微小RNA-21在膀胱癌中的表达及其临床意义

战 鹏 张 明 范海涛 温都苏 李然伟 刘禄成 (吉林大学第二医院泌尿外科，吉林 长春 130041)

MiRNA是体内一大类内源性表达的小分子非编码RNA，称为微小RNA。这些小分子RNA参与人类基因组中1/3左右基因的表达调控，并在细胞分化、增殖、凋亡甚至肿瘤的发生发展中发挥重要作用〔1，2〕。目前，与肿瘤相关的一些miRNA已经被发现，其中miRNA-21被认为是一种癌基因，参与多种病理生理过程，在肿瘤细胞的迁移、浸润和转移中起关键作用〔3，4〕。本实验采用免疫组织化学(SP)法检测miRNA-21在膀胱癌中的表达情况，并分析其与膀胱癌生物行为的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 收集我院2005年1月至2011年12月间膀胱癌石蜡包埋标本50例。全部病例术前均未放疗、化疗及免疫治疗。其中男性33例，女性17例;年龄27～81岁。肿瘤细胞分级：G1 13例，G2 26例，G3 11例。肿瘤临床分期按世界卫生组织TNM分期校准：A期15例，B期21例，C期9例，D期5例。同期收集膀胱镜下膀胱黏膜正常组织石蜡标本20例，经病理证实为正常组织或慢性炎症。所有标本常规石蜡切片4 μm厚。miRNA-21单克隆抗体购自美国Sigma公司。SP试剂盒及DAB显色液均购自中杉生物技术公司。

1.2 免疫组化染色 切片常规脱蜡，梯度酒精脱水，30%H2O2甲醇封闭内源性过氧化物酶，枸橼酸高压修复，小牛血清封闭，DAB显色，苏木精衬染，用PBS作阴性对照。

1.3 结果判定 细胞呈黄褐色着色为表达阳性，无着色为表达阴性。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行数据分析，数据以x±s表示，均数间比较用t检验。

2结果

2.1 miRNA-21蛋白的表达 miRNA-21主要定位于胞核，在膀胱癌中阳性表达率为76%(38/50)，膀胱正常组织中阳性表达率仅为5%(1/20)，两者比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见图1。

图1 miRNA-21在膀胱癌组织及正常组织中阳性表达(×200)

2.2 miRNA-21蛋白表达与膀胱癌细胞分级和临床分期的关系 表1显示在miRNA-21表达中，浸润肌层和细胞分级高者阳性表达高于局限在黏膜层和细胞分级低者，即miRNA-21的表达率A期＜B期＜C期＜D期;G1级＜G2级＜G3级;有淋巴结转移者的表达高于无淋巴结转移者。上述几组间相互比较，虽然组间差异无统计学意义(P＞0.05)，但随着临床分期和细胞分级增高其阳性表达率逐渐升高，说明miRNA-21表达与膀胱癌的恶性度和严重性呈正相关，与年龄和性别无关。见表1。

表1 50例膀胱癌miRNA-21表达与临床病理学因素的关系〔n(%)〕

3讨论

膀胱癌是泌尿系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤，其发生发展也是一个多基因变化的复杂过程，以往的研究几乎都集中在编码蛋白的癌基因或抑癌基因上。近年来发现一类内源性短链RNA，即非编码蛋白的miRNA。这种miRNA能通过mRNA部分互补或完全互补结合，抑制其翻译或导致其降解而起到在转录后水平沉默基因表达的作用;甚至一种miRNA可调控上百种靶基因表达，由于其高效调控癌基因或抑癌基因的特性，所以其在恶性肿瘤的发生发展和转移中发挥着至关重要的作用〔5，6〕。虽然目前对miRNA的研究只是初浅的，但已发现并鉴定的miRNA多达650种，其中将近70%miRNA具有癌基因或抑癌基因的生物活性，故被认为其在肿瘤的研究与治疗中具有诱人前景和巨大潜力。Oulas等〔7〕用微陈列芯片首次在乳腺癌中筛选出异常表达的miRNA谱，发现有29条miRNA表达失调，其中17条表达上调，以miRNA-21上调最为显著，提示其在乳腺癌中可能起致癌作用。这种作用在后续肺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌和前列腺癌等多种肿瘤研究中也得到进一步证实〔8，9〕，提示 miRNA-21对肿瘤的致癌作用具有普遍性。

本实验结果表明miRNA-21可能在膀胱癌的发生发展中扮演着重要角色，初步判定miRNA-21蛋白在膀胱中的表达可作为与膀胱癌浸润、转移有关的重要指征之一，并对膀胱癌的预后评估和靶向治疗有一定实用价值。但miRNA-21过表达能否作为膀胱癌预后不良的独立因素尚需大宗病例进一步研究。

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3 Zhu S，Wu H，Wu F，et al.MicroRNA-21 targets tumor suppressor genes in invasion and metastasis〔J〕.Cell Res，2008;18(3)：350-7.

4 Connlly EC，Van Doorslaer K，Rogler LE，et al.Overexpression of miR-21 promotes an in metastatic phenotype by targeting the tumor suppressor RHOB〔J〕.Mol Cancer Res，2010;8(3)：691-8.

5 Zhang B，Farwell MA.MicroRNAs：a new emerging class of players for disease diagnostics and gene therapy〔J〕.Cell Mol Med，2008;12(1)：3-11.

6 Ribas J，Ni X，Haffner M，et al.MiR-21：An androgen receptor-regulated microRNA and that promotes hormone dependet and hormone independent prostate cancer growth〔J〕.Cancer Res，2009;69(18)：7165-71.

7 Oulas A，Reczko M，Poirazi P.MicroRNAs and cancer the search begins〔J〕.IEEE Trans Inf Technol Biomed，2009;13(1)：67-81.

8 Elliott A，Adams J，Al-Hajj M.The ABCs of cancer stem cell drug resistance〔J〕.Drugs，2010;13(9)：632-7.

9 Si ML，Zhu S，Wu H，et al.MiRNA-21 mediated tumor growth〔J〕.Oncogene，2007;26(19)：2799-804.