小叶地不容中总生物碱含量的测定

刘秀萍，黄祥卫，刘 炜*

（1.晋中学院 化学与化工学院，山西 晋中 030600；2.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口571158）

小叶地不容中总生物碱含量的测定

刘秀萍1，黄祥卫2，刘 炜2*

（1.晋中学院 化学与化工学院，山西 晋中 030600；2.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口571158）

用索氏提取法提取小叶地不容中的总生物碱，以盐酸小檗碱为对照品，在pH=5.4的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中，以溴甲酚绿指示液为显色剂，利用分光光度法测定小叶地不容中总生物碱含量.标准方程为A=-0.00758+0.03842C，相关系数r=0.999 9.加标回收率106.8%（n=5）.小叶地不容中总生物碱含量为2.93%，RSD=0.40%（n=5）.与非水滴定法相比，本法操作简便、迅速、测定结果准确、可靠.

小叶地不容；总生物碱；分光光度法

小叶地不容（Stephania succiferaH.S.Lo et Y.Tsoong）又称山乌龟、金不换等，属防己科千金藤属藤本植物，其块根味苦、性寒，有清热解毒，利湿，止痛之功效，用于胃痛，腹痛，急性肠胃炎，风湿性关节炎，疟疾，治痈疖肿毒，湿疹等病症[1].文献曾对该属植物的化学成分进行了研究[2-5]，但有关小叶地不容总生物碱含量的测定未见报道.为充分开发与利用小叶地不容药用植物资源，本文采用索氏法提取其中的总生物碱，以盐酸小檗碱为对照品，在pH为5.4的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中，以溴甲酚绿为显色剂，在416 nm波长下，利用分光光度法测定总生物碱含量，并与非水滴定法的测定结果进行了比较.本文研究结果为保护和合理利用小叶地不容药用植物资源提供了科学依据.

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

仪器：UV757CRT型紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；PHS-3C型酸度计（上海大普仪器有限公司）；T6紫外-可见分光光度计（北京普析通用有限公司）；RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；微型试样粉碎机（天津斯特仪器有限公司）；FA1604电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；索氏提取器自制.

试剂：盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号110713-200208，纯度：99.99%），邻苯二甲酸氢甲（天津市化学试剂一厂），溴甲酚绿（上海试剂三厂），柠檬酸（天津市大茂化学试剂厂），柠檬酸钠（天津市大茂化学试剂厂），三氯甲烷，氢氧化钠，草酸，高氯酸，冰醋酸，酚酞，甲基橙，结晶紫等均为国产分析纯试剂.

材料：小叶地不容采集于海南省尖峰岭地区，经海南师范大学生命科学院钟琼芯高级实验师鉴定为Stephania succiferaH.S.Lo et Y.Tsoong的块根.粉碎后晾干，备用.

1.2 实验方法

1.2.1 总生物碱的提取

准确称取2.0021 g粉碎好的小叶地不容块根粉末，用脱脂纱布包裹好，滴加浓氨水润湿，约1h后，放入索氏提取器中，用氯仿提至无色（取少量溶液加入适量的碘化铋钾，检验至无生物碱反应），提取液经适当浓缩，冷却到室温后转移至250 mL容量瓶中，用氯仿定容至刻度，低温冷藏.

1.2.2 显色液与缓冲溶液的配制

根据文献配制溴甲酚绿指示液[6-7]：精密称取溴甲酚绿125 mg，用0.2 mol/L NaOH溶液12.50 mL溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2.55 g，加少量蒸馏水溶解后，转移至250 mL容量瓶中，摇匀备用.

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的配制：分别配制浓度为0.1 mol/L的柠檬酸和柠檬酸钠溶液，再分别量取16 mL，0.1 mol/L的柠檬酸和34 mL，0.1 mol/L的柠檬酸钠于100 mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，得pH=5.4的缓冲溶液.

1.2.3 吸收波长的选择

精密称取在105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱标准品10.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得到200 μg/mL对照品溶液.取0.1 mL标准品溶液于250 mL的分液漏斗中，加柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH=5.4）5.0 mL，溴甲酚绿指示液2.0 mL，置分液漏斗中，再加氯仿10 mL，充分振摇，静置50 min，吸取氯仿层.

将配制好的标准品溶液和空白对照液在UV757CRT紫外-可见分光光度计上于350～700 nm波长范围内进行扫描.同时以氯仿作为空白参比液.结果显示标准品溶液在416 nm处有吸收峰,而氯仿空白参比液在416 nm几乎没有吸收，故本实验选择416 nm为测定波长（见图1）.

1.2.4 标准曲线的绘制

精密量取标准品溶液 0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9 mL，加水至1 mL，再加入5 mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH=5.4），再加入溴甲酚绿指示液2.0 mL，精密加入氯仿10.0 mL，充分振摇，静置50 min，吸取氯仿层，室温放置30 min后，于416 nm下测定吸光度，同时以氯仿为空白参比.以标准品溶液的浓度C（μg/mL）为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，得标准曲线见图2.

