HSP70和P27在食管鳞癌中的表达及意义

贺洪亮， 刘 平

热休克蛋白(HSP)是生物体或离体的培养细胞在不良环境因素作用下所产生的一组特殊蛋白质，其可保护机体或细胞不受或少受伤害，由于分子量为70KD的热休克蛋白诱导型在正常细胞中水平较低，而在应激状态下可显著地升高[1]，因此成为热休克蛋白中最为关注、研究最深入的一种。P27是一种重要的细胞周期蛋白激酶抑制蛋白(CKI)家族成员，其主要功能是作为细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDK)抑制因子参与细胞周期调控。P27蛋白表达下调导致其对细胞周期进展抑制不足[2]，进而影响细胞的增殖。同时有研究表明P27可作为凋亡启动子诱导细胞凋亡，其与肿瘤的发生密切相关。HSP70和P27在参与细胞增殖及细胞凋亡方面存在一定关系。本研究通过检测HSP70和P27在食管鳞癌组织中的表达情况及两者间的相关性分析，进一步评价其临床意义。

1 材料和方法

1.1 标本来源 本实验标本来自2009年6月—2010年12月新乡市中心医院胸瘤一科食管鳞癌根

治切除病例。以临床病理资料完整的65例食管鳞癌和30例癌旁组织为研究对象，同时选择30例食管鳞癌切除标本上、下断端(距肿瘤边缘>5cm)的正常食管上皮组织作为正常对照。

1.2 标本处理 将新鲜的标本固定于10%中性甲醛液内，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚度5 μm。

1.3 免疫组化染色 免疫组化试剂鼠抗人HSP70单克隆抗体(RAB-0097，克隆系：4A2C7，IgG分类：IgG1)、鼠抗人P27单克隆抗体(MAB-0242，克隆系：DCS-72.F6，同种型：IgG)为美国Santa Cruz公司产品；通用型SP-9000检测试剂盒及DAB显色试剂盒(ZLI-9017)为美国Maxim公司产品，均购自福建迈新生物技术有限公司。严格按照试剂盒操作，阳性对照采用福州迈新生物技术有限公司提供的阳性对照片。阴性对照以PBS代替一抗作为空白阴性对照。

1.4 统计学处理 采用SPSS12.0软件包(SPSS Inc，Chicago，USA)对数据进行统计学分析。HSP70和P27蛋白表达之间的相关性采用Spearman等级相关分析，以P<0.05为差别有统计学意义(双侧)。

2 结果

HSP70阳性产物主要位于细胞核和细胞浆内。在30例正常食管上皮组织中5例存在阳性表达，多为胞核、胞浆同时表达(5/30)；在食管癌旁组织中，14例HSP70为阳性表达(14/30)，主要位于细胞核，部分在细胞浆内也可见表达。食管鳞癌组织中HSP70阳性产物大多数呈棕黄色细颗粒状，位于细胞核和胞浆内(56/65)。癌巢内不同癌细胞之间HSP70表达有明显的异质性，染色强度以棕黄色为主，差别不大。

P27阳性产物在正常食管上皮组织中大多数呈细颗粒状弥漫分布于胞核，胞浆内也可见表达(29/30)，癌旁组织中大多为核表达(16/30), 食管鳞癌组织中大多数分布于胞核(27/65)。配对四格表的检验显示，HSP70和P27在癌组织中的表达有关系(P=0.003)，结合Spearman等级相关系数及P值(rs=-0.541，P=0.000)，可认为二者在食管鳞癌组织中的表达关系比较密切，呈负相关关系(见表1)。在食管鳞癌组织中，HSP70和P27的表达程度之间有负相关关系(rs-0.541P=0.031)且随表达程度的增高而增加(见表2)。

表1 食管鳞癌中HSP70与P27的表达及其相互关系

表2 食管鳞癌中HSP70与P27表达程度的相关性

3 讨论

Larson等[3]早在1988年就报道HSP70参与原癌基因c-myc的表达，HSP70可与c-myc结合调节其转录活性，HSP70基因产物能促进c-myc基因的表达。而c-myc原癌基因是与细胞增殖凋亡有密切关系的基因。其不仅能促进细胞增殖和恶性转化，而且可以抑制细胞的分化。c-myc基因可通过激活端粒酶催化亚基(hTERT)和端粒酶，影响端粒的稳定性进而促进细胞永生化。c-myc的激活可下调P27蛋白水平,并可上调CDK2的表达，抑制P27与新形成的cyclinE-CDK复合物结合，新形成的cyclinE-CDK2复合物又可通过正反馈使P27蛋白磷酸化，使其从原有cyclinE-CDK2-P27复合物中解离出来。

HSP70通过调控细胞周期所必需的蛋白构象参与肿瘤细胞的增殖、凋亡过程，在应激状态下可显著地升高。P27直接参与细胞的生长抑制、分化等调控过程[4]，表达下调导致其对细胞周期进展抑制不足。研究表明P27很少或不发生基因突变, 对细胞周期的调控主要依赖于其蛋白的表达水平及活性的改变[5]。本研究表明在食管鳞癌组织中，HSP70和P27的表达程度之间有负相关关系，并且随表达程度的增高而增加。

综上所述，HSP70表达与细胞的增殖以及细胞凋亡存在正相关，P27作为细胞周期抑制因子，被认为是肿瘤的抑制基因。P27与HSP70在食管鳞癌中的表达呈负相关关系，检测其表达情况对食管癌的早期诊断、预后判断及基因治疗有指导意义。

[1] Sato s,Abe K,Kawagoe J,et al. Isolation of complementary DNAs for heat shock protein(HSP)70 and heat shock cognate protein(HSC)70 genes and the expressions in post-ischaemic gerbil brain[J].Neurol Res，1992，14:375-380.

[2] StoeckM，SchaferM，Hofmann HP，et al.Dexamethasone and cyclisporin A do not inhibit interleukin-15expression in the human lung carcinoˉma cell line A549[J].Eur Cytokine Netw，2000，11(3):414-419.

[3] Larson JS, Schuetz TJ, Kingston RE.Activation in vitro of sequence-specific DNA binding by a human regulatory factor[J].Nature,1988,335(6188):372-375.

[4] Tan P, Cady B, Wanner M, et al. The cell cycle inhibitor p27is an independent prongosticmarker in smallinvasive breast cuminomas [J]. Cancer Res, 2006, 57(7): 1259 -1263.

[5] Chauhan D, Guilan L, Hideshima T, et al. Hsp27 inhibits release of mitochondria protein Smac in multiple myeloma cells and confers dexamethasone resistance[J]. Blood, 2003, 102 (9):3379-3386.