HPLC测定荷叶中碱盐的含量

阎 娜王炜华李 俶刘成梅王一铭

（1.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西 南昌 330047；2.南昌济顺制药有限公司，江西 南昌 330008）

HPLC测定荷叶中碱盐的含量

阎 娜1王炜华1李 俶1刘成梅1王一铭2

（1.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西 南昌 330047；2.南昌济顺制药有限公司，江西 南昌 330008）

以荷叶为原料，建立一种荷叶碱盐含量的测定方法。运用高效液相色谱法测定，色谱柱为Hypersil ODS2（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈－磷酸盐缓冲溶液（0.05% 磷酸－0.2%三乙胺－水）（25∶75，V/V），流速为1.0mL/min，检测波长为270nm。结果显示，荷叶碱盐在0.053～0.159mg/mL（R2＝0.999 2）范围内具有良好的线性关系，平均回收率为96.4%，RSD为0.05%。该方法简便、准确，灵敏度高，重复性好，可用于荷叶碱盐成分的含量测定。

荷叶碱盐；含量测定；高效液相色谱

荷叶为睡莲植物莲（nelumbo nucifera gaertn）盛产于江西、福建、湖南和浙江等省。传统医学认为，荷叶味苦、平，归肝、脾、胃、经，具有清热解暑、升发清阳、凉血止血之功效［1］，可用于暑热烦渴、暑湿泄泻、便血便漏。现代药理学研究［2］表明，荷叶生物碱有降脂减肥、抑菌、抗病毒、抗氧化等活性。荷叶中的生物碱是荷叶的主要功能因子之一，一般难溶于水，而生物碱盐易溶于水［3］，且稳定，易被人体吸收。赵俊等［4］曾经研究过荷叶中生物碱与生物碱盐的降血脂作用，结果显示生物碱盐的效果要更好。有关荷叶碱盐的含量测定方法鲜见报道。本试验建立了一种测定荷叶中碱盐含量的HPLC方法，为荷叶碱盐的相关研究提供一定依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

荷叶碱对照品：含量＞99%，购自江西省药品检验所；

荷叶：江西省安远县；

甲醇、乙腈：色谱纯，天津市大茂化学试剂厂；

水：双蒸水，由Millipore Simplicity超纯水系统制得；

其它所用试剂：均为分析纯，天津市大茂化学试剂厂。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪：Agilent 1200，安捷伦科技有限公司；

紫外可变波长检测器：G1314BVWD，安捷伦科技有限公司；

四元泵：G1311A，安捷伦科技有限公司；

色谱工作站：Agilent LC Chemstation，安捷伦科技有限公司；

1.3 方法

1.3.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS2柱（250mm ×4.6mm，5μm），流动相为乙腈－磷酸盐缓冲溶液（0.05%磷酸－0.2%三乙胺－水）（25∶75，V/V）；流速：1.0mL/min；检测波长：270nm；柱温：25℃，进样量：20μL。

1.3.2 对照品溶液的制备 精密称取荷叶碱对照品20mg放至25mL容量瓶中，加pH＝2.6的磷酸稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1.32mg/mL的溶液，备用。

1.3.3 供试品溶液的制备 精密称取粉碎后过60目筛的荷叶粉2g，至于圆底烧瓶中，加入pH 2.0的乙醇溶液80mL，回流提取2h，提取2次，合并提取液，全部转移至250mL容量瓶中，定容，经0.45μm滤膜过滤，即得。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的制备

精密吸取荷叶碱盐对照品溶液 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加超纯水稀释至刻度。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，见图1。从图1可得出其回归方程为：y＝46 629x＋71.308，R2＝0.999 2，表明荷叶碱盐在0.053～0.159mg/mL范围内具有良好线性关系。

