中药迷迭香化学成分的分离与鉴定

王珲， 高慧媛， 张振秋， 吴立军*

(1.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016;2.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)

中药迷迭香化学成分的分离与鉴定

王珲1，2， 高慧媛1， 张振秋2， 吴立军1*

(1.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016;2.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)

目的:对中药迷迭香Rosmarinus officinalisL.的化学成分进行研究。方法采用硅胶、凝胶柱色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质和NMR波谱数据进行结构鉴定。结果分离得到8个化合物，分别鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol， 1)、 4′， 5-二羟基-7-甲氧基黄酮(4′， 5-dihydroxy-7-methoxyflavone， 2)、 熊果醇(uvaol， 3)、 3， 5-二羟基-7， 3′， 4′-三甲氧基黄酮(3， 5-dihydroxy-7， 3′， 4′-trimethoxyflavone， 4)、 5-羟基-4′， 7-二甲氧基-6-甲基黄酮(5-hydroxy-4′， 7-dimethoxy-6-methylflavone， 5)、 槲皮素(quercetin， 6)、 芦丁(rutin， 7)、 阿魏酸(ferulicacid， 8)。结论化合物2、4、5为首次从该属植物中分离得到。

迷迭香;化学成分;结构鉴定

迷迭香Rosmarinus officinalisL.系唇形科(Labiatae)迷迭香属(Rosmarinus)植物，原产自地中海沿岸。目前，我国云南、贵州、广西、海南和新疆等地都有大面积栽种。迷迭香性温，味辛，具有芳香健胃、镇静安神等功效[1]。迷迭香作为天然植物，有很好的抗氧化、抗炎、抗病毒、抗肿瘤等药理作用[2]。主要成分为黄酮类、萜类、酚类等，其中二萜酚类成分具有多种活性[3]。水溶性成分迷迭香酸在抗炎、抗血栓等方面有良好的应用[4]。对迷迭香化学成分的深入研究，将有利于其进一步的开发和利用。作者对中药迷迭香75%乙醇提取物的化学成分进行了研究，从提取物的醋酸乙酯层萃取部分分离鉴定了8个化合物，分别为β-谷甾醇(βsitosterol， 1)、 4′， 5-二羟基-7-甲氧基黄酮(4′， 5-dihydroxy-7-methoxyflavone， 2)、 熊果醇(uvaol， 3)、3， 5-二 羟 基-7， 3′， 4′-三 甲 氧 基 黄 酮 (3， 5-dihydroxy-7， 3′， 4′-trimethoxyflavone， 4)、 5-羟 基-4′， 7-二 甲 氧 基-6-甲 基 黄 酮 (5-hydroxy-4′， 7-dimethoxy-6-methylflavone， 5)、 槲 皮 素 (quercetin，6)、芦丁(rutin，7)、阿魏酸(ferulic acid，8)，其中化合物2、4、5为从该属植物中首次分离得到。化合物2～8的结构式见图1。

图1 化合物2～8的化学结构

1 仪器和材料

Bruker ARX-300、AV-600型核磁共振仪(TMS内标，瑞士 Bruker公司)。柱色谱用硅胶(200～300目)、薄层色谱用硅胶GF254(10～40μm)均为青岛海洋化工有限公司生产，其余所用试剂均为分析纯。

迷迭香药材购于安徽亳州华申药业有限公司，经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为迷迭香Rosmarinus officinalisL.的全草。

2 提取与分离

迷迭香干品(7 kg)粉碎，预先用石油醚加热回流提取3次，每次2 h，除叶绿素，继后药渣用体积分数为75%乙醇加热回流提取3次，每次分别为2，2，1 h，提取液过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到醇提物浸膏965 g，以10倍量水将浸膏分散，分别用醋酸乙酯和正丁醇进行萃取，采用硅胶、凝胶柱色谱等方法对醋酸乙酯萃取物(400 g)进行反复分离，经不同体积比的三氯甲烷-甲醇梯度洗脱(体积比100∶1～1∶1)和重结晶等方法，分离得到化合物1(20 mg)、2(20 mg)、3(13 mg)、 4(17 mg)、5(5 mg)、 6(15 mg)、 7(12 mg)、 8(10 mg)。

3 结构鉴定

3.1 化合物1

无色针晶(丙酮)，香草醛-浓硫酸显紫红色，与已知对照品β-谷甾醇共薄层检测，在3种溶剂系统下展开，二者薄层行为完全一致，鉴定其为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

