果蔬中二甲戊乐灵、氟乐灵、双丁乐灵残留测定

陈其勇，郑文杰，肖亚兵，王云凤，常春艳

（天津出入境检验检疫局，天津 300456）

二甲戊乐灵（pendimethalin）、氟乐灵（trifluralin）及双甲乐灵（butralin）是在我国应用比较广泛的3种二硝基苯胺类选择性土壤处理除草剂，其农药残留对后茬作物会产生危害。二甲戊乐灵被认为是可疑的内分泌干扰剂和可能的致癌物质[1]，氟乐灵也可能会对大鼠肝、肾微粒体酶产生影响[2]，欧洲已有国家（组织）禁用或限用此类农药，其他国家也对这3种农药提出了严格的限制指标。有关资料显示，美国近几年的大豆除草剂种类调查中，氟乐灵和二甲戊乐灵的使用量仅次于草甘膦[3]。

在已报道的果蔬类样品中关于二甲戊乐灵等药物农药残留的测定中，大多采用传统的液-液萃取（LLE）法提取样品中目标物[4-5]。这种方法消耗大量有毒有害的有机溶剂，繁琐费时，而且在萃取过程中容易产生大量乳化液，影响萃取效率。自1989年美国Louisiana州立大学Barker教授首次提出基质固相分散（MSPD）技术[6]后，该技术已在蔬菜、水果等农药残留检测中得到一定的应用。

目前，该类除草剂残留检测方法以GC/ECD或GC/MS居多[4-7]，检测对象以土壤、水、果蔬等样品为主。文献检索表明，目前鲜见应用MSPD样品处理并采用GCMS/MS分析果蔬中以上二甲戊乐灵、氟乐灵、双丁乐灵多残留检测的相关报道。本研究优化MSPD条件，并采用GC-MS/MS测定提取液中的目标化合物，满足果蔬类复杂机体的定性及定量需要。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

TSQ Quantum XLS串联四极杆气质联用仪：美国Thermo Fisher Scientific公司，配置电子轰击电离（EI）源；T-25型组织匀浆机：德国IKA公司；氮吹仪：美国Organomation公司；离心机：美国Sigma公司。

乙腈、正己烷、乙酸：美国Fisher公司；色谱纯；PSA填料、C18填料：美国Waters公司；无水硫酸镁、氯化钠为分析纯：天津化学试剂二厂；二硝基苯胺类除草剂标准品：美国Sigma公司；以正己烷稀释成1 mg/mL的储备液，临用时根据需要用正己烷稀释成适当含量的混合标准溶液。

1.2 方法

1.2.1 样品的提取

准确称取10.0 g试样于50 mL螺旋盖聚丙烯离心管中，加入5 g无水硫酸镁，2 g氯化钠，10 mL 0.5%乙酸乙腈溶液。10000 r/min均质1min。7000 r/min离心5min，取上清液转移至15 mL螺旋盖聚丙烯离心管。

1.2.2 样品的净化

将上述样品转移到事先装有300 mg无水硫酸镁、200 mg PSA填料的小试管中；充分涡旋1 min，过0.22 μm滤膜，供气相色谱串联质谱测定。

1.2.3 气相色谱-质谱条件

色谱柱：TR-5MS色谱柱，15 m×0.25 mm（内径）×0.25 μm；柱温：初始温度50℃（1 min），以25℃/min升至150℃，再以10℃/min升至250℃，最后以35℃/min升至290℃，保持5 min；进样口温度：200℃；色谱质谱接口温度：280℃；载气：氦气；进样方式：不分流进样，1 min后开阀；离子源:EI源；离子源温度：250℃；电子能量：70 eV；溶剂延迟时间：4 min；扫描方式：反应离子监测模式（MRM）；定量离子对及碰撞能量见表1。

表1 选择离子、碰撞能量及保留时间Table 1 Selected ions,collision energy and retention time

2 结果与讨论

2.1 提取条件的选择

MSPD法快速农药多残留分析方法通常采用振荡提取，改进后的方法采用均质提取，提取效率更高，尤其对于纤维较长、不易制备为均匀试样的果蔬类样品更为合适。提取溶液为经正己烷饱和的乙腈溶液，在一定程度上降低了提取溶剂的极性，降低了含水基质提取液中的水含量，从而减轻了后续的除水压力。

