黄藤合剂的急性毒性和药效学研究

范念斯, 杨军英, 赵青青

(河南师范大学 生命科学学院 省部共建细胞分化调控重点实验室 河南 新乡 453007)

黄藤合剂的急性毒性和药效学研究

范念斯, 杨军英, 赵青青

(河南师范大学 生命科学学院 省部共建细胞分化调控重点实验室 河南 新乡 453007)

用热板法和扭体法研究黄藤合剂镇痛效果，测定毛细血管通透性和炎症组织PGE2含量以研究其抗炎活性及机理.小鼠灌胃给予黄藤合剂最大给药量76.8 g/kg后，7天内未见明显异常变化.黄藤合剂8 mg/kg即能明显提高小鼠对热刺激的痛阈值，减少醋酸引起的扭体次数，降低毛细血管通透性，减少炎症组织PGE2的含量.16 g/kg，还能推迟疼痛反应出现的时间，延长潜伏期.黄藤合剂具有镇痛抗炎作用，最大给药量为76.8 g/kg，其作用机理可能与减少PGE2含量有关.

黄藤合剂； 镇痛； 抗炎

0 引言

黄藤又称雷公藤、断肠草、红药等，是卫茅科雷公藤属植物雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook.F.)的根及根茎，性味苦，有大毒[1].其主要成分能够抑制炎性因子的表达，具有抑制炎症反应和免疫作用，临床上用于治疗各种自身免疫性疾病，疗效显著[2]，但由于毒副作用较大而限制了其广泛应用.国外研究黄藤毒性作用的文献较多，而减毒方面的研究很少.国内研究主要集中于通过中药配伍对抗黄藤的毒副作用[3-4].黄藤合剂是以雷公藤为主药，辅以当归、红花等中药制成的酒剂，临床用于治疗风湿和类风湿性关节炎.为评价其安全性和有效性，本文探讨其镇痛抗炎作用和毒性，为临床应用提供实验依据.

1 材料

1.1实验动物

昆明种小鼠，20±2.0 g，由河南师范大学实验动物中心提供.将小鼠随机分组，分别为生理盐水对照组(NS组)，阿司匹林阳性对照组，黄藤合剂组.黄藤合剂组的给药剂量分别为：4 g/kg，8 g/kg，16 g/kg.

1.2药物与试剂

黄藤合剂：市中医院制剂室制备.规格：250 mL，每10 mL含生药2.0 g， 47°高粱酒的含量为15%(V/V).药物在给药前水浴浓缩，去掉部分水分后，再用47°高粱酒配制成每10 mL含生药8 g 的浓缩液，4 ℃冰箱保存.给药前稀释成所需浓度.阿司匹林肠溶片：陕西白鹿制药厂生产，25 mg/片.醋酸、角叉菜胶、伊文思蓝、氢氧化钾、甲醇等.

1.3实验器材

721分光光度计(上海第三分析仪器厂)；800型电动离心沉淀器；电热恒温水浴锅；电热真空干燥箱等.

2 方法与结果

2.1黄藤合剂的急性毒性实验

黄藤合剂水浴蒸发去醇后，45 ℃干燥后加蒸馏水稀释至最大浓度.取小鼠20只，给药前禁食14 h.按0.04 mL/g剂量一次性于早晨8：00灌胃给药.给药当天动物精神不振，耸毛、蜷缩，进食减少，次日恢复正常.给药后观察7 d，小鼠进食、大、小便、呼吸、体重等均无明显异常变化，无一死亡.计算小鼠的最大给药量为76.8 g/kg，相当于60 kg体重成人每日用量的400倍.在小鼠灌胃给予最大体积最大浓度药物的情况下，未出现动物死亡，推测该药可能测不出半数致死量(LD50).

2.2热板法

取雌鼠50只，筛选出舔后足时间在 5～30 sec之间且不跳跃的小鼠作为合格鼠.灌胃给药，每天一次，连续6 d,末次给药后，于55± 0.5 ℃测定其痛阈值.结果表明，黄藤合剂8 g/kg 和16 g/kg分别能提高小鼠60 min 和30 min痛阈值，与正常组相比有显著性差异.

表1 黄藤合剂对小鼠热刺激的影响

注：和NS组比较，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.3扭体法

取小鼠50只，雌雄各半.末次给药后45 min，腹腔注射0.8%的醋酸0.01 mL/g.记录扭体反应出现的时间和20 min内的扭体次数.黄藤合剂8 g/kg和16 g/kg能减少小鼠的扭体次数，且黄藤合剂16 g/kg还可以延长潜伏期，抑制疼痛反应的出现，与正常组相比有显著性差异.

表2 黄藤合剂对小鼠扭体反应的影响

注：和NS组比较，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.4对角叉菜胶致小鼠足肿的影响

取小鼠50只，雌雄各半.末次给药后45 min，给每只小鼠左后足皮下注射1%的角叉菜胶20 mg/kg，4 h后处死，沿踝关节剪下双足，精密称重，求肿胀度.将左足剪碎在2 mL生理盐水溶液中浸泡1 h后，3 000 rpm离心15 min，取上清液400 μL，再加入KOH-CH3OH溶液于50 ℃水浴中异构化20 min，测定278 nm处OD值.炎性介质PGE2用碱水处理易脱水，异构化后变为PGB1，PGB1的紫外吸收波长为278 nm.通过测定PGB1的OD值可间接测得PGE2的含量.实验结果表明，黄藤合剂8 g/kg和16 g/kg能抑制角叉菜胶引起的足肿胀，16 g/kg能明显减少PGE2含量，与生理盐水组相比有显著性差异.

