子酸含量的比较研究

廖 婉,黄金珠,王继森,徐晓秋,游 宇,傅超美

(1.成都中医药大学药学院药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地

中药材标准化教育部重点实验室,四川成都 611137;2.成都市食品药品检测中心,四川成都 610045)

0 引 言

青果为橄榄科植物橄榄(Canarium albumRaeusch)的干燥成熟果实,具有清热解毒、利咽、生津等功效,可用于治疗咽喉肿痛、咳嗽痰黏、烦热口渴、鱼蟹中毒等症[1].青果主产于四川、福建、广东等地,但全国各地品种繁多,划分标准不明确,容易混淆.青果在我国南方各地民间用量很大,它既为可食鲜果,又为药膳、饮品、中药的常用资源[2].随着科研人员对青果食用与药用研究的深入,青果的应用开发呈现出巨大的发展潜力.目前,1963年版～2005年版《药典》均无青果指标性化学组分的定性和定量分析方法,而2010年版《药典》也只增加了鉴别(理化鉴定)、检查和浸出物3项,其含量测定尚为空缺,质量评价体系不完善,难以科学控制青果内在质量,其资源的开发与利用受到很大限制.研究发现,青果中没食子酸是其主要有效成分[3],据此,本研究采用高效液相色谱法对26批不同产地青果中没食子酸的含量进行比较研究,以期为青果的质量控制和合理开发利用提供科学依据.

1 仪器与材料

1.1 仪 器

实验所用仪器包括:Waters 2695-2487高效液相色谱仪,Waters2487检测器,Empower Pro色谱工作站,色谱柱为 Thermo Hypersil BDS C18柱(250×4.6 mm,5μm);Mettler AE240电子分析天平(Mettler Inc.);FA1104电子分析天平(上海天平仪器厂); K Q-500E型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司);数显恒温水浴锅HH-4(国华电器有限公司).

1.2 材 料

表1 青果药材来源

实验所用材料包括:青果分别购于四川、福建、广东、云南、安徽等地药材市场或饮片公司,经鉴定为橄榄科植物橄榄的干燥成熟果实(见表1);没食子酸对照品(批号0831-9501,中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯(Fisher Inc.),水为超纯水,其余试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 对照品与供试品溶液制备

精密称取没食子酸对照品适量,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成0.104 mg/mL的对照品溶液.

精密称取青果药材粉末5 g,置锥形瓶中,精密加入80%甲醇溶液50 mL,称定重量,超声提取20 min,放冷,再称定重量,用80%甲醇溶液补足减失的重量,滤过,取续滤液5 mL至10 mL量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,滤过,得供试品溶液.

2.2 色谱条件

实验的色谱条件为:色谱柱为 Thermo Hypersil BDS C18柱(250×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇—0.1%磷酸(5∶95),流速1.0 mL/min,柱温30℃.检测波长254 nm,理论塔板数按没食子酸峰计应不低于2 000.在上述色谱条件下,样品溶液色谱图中未见其他组分和辅料对测定组分没食子酸的干扰(见图1).

图1 HPLC色谱图

2.3 线性关系考察

分别精密吸取没食子酸对照品溶液2、5、10、15、20μL注入高效液相色谱仪中,在上述色谱条件下测定,重复进样2次,记录色谱图,测定峰面积值.以峰面积平均值(y)对进样量(x)进行线性回归,绘制标准曲线,计算得到回归方程为,

数据表明,没食子酸在0.0208～0.208 mg·mL-1范围内呈现良好的线性关系.

2.4 精密度实验

精密吸取没食子酸对照品液,连续进样6次,其RSD%为0.24%.结果表明,实验所用仪器精密度良好.

2.5 稳定性实验

精密吸取供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12、18 h进样10μL,测定峰面积,其RSD为0.27%.结果表明,样品在18 h内稳定性良好.

2.6 重复性实验

平行精密称取同一批样品5份,按“2.1”项供试品溶液制备项下操作,分别进样10μL,计算求得平均含量为1.695 mg·g-1,其RSD为1.75%.结果表明,实验方法重复性良好.

2.7 加样回收实验

精密称取已知含量的样品(1.702 mg·g-1)6份,各约2.5 g,分别精密加入没食子酸对照品溶液(1.064 mg·mL-1)4 mL,按供试品项下操作并按含量测定方法进行测定,结果如表2所示.计算平均加样回收率为100.5%,其RSD为2.75%,表明样品回收率符合要求.

表2 加样回收率试验结果

2.8 样品测定

取26批不同产地青果制备的供试品溶液,按“2.2”项色谱分离条件,进样10μL,测定峰面积,计算含量,结果如表3所示.

3 结论与讨论

由表3数据可看出:26批青果中没食子酸的平均含量为1.752%,其中,没食子酸含量最高的是产自四川泸州合江甘雨村种植基地的青果,其没食子酸含量为2.293 mg·g-1,福建产的青果没食子酸含量次之,其他产地青果没食子酸含量也均超过了1.0 mg·g-1;产于四川和福建的青果,没食子酸含量普遍较其他产地高;产于四川的二白圆、自来圆、檀香和大梭子,云南的二白圆,安徽的檀香和大梭子,福建的自来圆、檀香和大梭子没食子酸含量较高,均高于2.0 mg·g-1.表3数据也显示:不同产地的青果中没食子酸的含量存在明显差异;同一产地,由于品种和采收期的不同,青果中没食子酸的含量也存在一定差异.

表3 没食子酸含量测定结果(n=3)

没食子酸是青果中含量较多的化学成分之一,研究人员通常以没食子酸作为指标成分对青果进行质量控制研究[4-5].本研究利用高效液相色谱法,对产于四川、福建、广东、云南、安徽等地所产青果测定了其没食子酸含量.实验结果表明,样品中各组分的色谱峰基本达到基线分离.该测定方法稳定、快速、重现性好、灵敏度高,实验数据可靠,可为《药典》下一步修订青果项下质量标准提供科学参考依据.

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2010.

[2]廖婉,游宇,张臻,等.中药青果在现代美容领域的研究进展[J].中药与临床,2012,3(2):60-62.

[3]王恒,宋良科,汤昊.不同种质青果清热利咽化学组分的研究[J].中国中药杂志,2010,35(6):669-672.

[4]谌立巍,陈思敏,吴小唯,等.两种青果中没食子酸和总鞣质的含量测定[J].内蒙古中医药,2008,27(5):51-52.

[5]何志勇,夏文水.中药青果化学成分及药理研究进展[J].中成药,2006,28(7):1024-1026.