图1 荷叶碱盐标准曲线Figure 1 The standard curve of Nuciferine Salt

图2为荷叶碱盐对照品的液相色谱图，图3为样品的液相色谱图。通过对照，可以说明在上述条件下荷叶碱盐能够和其他组分达到基线分离，出峰时间在11.5min左右。

图2 荷叶碱盐对照品液相色谱图Figure 2 The reference standard of Nuciferine Salt

图3 供试品溶液液相色谱图Figure 3 The chromatogram of sample

2.2 精密度考察

精密吸取对照品溶液20μL，重复进样6次，测定荷叶碱盐峰面积积分值，结果见表1。由表1可知，本方法的精密度良好，RSD为0.96%。

表1 精密度试验结果Table 1 Precision of Nuciferine Salt（n＝6）

2.3 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于配制后0，2，4，8，12，24h依法分析测定，试验结果见表2。由表2可知，供试品溶液在24h内基本稳定，测定结果均无显著变化，RSD为1.5%。

表2 稳定性试验结果Table 2 Stability of Nuciferine Salt（n＝6）

2.4 重复性试验

精密称取荷叶供试品5份，依法分析测定，计算荷叶碱盐含量，试验结果见表3。结果表明，RSD为1.0%，说明该法重现性好。

表3 重复性试验结果Table 3 Repeatability of Nuciferine Salt（n＝5）

2.5 回收率试验

精密称取已知含量（0.031 3%）的同批荷叶1g，共5份。分别精密加入荷叶碱盐对照品溶液（0.010 6mg/mL）各1mL，按上述供试品溶液的配制方法及色谱条件，进行测定，结果平均回收率为96.4%，RSD＝0.05%。表明测定方法准确、可靠。

表4 加样回收率试验结果Table 4 Average recoveries of Nuciferine Salt（n＝5）

2.6 测定波长的选择

取对照品荷叶碱盐溶液适量，用紫外可见分光光度计于200～800nm［5］波长段扫描，荷叶碱盐在270nm处有最大吸收，故选定270nm作为检测波长。

3 结论

本试验采用高效液相色谱法建立了荷叶中的荷叶碱盐成分的检测方法。荷叶碱盐在0.053～0.159mg/mL范围内具有良好的线性关系，R2＝0.999 2，平均回收率为96.4%，RSD＝0.05%。该方法简便、准确，灵敏度高，重复性好，可用于荷叶碱盐成分的含量测定。

1 中华人民共和国药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2000：231.

2 朱秀萍，徐翔.荷叶生物碱研究进展［J］.中国药房，2008，19（6）：459～461.

3 肖培根，李连达，刘勇.重要保健食品安全性评估系统的初步研究［J］.中国中药杂志，2005，30（1）：9～11.

4 赵俊，高岚，齐召朋.荷叶总生物碱及其盐的提取和降脂作用的比较［J］.天津中医药，2005，22（2）：161.

5 曾建国，张静，罗炼辉.博落回总生物碱盐及其制备方法和应用：中国，200510032062.1［P］.2006－03－01.

Study on determination of nuciferine salt by HPLC

YAN Na1WANG Wei－hua1LI Ti1LIU Cheng－mei1WANG Yi－ming2

（1.State Key Laboratory of Food Science and Technology，Nanchang University，Nanchang，Jiangxi330047，China；2.NanChang Jishun Pharmaceutical Co.Ltd，Nanchang，Jiangxi330008，China）

To establish an HPLC method for the determination of nuciferine salt on lotus leaf.Methods：Analyses were carried out on Hypersil ODS2（4.6mm×250mm，5μm）column with acetonitrile：0.05%phosphoric acid－0.2%triethylamine－water（25∶75，V/V）as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL/min and the UV detection wavelength was 270nm.Results indicated，Linearities of nuciferine salt was good in the ranges of 0.053～0.159mg/mL（R2＝0.999 2）.The average recovery was 96.4%，andRSDwas 0.05% （n＝6）.The method was simple，accurate，sensitivity and reproducible.The method can be used to the determination of nuciferine salt.

nuciferine salt；determination；HPLC

10.3969/j.issn.1003－5788.2011.03.021

阎娜（1986－），女，南昌大学在读硕士研究生。E－mail：dogsday10＠163.com

李俶

2011－03－05