樟树叶化学成分研究

廖矛川，杨芳云，沙光普，葛岚岚，熊姝颖，陈 峰

(1 中南民族大学 药学院，武汉 430074；2 中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所，北京 100193 )

樟(CinamomumCamphora)是樟科樟属，为亚热带常绿阔叶乔木，属药用植物[1].樟具有杀虫解毒，抗血栓、动脉硬化、肿瘤、氧化衰老等作用，主治风湿痹痛，水火烫伤，疮疡肿毒，疥癣皮肤瘙痒，毒虫咬伤[2].它是工业上制造胶卷、胶片、赛璐珞的重要原料[3].临床以樟脑配伍治疗根尖周炎[4]、虫咬皮炎[5]等.樟树中含桉叶素、黄樟素、芳樟醇、1，8-桉叶素、α-蒎烯、莰烯等挥发油[2，6]，并含芳香性化合物、生物碱、有机酸及多糖等成分[7].

目前樟树的研究主要集中在樟树挥发油的各种化学成分和提取加工工艺[8，9]，对其成分研究较少.本实验主要研究樟树叶的非挥发性化学成分，采取柱色谱等方法，从乙酸乙酯和正丁醇萃取部位共分离得到5个化合物，通过理化性质和波谱手段鉴定了它们的结构，分别为(8R,8′R)-3,3′,4,4′-四甲氧基-9-氧代-8-8′,9-O-9′-木脂素(I)，槲皮素-3-Ο-α-L-鼠李糖苷(II)，山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷(III)，芦丁(IV)，槲皮素-3-Ο-β-D-葡萄糖苷(V).上述化合物均从樟树叶中首次分离得到.

图1 化合物I～V的结构式

1 材料与仪器

樟树叶采自中南民族大学校园内，经中南民族大学药学院万定荣教授鉴定为CinamomumCamphora的树叶.

核磁共振波谱仪(TMS内标，德国BrukerAM-400)，中压柱层析系统(HEP-50A型，武汉金帝)，旋转蒸发器(RE-52型)，高效液相色谱仪(Ultimate-3000半制备型，美国Dionex公司)，电子天平(精度0.1mg,AR2140型,上海奥豪斯仪器有限公司)，提取罐、浓缩罐(武汉市江汉医疗制药设备有限公司)，循环水真空泵(SHZ-III型，上海亚荣生化仪器)，电热鼓风干燥箱(101-0AB型，天津市泰斯特)，实验试剂为分析纯(天津博迪有限公司)，硅胶(柱层析用，100-200目，青岛海洋化工厂分厂)，氘代氯仿、氘代甲醇(J&K CHEMICAL LTD).

2 提取分离

干樟树叶16.745 kg，揉碎，95%乙醇煮2次，每次2 h，再用75%乙醇煮1.5 h，减压回收乙醇，得浸膏3.944 kg.浸膏加同质量的蒸馏水分散12 h，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取.取乙酸乙酯浸膏50 g，溶于乙酸乙酯中，拌样，干法装1000 g薄层硅胶柱，干法上样，依次用环己烷-丙酮梯度洗脱，TLC检测并合并相同馏分，经反复硅胶柱色谱层析得化合物I(22mg)、化合物Ⅱ(17mg).湿法装40g聚酰胺柱，取正丁醇浸膏8 g溶于水中，湿法上样，依次用水-乙醇梯度洗脱，收集70%醇组分后用正相硅胶依次用氯仿-甲醇梯度洗脱，TLC检测并合并相同馏分，经反复硅胶柱色谱层析和高效液相色谱分离得化合物Ⅲ(37 mg)、化合物Ⅳ(18 mg)和化合物Ⅴ(8mg).

