仔猪高致病性猪蓝耳病首免日龄抗体测定试验

韩先桂 王佩良 邵坤 顾勇 韩先英 丁继业 （江苏省盱眙县动物疫病预防控制中心 211700）



仔猪高致病性猪蓝耳病首免日龄抗体测定试验

韩先桂 王佩良 邵坤 顾勇 韩先英 丁继业 （江苏省盱眙县动物疫病预防控制中心 211700）

通过对14日龄、21日龄和28日龄仔猪免疫的蓝耳抗体检测，结果表明，猪蓝耳病疫苗的首免时间为14~21日龄最好。

高致病性 蓝耳病 首免日龄 抗体测定

高致病性猪蓝耳病是近年来危害我国养猪业的最重要传染病。接种高致病性猪蓝耳病疫苗是综合防控高致病性猪蓝耳病的主要措施，但由于各猪场的母猪群、仔猪间母源抗体的分布参差不齐，免疫时间更是千差万别，导致许多猪场出现经过高致病性猪蓝耳病疫苗免疫但还是发生高致病性猪蓝耳病的现象，尤其是各猪场仔猪群免疫时，由于母源抗体滴度对高致病性猪蓝耳病弱毒苗的免疫保护效力有影响，导致疫苗接种达不到预期效果。为了确定本地区仔猪高致病性猪蓝耳病首免日龄，特进行了仔猪群高致病性蓝耳病母源抗体滴度测定和母源抗体水平较低状态时仔猪不同日龄免疫效力的小样本试验。

1 试验方法

检测猪血清中蓝耳病抗体的酶联免疫吸附试验。

1.1 方法 是采用猪蓝耳病病毒N蛋白的基因工程表达产物包被微孔板。在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有猪蓝耳病N蛋白的特异性抗体，则将与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合酶结合物，在孔中加入TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。

1.2 判定标准 在酶标仪上测各孔OD630nm值，试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔平均OD630nm值<0.3。样品OD630nm值>0.42，判为阳性；样品OD630nm值介于0.387到0.42之间，判为可疑；样品OD630nm值<0.38，判为阴性。

2 试验材料

2.1 供试动物 在本县的盱眙永顺生态农业有限公司规模养猪场选择30头14、21、28日龄乳猪，在较低水平猪蓝耳病母源抗体状态时，按照每头猪1头份的标准剂量开展免疫试验，分别在免疫后2、3、4、5、6周进行抗体监测。

2.2 试验器材 武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒(ELISA)、酶标仪、微量移液器(10~1000ml)、滴头(10~1000ml)、微量振荡器、恒温箱等。

2.3 试验试剂 广东大华农动物保健品股份有限公司生产的生产批号20101215，生产日期20100325的高致病性猪繁殖与呼吸综合症活疫苗(JXA1-R株)为试验疫苗。

2.4 被检血清采集 采用猪前腔静脉采血技术，对试验猪进行逐头采血2ml未免疫前先检测母源抗体水平。再对14、21、28日龄的3组仔猪分别于接种1头份高致病性猪繁殖与呼吸综合症活疫苗(JXA1-R株)后2、3、4、5、6周进行逐头采血2ml，登记耳标号，做好血样标签，离心血清冷藏保存备用。

3 试验步骤

3.1 分组登记 对供试验猪只按14、21、28日龄分组，对耳标号(或母猪耳标号)、高致病性猪蓝耳病免疫时间等做详细记录。

3.2 免疫试验 在试验猪只颈部外侧肌肉注射试验用高致病性猪繁殖与呼吸综合症活疫苗(JXA1-R株)，所用疫苗的免疫剂量为1ml/头，

3.3 抗体检测 采用猪前腔静脉采血技术，对试验动物进行逐头采血2ml检测母源抗体水平。在试验猪只免疫2、3、4、5、6周后进行抗体监测。逐头采集血液2ml，送盱眙县动物疫病预防控制中心实验室分离血清用猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒(ELISA)检测。结果详细记录待分析。