结果表明，盐酸小檗碱标准溶液浓度在0.0～18.0 μg/mL范围内，浓度与吸光度值呈现良好的线性关系.得回归方程A=-0.00758+0.03842C，相关系数：r=0.999 9.

1.2.5 小叶地不容总生物碱含量的测定

准确吸取样品溶液5份，每份0.5 mL，加入氯仿9.5 mL，其余操作同1.2.4项，平行测定5次，以样品空白作参比，根据回归方程，计算小叶地不容样品溶液中总生物碱的质量.

2 结果与讨论

2.1 小叶地不容总生物碱的含量

依据1.2.5项测定结果，根据总生物碱含量=（生物碱类化合物的质量/干样品的质量）×100%进行计算，结果见表1.

表1 小叶地不容总生物碱含量测定结果Tab.1 The determination results of total alkaloid content in sample

2.2 方法学考察

2.2.1 显色液稳定性实验

取对照品溶液补水至1 mL，加入5 mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH=5.4），再加入溴甲酚绿指示液2.0 mL.精密加入氯仿10.0 mL，充分振摇，静置50 min后，分出氯仿层，室温下于416 nm波长下测定吸光度，以氯仿作空白参比液.以吸光度值A为纵坐标，以时间（tmin）为横坐标作图，测定结果见图3.

结果表明，显色时间在10-100 min内吸光度值是稳定的.因此在本实验选择的测定时间范围内，生物碱类化合物与显色剂生成的络合物是稳定的.

2.2.2 精密度试验

试验方法同2.1项，平行测定5次，测定结果见表1.结果表明，精密度良好，其相对标准偏差RSD=0.40%（n=5）.

2.2.3 加标回收试验

准确量取小叶地不容样品溶液5份，每份0.20 mL，准确量取浓度为200 μg/mL盐酸小檗碱标准溶液5份，每份0.30 mL，余下按照1.2.4项操作方法于416 nm波长处测定吸光度值，计算总生物碱含量和加标回收率，结果见表2.试验结果表明，本实验方法具有良好的精密度和回收率.

表2 加标回收率试验结果Tab.2 Result of recovery test

2.3 讨论

本研究建立了小叶地不容中总生物碱的测定方法，操作简便快捷，灵敏度高，重现性好，测定结果准确可靠.本法与重量法、滴定法等测定方法比较，克服了多次重复萃取所造成的误差；与液相色谱法比较，具有所用仪器简单，操作方便，耗时少的优点.我们曾使用非水溶液滴定法来测量小叶地不容中的总生物碱含量，测定总生物碱含量在5%-6%之间，与紫外-分光光度法比较，所得的结果误差较大，其主要原因可能是由于指示剂结晶紫的颜色变化不灵敏，使得对滴定终点的判断产生较大的视觉误差，导致所测总生物碱的含量的重现性不好，精密度也较差.本文研究结果可为小叶地不容的开发利用提供科学依据.

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第三十卷(第一分册)[M].北京：科学出版社,1996:65-67.

[2]杨德兰,梅文莉,戴好富.小叶地不容块根中的细胞毒活性生物碱[J].中国药物化学杂志,2010,20(3):206-210.

[3]罗肖雪,陈光英,张一,等.反HPLC相法测定小叶地不容中四氢巴马汀的含量[J].中药材,2006,29(10):1050-1051.

[4]陈嬿,方圣鼎,矶具,等.千金藤属植物小叶地不容中的生物碱（VIII）[J].植物学报,1989,31(7):544-548.

[5]薛智,张佩玲,马建民.小叶地不容生物碱的研究[J].药学学报,1986,21(3):223-225.

[6]毕和平,李行璐,刘炜,等.酸性染料比色法测定海南木莲中的总生物碱[J].海南师范大学学报:自然科学版,2009,22(2):160-163.

[7]程华,余龙江,胡琼月,等.分光光度法测定岩黄莲不同部位总生物碱的含量[J].时珍国医药,2006,17(3):364-365.

Determination of Total Alkaloids in Stephania Succifera H.S.Lo et Y.Tsoong

LIU Xiuping1，HUANG Xiangwei2，LIU Wei2＊
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Jinzhong College，Jinzhong030600，China；2.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China）

In order to fully develop and utilize Stephania succifera H.S.Lo et Y.Tsoong,using Soxhlet extractor to ex⁃tract total alkaloids from the samples and tested at 416 nm by the spectroscopy with the Berberine hydrochloride stan⁃dard in citric acid and sodium citrate buffer solution at pH=5.4,taking bromocresol green as to color developing reagent.the standard equation wasA=-0.00758+0.03842C,r=0.999 9（n=6）,and the average recovery rate was 106.8%（n=5）.The content of alkaloids in tuberous root of Stephania succifera H.S.Lo et Y.Tsoong was 2.93%,RSD=0.40%（n=5）.Compared with the nonaqueous titration method,this method is simple,fast,accurate and dependable.

Stephania succifera H.S.Lo et Y.Tsoong；Total alkaloids；Spectroscopy

R 284.1

A

1674-4942（2011）02-0174-03

2011-03-03

海南省自然科学项目(20804)

*通讯作者

毕和平