3.2 化合物2

黄色结晶(三氯甲烷)，盐酸-镁粉反应为阳性。1H-NMR(300 MHz，CDCl3) 谱中， δ12.88(1H，s)为5-OH质子信号;δ7.94(2H，d，J=8.8 Hz)，7.01(2H， d，J=8.8 Hz) 分别为 B环 2′、 6′和 3′、5′位质子信号; δ6.49(1H， d，J=3.8 Hz)， 6.58(1H，d，J=3.6 Hz)分别为6、8位质子信号;δ6.37(1H，s)为C环上3位质子信号，3.93(3H，s)为甲氧基质子信号。13C-NMR(75 MHz，CDCl3)谱中给出16个碳信号，其中δ182.4为1个羰基碳信号;δ55.8为1个甲氧基碳信号。其碳谱数据归属见表1。以上谱学数据与文献[5]报道的4′，5-二羟基-7-甲氧基黄酮谱学数据一致。鉴定其为4′，5-二羟基-7-甲氧基黄酮(4′， 5-dihydroxy-7-methoxyflavone)，为首次从迷迭香属植物中分离得到。

3.3 化合物3

白 色 粉 末 (三 氯 甲 烷)。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)显示，δ0.80(3H，s)，0.81(3H，d，J=6.3 Hz)， 0.94(3H， d，J=6.3 Hz)， 0.95(3H， s)，0.99(3H，s)，1.00(3H，s)，1.11(3H，s) 给出7个甲基信号;δ5.14(1H，t，J=3.2 Hz)为双键上的1个质子信号，推测为乌苏烷型三萜类化合物。结合13C-NMR(150 MHz，CDCl3)谱，δ69.9为五环三萜类化合物的28位羟甲基碳信号，δ125.0，138.7为SP2杂化碳上的信号，综上推测为乌索醇三萜;其余碳谱信号如下δ:38.7(C-1)，27.2(C-2)，79.0(C-3)， 38.7(C-4)， 55.1(C-5)， 18.3(C-6)， 32.8(C-7)， 39.4(C-8)， 47.6(C-9)， 45.3(C-10)， 23.3(C-11)， 42.0(C-14)， 26.0(C-15)， 23.3(C-16)， 36.8(C-17)， 54.0(C-18)， 39.3(C-19)， 39.4(C-20)，35.1(C-21)， 30.6(C-22)， 28.1(C-23)， 15.6(C-24)， 15.7(C-25)， 16.7(C-26)， 23.3(C-27)， 17.3(C-29)，21.3(C-30)。以上谱学数据与文献[6]报道的熊果醇谱学数据一致，鉴定其为熊果醇(uvaol)。

3.4 化合物4

黄色针晶(甲醇)，1H-NMR(300 MHz， DMSO-d6) 谱中，δ3.81(3H，s)，3.86(3H，s)，3.87(3H，s)为3组甲氧基质子信号;6.36(1H，d，J=2.0 Hz)，6.77(1H，d，J=2.0 Hz) 为5，7二氧取代黄酮6，8位质子信号;δ6.96(1H，d，J=8.4 Hz)， 7.62(1H， dd，J=8.5， 1.8 Hz)， 7.67(1H，d，J=1.8 Hz)为黄酮B环AMX偶合系统的质子信号;δ9.98(1H，s)，12.7(1H，s)分别为3、5位羟基质子信号。13C-NMR(75 MHz，DMSO-d6)谱中，δ178.8为1个羰基碳信号，δ56.0，56.3，59.9为3个甲氧基碳信号，其碳谱数据归属见表1。该化合物的谱学数据与文献[7]报道基本一致，鉴定其为 3， 5-二羟基-7， 3′， 4′三甲氧基黄酮(3， 5-dihydroxy-7， 3′， 4′-trimethoxyflavone)， 为首次从迷迭香属植物中分离得到。

