HPLC 法同时测定茵苓祛湿汤中绿原酸、栀子苷的含量

2011-08-06唐年忠吴生齐杨立伟广东省食品药品监督管理局审评认证中心广州市50080广东省药品检验所广州市5080

中国药房 2011年39期

唐年忠，吴生齐，杨立伟（.广东省食品药品监督管理局审评认证中心，广州市50080；.广东省药品检验所，广州市 5080）

茵苓祛湿汤为由金银花、茵陈、茯苓、栀子、布渣叶、木棉花、甘草、神曲等13味药材组成的临床验方，功效为祛湿化浊、清热消滞，临床主要用于气滞郁湿所致之湿热证。绿原酸为方中主药金银花与茵陈的指标性成分，具有抗病毒、抗菌消炎、清除自由基、降糖、降脂、保肝利胆等多种功效[1]。栀子中含有环烯醚萜苷类有效成分，包括栀子苷、京尼平苷、羟异栀子苷、栀子苷酸等，其中含量最高的是栀子苷和京尼平苷[2]，具有解热镇痛、镇静催眠、保肝利胆、抗炎杀菌、降压、防动脉粥样硬化、抗血栓、免疫抑制等作用[3]。本试验采用高效液相色谱（HPLC）法测定茵苓祛湿汤中绿原酸、栀子苷的含量[4，5]，以为该方剂的新药开发提供参考。

1 仪器与试药

HPLC仪，含SIL-20A自动进样器、LC-20AT四元梯度泵、SPD-20A紫外检测器、LC solution化学工作站（日本岛津公司）。

绿原酸、栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为110753-200413、0749-200007）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；茵苓祛湿汤（为拟开发成医院制剂的临床煎剂，批号：090203、090204、090205）；所用药材均为市售品，均经广州中医药大学中药学院张军教授鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（13∶87）；流速：1.0 mL·min-1；双波长检测：绿原酸327 nm、栀子苷238 nm；柱温：室温；进样量：5µL。在上述色谱条件下，绿原酸、栀子苷分离度良好。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.2 混合对照品溶液的制备

取绿原酸、栀子苷对照品各适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含绿原酸0.08 mg、栀子苷0.18 mg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备

按处方比例称取金银花、茵陈、茯苓、栀子、布渣叶、木棉花、甘草、神曲等13味药材共63.5 g，加水煎煮2次（10、8倍量），每次1 h。滤过，合并药液，测定体积。精密量取相当于1.00 g生药的提取液，置25 mL棕色容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以0.45µm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

另按处方比例，分别同法制备缺金银花、茵陈阴性对照溶液与缺栀子阴性对照溶液。

2.4 线性关系考察

精密吸取上述混合对照品溶液2、4、8、12、16 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。分别以绿原酸、栀子苷的进样量（X，μg）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得绿原酸、栀子苷的回归方程分别为Y＝2.69×106X+8 521（r＝0.999 7，n＝5）、Y＝1.47×106X－13 294（r＝0.999 9，n＝5）。结果表明，绿原酸、栀子苷的进样量分别在0.154 4～1.235 2、0.363 2～2.905 6 μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系。