2.2 净化条件的选择

乙二胺-N-丙级硅烷（PSA）吸附剂能够清除许多极性基质成分如来自样品共萃取物的脂肪酸、亲脂性色素和糖类等，而十八烷基硅烷（ODS）、石墨化炭黑去除维生素、色素、甾醇的能力较好，然而石墨化炭黑碳黑具有强吸附性，会造成平面型农药（极性芳香族化合物）的流失，使一些农药不易洗脱[7]。本研究采用气相色谱/四级杆质谱仪多离子反应监测（MRM）测定目标化合物，仪器本身具有较强的高分辨、高质量精度及选择性，所以综合考虑，本研究最终采用单一的PSA作为净化剂，效果良好。

2.3 不同色谱柱的比较

本研究对两种不同色谱柱：THERMO TR-5MS SQC 15 m×0.25 mm ID×0.25 μm[其有效成分为5%phenyl（equiv）polysilphenylene-siloxane]与Rxi-5ms30m×0.25 mm ID×0.25 μm（其有效成分为5%diphenyl/95%dimethyl polysiloxane）进行比较，发现Rxi-5ms虽然在总离子流色谱图上有更好的分离效果，但THERMO TR-5MS总体分析时间仅为Rxi-5 ms色谱柱的一半，能达到快速测定的目的，故最终采用TR-5MS色谱柱进行测定。

2.4 标准曲线及线性范围

以正己烷为溶剂配制3种二硝基苯胺类除草剂的系列混合标准品溶液，以峰面积为纵轴，浓度为横轴制作标准曲线，得到各种农药的线性方程及相关系数，结果见表2。

表2 3种二硝基苯胺类除草剂的线性回归方程及相关系数Table 2 The regression equation,R2of eleven dinitroaniline herbicides

由表2可以看出，在1.0 ng/mL～20.0 ng/mL质量浓度范围内3种农药的线性关系均良好，混合标准工作溶液的总离子流色谱图见图1。

2.5 方法的回收率与精密度

采用标准添加法，选择卷心菜、橙与洋葱基质，在3种基质中分别添加0.005、0.01、0.02 mg/kg水平的3种二硝基苯胺类除草剂混合标准，每个加标水平平行测定7次，结果表明，方法的平均回收率范围在78.5%～109.3%之间，相对标准偏差小于8.8%，满足国内外对残留分析的要求。0.005 mg/kg添加水平的二硝基苯胺类除草剂在洋葱中的加标回收及空白谱图见图2。

图1 氟乐灵、双丁乐灵及二甲戊乐灵混合标准溶液总离子流色谱图Fig.1 GC/MS-MS total ion chromatogram of pendimethalin,trifluralin and butralin standard

图2 洋葱样品空白及添加0.005 mg/kg二硝基苯胺类除草剂标准物质MRM色谱图Fig.2 MRM chromatograms of blank onion sample and spiked with 0.005 mg/kg bifenox standard

3 结论

本研究通过对果蔬类样品中二甲戊乐灵、双丁乐灵、氟乐灵提取、净化、分析测定的方法研究，建立可靠、灵敏、准确、快速的MSPD-GC-MS/MS法测定果蔬类样品中的二硝基苯胺类除草剂残留量测定方法，方法的灵敏度达到0.005 mg/kg，完全满足目前日本、欧盟等国际上对二硝基苯胺类除草剂的残留分析要求。

[1]张智超，曾敏，李朝阳，等.以涂敷硝酸银的碱性氧化铝为分散剂的基质固相分散法测定大蒜中二甲戊灵残留[J].农药，2005，7(3)：264-268

[2]杜柳涛，邬惠琼，杨兴芬，等.氟乐灵对大鼠肝、肾微粒体酶的影响[J].中国职业医学，2000,27(5)：16-18

[3]霍江莲，李军，葛毅强，等.二硝基苯胺类除草剂残留检测技术的研究进展[J].农药，2004，45(4)：222-225

[4]黄雅丽，毛黎娟，吴慧明，等.二甲戊乐灵在甘蓝及土壤中的残留及消解动态研究[J].农业环境科学学报，2004，23(6)：1147-1150

[5]杨挺，朱勇，赵健，等.豆类蔬菜中二甲戊乐灵残留检测方法研究[J].食品科技，2006，31(10):246-248

[6]Barker S A,Long A R,Short C R.Isolation of Drug Residus from Tissues by Solid Phase Dispersion[J].Chromatogr,1989,475(2):361-363

[7]Schenck F J,Hobbs J E.Evaluation of the quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)approachto pesticide residue analysis[J].Bull Environ ContamToxico,2004,73(1):24-30