3.4 数据处理 将试验数据记录整理，统计分析处理，形成报告。

4 试验结果与分析

4.1 试验结果 14日龄10头仔猪，登记耳标号，从14日龄开始采血检测仔猪蓝耳病的母源抗体，免疫2周后每周采血1次，即第28、35、42、49、56日龄时采血检测蓝耳抗体OD630nm值，结果见表l。

表1 14日龄首免蓝耳抗体检测结果

21日龄10头仔猪，登记耳标号，免疫前采血检测仔猪蓝耳病的母源抗体，免疫2周后每周采血1次，即第35、42、49、56、63日龄时采血检测蓝耳病抗体OD630nm值，结果见表2。

表2 21龄首免蓝耳抗体检测结果

28日龄10头仔猪，登记耳标号，免疫前采血检测仔猪母源抗体，免疫2周后每周采血1次，即第42、49、56、64日龄时采血检测蓝耳病抗体OD630nm值，结果见表3。

表3 28日龄首免蓝耳抗体检测结果

4.2 检测分析 根据仔猪母源抗体水平的消长规律制定高致病性猪繁殖与呼吸综合症活疫苗首免日龄。检测时二孔阳性对照OD630nm值为1.907、1.779；二孔阴性对照OD630nm为0.072、0.202。该试验阳性对照空平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔平均OD630nm值<0.3所以试验成立。

试验仔猪血样OD630nm值>0.42，判为阳性；样品OD630nm值介于0.38之0.42之间，判为可疑；样品OD630nm值<0.38，判为阴性。由表l、2、3结果可知，14~28日龄仔猪OD630nm值<0.38，判为阴性，蓝耳病母原抗体水平较低。为了达到免疫合格和群体抗体水平合格率80%以上的要求，仔猪首免日龄最好选在母源抗体不会影响疫苗效果，又能防御病毒侵袭的期间，即仔猪母源抗体水平较低时，由上表可知，该仔猪群母源抗体在14、21、28日龄乳猪OD630nm值<0.38(10/10)、(10/10)、(9/10)，故确定该场仔猪群首免日龄应在14~21日龄时。

由上表可知，3个试验组仔猪接种1头份蓝耳苗后2周时检测结果分析，3个试验组检测OD630nm值>0.42的为阳性即达到保护率，保护率分别为0%(0/10)、0%(0/10)、60%(6/10)；免疫3周检测3组的OD630nm值，保护率分别为40%(4/10)、0%(0/10)、90%(9/10)；免疫4周检测抗体3组的OD630nm值，保护率分别为100%(10/10)、30%(3/10)、90%(9/10)；免疫5周检测3组的抗体OD630nm值，保护率为100%(10/10)、70%(7/10)、100%(10/10)；免疫6周检测抗体OD630nm值，保护率分别为100%(10/10)、100%(10/10)、100%(10/10)。

5 小结

第1组在免疫接种后OD630nm值逐渐提高，4周后保护率为100%(10/10)；第2组免疫后发生流行性腹泻，故而前期对OD630nm值增高产生影响，腹泻全愈以后OD630nm逐步提高，5周达到70%(7/10)；第3组在免疫接种5周后抗体的保护率达到100%(10/10)。可见猪只健康的情况下，注射蓝耳病疫苗5周后都可以产生较强的抗体保护率。

积极开展免疫检测，建立本场猪群抗体的基准线。本县高致病性猪蓝耳病免疫没有统一可靠的的免疫程序，根据该场仔猪高致病性猪蓝耳病免疫测定的小样本试验，建议本地区生猪高致病性猪蓝耳病的首免为14~21日龄，肌注1头份/头。但各规模猪场要结合本场具体实际，及根据母源抗体水平确定本场高致病性猪蓝耳病首免日龄，积极开展免疫监测，建立其猪群的抗体基准线，确保高致病性猪蓝耳病抗体保护率到达较高的水平，为养猪业的健康发展提供科学的依据。

（2011–07–07）

S858.28

A

1007-1733(2011)10-0006-02