表1 化合物2、4、5、7的13 C-NMR化学位移数据

3.5 化合物5

黄色针晶 (三氯甲烷)，1H-NMR(300 MHz，CDCl3)谱中，δ12.91(1H，s)为A环5-OH质子信号; δ7.87(2H， d，J=8.9 Hz)， 7.04(2H， d，J=8.9 Hz)为B环上AA′BB′偶合系统质子信号;δ6.52(1H，s)，6.61(1H，s)为A环6、8位质子信号;δ3.95(3H，s)，3.91(3H，s)为2个甲氧基质子信号;δ2.14(3H，s)为甲基质子信号。13C-NMR(150 MHz，CDCl3) 谱中， δ55.9，55.5为两个甲氧基信号，δ7.3为甲基信号，其碳谱数据归属见表1。该化合物的谱学数据与文献[8]报道基本一致，鉴定其为5-羟基-4′，7-二甲氧基-6-甲基黄酮(5-hydroxy-4′， 7-dimethoxy-6-methylflavone)， 为首次从迷迭香属植物中分离得到。

3.6 化合物6

黄色针晶(甲醇)，盐酸-镁粉反应为阳性，Molisch反应呈阴性。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6) 谱中， δ6.20(1H， d，J=2.0 Hz)，6.40(1H， d，J=2.0 Hz)为黄酮B环6、8位质子信号;δ6.87(1H，d，J=8.5 Hz)， 7.53(1H， dd，J=8.5， 2.2 Hz)， 7.67(1H，d，J=2.2 Hz)为B环AMX偶合系统质子信号;9.30(1H，s)，10.76(1H，s)，12.48(1H，s) 分别为3、7和5位-OH质子信号。该化合物的谱学数据与文献[9]报道的槲皮素完全一致，与槲皮素对照品共薄层检测，在3种溶剂系统下展开，其薄层行为完全一致，鉴定该化合物为槲皮素(quercetin)。

3.7 化合物7

黄色粉末(甲醇)，盐酸-镁粉反应和Molisch反应均为阳性，薄层酸水解检测含有葡萄糖和鼠李糖。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6) 谱中， δ6.18(1H， d，J=1.6 Hz)， 6.38(1H， d，J=1.6 Hz)为5，7-二氧取代黄酮 A环 6、8位质子信号;δ6.87(1H， d，J=8.5 Hz)， 7.66(1H， dd，J=8.5，2.2 Hz)，7.52(1H，d，J=2.2 Hz) 为黄酮B环AMX偶合系统质子信号;δ5.36(1H，d，J=7.7 Hz)为糖的端基质子信号;12.68(1H，s)为A环5-OH质子信号。13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)谱中，给出27个碳信号， 其中 δ101.2(C-1″)， 74.1(C-2″)，76.5(C-3″)， 70.4(C-4″)， 76.0(C-5″)， 67.1(C-6″) 为一组葡萄糖碳信号; δ100.9(C-1″′)， 70.6(C-2″′)，70.1(C-3″′)， 71.9(C-4″′)， 68.3(C-5″′)， 17.9(C-6″′)为一组鼠李糖碳信号。其余苷元部分碳谱数据归属见表1。该化合物的谱学数据与文献[10]报道完全一致，鉴定该化合物为芦丁(rutin)。

3.8 化合物8

无色针晶(甲醇)，溴甲酚绿反应呈阳性，提示结构中有羧基存在;FeCl3反应呈阳性，提示结构中有酚羟基存在，与对照品阿魏酸共薄层检测，在3种溶剂系统下展开，其薄层行为完全一致，鉴定该化合物为阿魏酸(ferulic acid)。

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Isolation and Identification of Chemical Constituents from Rosmarinus Officinalis L.

WANG Hui1，2，GAO Hui-yuan1，ZHANG Zhen-qiu2，WU Li-jun1
(1.School of traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang110016，China;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China)

Objective:To isolate the chemical constituents fromRosmarinus officinalisL.and identify their structures.Methods:The compoundswere isolated by chromatography on silica and gel column，and their structures were identified by the physico-chemical properties and NMR spectral analysis.Results:Eight compounds were obtained and identified as β-sitosterol(1)，4′，5-dihydroxy-7-methoxyflavone(2)，uvaol(3)，3，5-dihydroxy-7，3′，4′-trimethoxyflavone(4)，5-hydroxy-4′，7-dimethoxy-6-methylflavone(5)，quercetin(6)，rutin(7)，ferulic acid(8)，respectively.Conclusion:Compounds 2，4 and 5 were obtained from this genus for the first time.

Rosmarinus officinalisL.;Chemical constituents;Structural identification

*吴立军，E-mail:wulijun-111@hotmail.com

2010-07-08)