3 结构鉴定

化合物I：C22H26O6，白色晶体，EI-MS(m/z)：387[M+H]+,151(苄基裂解的碎片离子峰).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：6.750(2H，t，J=15.6Hz，H-2，H-5)，6.655(2H，J=17.2Hz，H-2′，H-5′)，6.540(1H，dd，J=10Hz，H-6)，6.475(1H，d，J=2Hz，H-6′)，4.112(1H，dd，J=16Hz，H-8)，3.846(12H，s，3,3′,4,4′-OCH3)，2.936(2H，J=12.8Hz，H-9′),2.564(4H，m，H-8，H-8′)，1.573(1H，s，H-8′).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ：178.68(C-9)，149.08(C-3)，149.08(C-3′)，147.99(C-4)，147.92(C-4′)，130.47(C-1)，130.23(C-1′)，121.37(C-6)，120.59(C-6′)，112.42(C-2)，111.91(C-2′)，111.39(C-5)，111.15(C-5′)，71.23(C-9′)，55.92(CH3O-C4)，55.92(CH3O-C4′)，55.88(CH3O-C3)，55.92(CH3O-C3′)，46.58(C-8)，41.09(C-8′)，38.20(C-7′)，34.52(C-7).由1H-NMR谱知低场区有6个芳香质子，由偶合常数知苯环上为间对位取代基.上述波谱数据与文献[10]一致,确定化合物I为(8R,8′R)-3,3′,4,4′-四甲氧基-9-氧代-8-8′,9-O-9′-木脂素.

化合物II：C21H20O11，分子量为448，黄色粉末，EI-MS(m/z)：449[M+H]+,302(EI源中水解掉糖后生成的槲皮素苷元),301等.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：6.196(1H，s，H-6)，6.367(1H，s，H-8)，7.331(1H，s，H-2′)，7.288(1H，d，J=8Hz，H-6′)，6.914(1H，d，J=8.4Hz，H-5′)，0.922(3H，d，J=5.6Hz，H-6″)，5.317(1H，s，H-1″).13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ：157.12(C-2)，134.78(C-3)，178.23(C-4)，161.72(C-5)，98.6(C-6)，164.58(C-7)，93.49(C-8)，158.04(C-9)，104.49(C-10)，148.43(C-4′)，144.98(C-3′)，121.57(C-1′)，115.66(C-5′)，115.11(C-2′)；3-O-rhaδ：102.13(C-1″)，71.85(C-4″)，70.73(C-3″)，70.68(C-2″)，70.5(C-5″)，16.26(C-6″).由1H-NMR谱中化学位移值δ0.922(3H，d，J=5.6Hz，H-6″)可知此为鼠李糖甲基信号，C谱与槲皮素的C谱比较，C-3的化学位移向高场移动，推断糖苷连接在C-3位.化合物2波谱数据与文献[11,12]一致,故鉴定为槲皮素3-Ο-α-L-鼠李糖苷(Quercitin 3-Ο-α-L-rhamnoside),即槲皮苷(Quercitrin).

化合物III：C27H30O15，分子量为594，黄色晶体，MgCl2反应呈阳性，AlCl3反应呈黄绿色荧光，FAB-MS(m/z)：595[M+H]+.1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ：8.04(2H，dd，J=9.2Hz，H-2′，6′)，6.87(2H，dd，J=9.2Hz，H-3′，5′)，6.36(1H，d，J=2Hz，H-8)，6.18(1H，d，J=2Hz，H-6)，5.20(1H，d，J=7Hz，H-1″)，4.50(1H，d，J=1Hz，H-1‴)，3.15～3.80(m，均为糖上氢原子的信号)，0.96(3H，d，J=6Hz，H-6‴).13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ：157.9(C-2)，134.1(C-3)，177.9(C-4)，161.5(C-5)，98.6(C-6)，164.7(C-7)，93.6(C-8)，157.1(C-9)，104.2(C-10)，121.3(C-1′)，130.9(C-2′,6′)，114.7(C-3′,5′)，160.0(C-4′)；3-O-gluδ：103.3(C-1″)，74.4(C-2″)，76.7(C-3″)，70.9(C-4″)，75.8(C-5″)，67.1(C-6″)；6-O-rhaδ：101.0(C-1‴)，70.0(C-2‴)，70.6(C-3‴)，72.5(C-4‴)，68.3(C-5‴)，16.5(C-6‴).由1H-NMR可见，该化合物苷元为山奈酚，连有2个糖，糖端基出现在δ5.20(1H，d，J=7Hz，H-1″)和δ4.50(1H，d，J=1Hz，H-1‴)，在δ0.96(3H，d，J=6Hz，H-6‴)有1个甲基峰，为鼠李糖上的甲基.山奈酚3位碳信号向高场位移到δ134.1(C-3)，而2，4位则低场位移到δ157.9(C-2)和δ177.9(C-4)，说明糖连接在山奈酚的3位.对照文献[13],鉴定化合物3为山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(6→1)-α-L-鼠李糖苷.