表3 黄藤合剂对角叉菜胶引起小鼠足肿胀和PGE2含量的影响

注：和NS组比较，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.5对毛细血管通透性的影响

取小鼠50只，雌雄各半.末次给药45 min后，每只小鼠尾静脉注射伊文思蓝0.01 mL/g，20 min后处死小鼠，抽取腹腔液，取其上清液于590 nm处测OD值.伊文思蓝静脉注射时可以和血浆蛋白瞬间结合，通过比色法测得OD值来衡量腹腔渗出液的染料量以间接反映炎性渗出的多少.实验结果表明，黄藤合剂8 kg/g和16 g/kg均能明显降低毛细血管通透性，与NS组相比有显著性差异.

表4 黄藤合剂对小鼠毛细血管通透性的影响

注：和NS组比较，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

3 讨论

雷公藤主要含有生物碱类、二萜类、三萜类、倍半萜及糖类成分[5]，其主要毒性物质是二萜类和生物碱[6].大量药理及临床研究已证明其提取物和某些成份具有免疫调节和抗炎作用[5]，其中雷公藤内脂和雷公藤多甙能抑制佐剂性关节炎组织IL-1和NO的生成[7-9].

本研究采用小鼠扭体法和热板法两种疼痛模型，观察到黄藤合剂能明显减少醋酸刺激所致扭体反应次数；显著提高小鼠由热刺激所致疼痛的痛阈值.小鼠热板法在测定麻醉性镇痛药时较为常用，舔足底动作可能和高级中枢有关，提示黄藤合剂镇痛部位可能在中枢.此外，本实验结果表明，黄藤合剂能抑制角叉菜胶引起的足肿胀，减少PGE2的含量，还能降低毛细血管通透性，减轻炎性症状.

为了消除乙醇对实验的影响，我们在急性毒性实验时采取了水浴去醇，只反映药物对动物的毒性.研究发现黄藤合剂灌胃给药至76.8 g/kg时小鼠还未出现毒性死亡，大于临床给药量的100倍.而以单味黄藤制备的黄藤酊其LD50是9.646 g/kg.因此，黄藤合剂具有疗效确切，毒副作用小，安全范围大的优点，适于临床应用，其毒性小可能与合理配伍有关.

[1] 刘晓辉，韩明向，刘健．雷公藤及其制剂治疗类风湿性关节炎的研究进展[J]．安徽中医学院学报，2003，22(5)：60-61．

[2] 胡南，吕晓雅，饶宗建．雷公藤内酯醇对MRL/lpr狼疮鼠血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平的影响[J]．中外医疗，2010，29(18)：5-8．

[3] 施栋磊，朱华旭，潘林梅．中药配伍雷公藤减毒作用的研究进展[J]．中国药事，2009，23(11)：1136-1140．

[4] 张学梅，廉莲，梁文波．复方雷公藤多苷的毒性研究[J]．辽宁中医杂志，2003，32(7)：719-720．

[5] 吴宽裕，刘宏，郑春姑．雷公藤药物属性及其临床应用问题[J]．中国医学创新，2009，6(33)：28-29．

[6] Duan H Q，Takaishi Y，Imakura Y，et al．Sesquiterpene alkaloids fromTripterygiumhypoglaucumandTripterygiumwilfordii:A new class of potent anti-HIV agents[J]．Nat Prod，2000，63(3)：357-361．

[7] 黄慧琴．雷公藤内酯醇对大鼠佐剂性关节炎的影响[J]．福建医药杂志，2008，30(1)：87-89．

[8] 杨琴，杨桂枝，王蕾，等．雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠的作用[J]．四川解剖学杂志， 2006，14(1)11-12．

[9] 韦登明，焦效兰，孟丹，等．雷公藤内酯醇抑制佐剂性关节炎组织NO生成的实验研究[J]．浙江中医杂志，2007，42(11)：661-663．

EffectsonAcuteToxicity，AnalgesiaandAnti-inflammatoryofHuangtengVinuminMice

FAN Nian-si, YANG Jun-ying, ZHAO Qing-qing

(KeyLaboratoryforCellDifferentiationRegulation,CollegeofLifeSciences,HenanNormalUniversity,Xinxiang453007,China)

Pain threshold and reaction were used to detect analgesic effect; blood capillary permeability and the content of PGE2in inflammatory tissue were used to study anti-inflammatory effect.The maximum dose of administratior without toxicity was 76.8 g/kg, 100 folds greater than that of adult of 60 kg body weight.Huangteng Vinum could obviously relieved the pain reaction induced by thermal stimulus as well as HAc in mice.It also could inhibit the swelling of foot and reduce the content of PGE2induced by carrageenan, and inhibit blood capillary permeability.Huangteng Vinum was safe administrated per o.s., and it possess analgesic and anti-inflammatory effect, which may relate to reduction of the content of PGE2.

Huangteng Vinum； analgesic； anti-inflammatory

R 962； Q 946.887

A

1671-6841(2011)03-0121-04

2010-10-04

河南师范大学科研启动项目，编号0714；河南师范大学青年科学基金资助项目，编号525195.

范念斯(1990-)，女，本科，E-mail：fanyuling001@sina.com;通讯作者：杨军英(1971-)，女，副教授，主要从事药物活性研究.