化合物IV：C27H30O16，分子量为610，黄色粉末，MgCl2反应呈阳性，Molish反应呈阳性， FAB-MS(m/z)：611[M+H]+，465[M+-Rha].1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ：6.18(1H，s，J=0 Hz，H-6)，6.37(1H，s，H-8)，7.65(1H，s，H-2′)，7.61(1H，d，J=7.6Hz，H-6′)，6.85(1H，d，J=7.1Hz，H-5′)，3.15～3.80(m，均为糖上H的信号)，1.12(3H，d，J=6Hz，H-6‴).13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ：157.0(C-2)，134.2(C-3)，177.9(C-4)，161.5(C-5)，98.6(C-6)，164.6(C-7)，93.5(C-8)，157.9(C-9)，104.2(C-10)，121.7(C-1′)，δ116.35(C-2′)，144.380(C-3′)，148.38(C-4′)，δ114.68(C-5′)，122.21(C-6′)；3-O-gluδ：103.4(C-1″)，74.3(C-2″)，76.8(C-3″)，70.88(C-4″)，75.78(C-5″)，67.18(C-6″)；6-O-rhaδ：101.1(C-1‴)，70.0(C-2‴)，70.69(C-3‴)，72.5(C-4‴)，68.3(C-5‴)，16.5(C-6‴).与文献[14]芦丁一致，薄层层析检测，与已知芦丁的Rf一致，故确定该化合物IV为芦丁.

化合物V：C21H20O12，黄色颗粒，MgCl2反应呈阳性，Molish反应呈阳性，EI-MS(m/z)：465[M+H]+，302(EI源中水解掉糖后生成的槲皮素苷元)，301，273，229，153，69等.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：6.19(1H，d，J=2Hz，H-6)，6.36(1H，d，J=2Hz，H-8)，7.79(1H，d，J=2Hz，H-2′)，6.85(1H，d，J=8.2Hz，H-5′)，7.56(1H，dd，J=8.2Hz，2Hz，H-6′)，5.22(1H，d，H-1″)，3.15～3.80(m，均为糖上H的信号).13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ：156.52(C-2)，133.99(C-3)，177.86(C-4)，161.66(C-5)，99.27(C-6)，165.10(C-7)，94.04(C-8)，156.80(C-9)，104.18(C-10)，122.43(C-1′)，116.36(C-2′)，145.31(C-3′)，148.99(C-4′)，115.64(C-5′)，121.51(C-6′)；3-O-gluδ：102.91(C-1″)，71.66(C-2″)，73.65(C-3″)，68.37(C-4″)，76.28(C-5″)，60.58(C-6″).由1H-NMR谱和13C-NMR数据可辨认为黄酮槲皮素类结构，糖端基质子的偶合常数可确定该苷键位β型；C谱中C-3的化学位移向高场移动，而C-2的化学位移向低场移动，推断糖苷连接在C-3位.化合物V波谱数据与文献[12]一致,故鉴定为槲皮素-3-Ο-β-D-葡萄糖苷(Quercitin 3-Ο-β-D-glucoside).

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