鸡抗小鹅瘟精致高免蛋黄抗体的研制

2011-11-05兰信海冯永胜衣服德山东省青岛市畜牧兽医研究所266100

山东畜牧兽医 2011年4期

兰信海冯永胜衣服德（山东省青岛市畜牧兽医研究所 266100）

鸡抗小鹅瘟精致高免蛋黄抗体的研制

兰信海冯永胜衣服德（山东省青岛市畜牧兽医研究所 266100）

利用发生小鹅瘟死亡的鹅的病料分离病毒，经处理后制备抗原，以制备的小鹅瘟灭活油乳剂抗原对试验鸡颈部皮下注射0.5ml/只；2周后加倍量进行强化免疫；间隔2周后用灭活油乳剂抗原再次强化免疫1次，颈部皮下注射2.0ml/只；以后间隔8周进行1次强化免疫，每次颈部皮下注射2.0ml/只；用琼扩方法检测萃提蛋黄上清液中抗小鹅瘟特异抗体效价，直到抗体效价达到1:64以上即可集蛋，用于制备琼扩抗体效价达到1:32及以上小鹅瘟蛋黄抗体；并对抗体进行无菌检验、安全试验、效力试验、临床治疗试验等，效果明显。

小鹅瘟高免蛋黄抗体强化免疫

小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的雏鹅急性败血性传染病。病雏鹅的临诊特点是精神委顿，食欲废绝，严重下痢，有时出现神经症状，死亡率高。对养鹅业的发展，影响极大，搞好小鹅瘟的防治工作是当务之急小鹅瘟高免抗体对于治疗该病效果明显。

1 材料和方法

1.1 毒种及抗原的制备将冷冻保存的患小鹅瘟疾病死亡的小鹅肠道病料按照1:5加灭菌生理盐水捣碎，冻融2次后，形成混合组织悬液；将混合组织悬液进行4 000rpm离心，收集上清液并于56℃处理30min，每毫升加入青霉素和链霉素1 000IU，4℃处理2h；将青、链霉素处理后的种毒液用灭菌生理盐水稀释100倍，经0.22mm微孔滤膜过滤除菌，以0.1ml/只的剂量接种13~15日龄非免疫鹅胚尿囊腔，37℃孵育，弃去48h内的死亡鹅胚，收集48~120h内死亡的胚；无菌采集尿囊液及羊水作为抗原；

1.2 疫苗的制备将收获的尿囊毒液中加入0.1%甲醛溶液，37℃密闭灭活48h；灭活完成后，按灭活毒液96份，灭菌吐温-80，4份配制，即为制苗用抗原；按油相3份、水相1份的比例取油相、水相搅拌均匀，加入高压均质机中，调节压力为35mpa，乳化制备成小鹅瘟灭活油乳剂疫苗，并加入1%硫柳汞溶液使之终浓度为0.01%；

1.3 试验动物的选择选择健康无病，200日龄蛋鸡100只供试验用。

1.4 抗体的制作（1）以制备的小鹅瘟灭活油乳剂抗原对试验鸡颈部皮下注射0.5ml/只；2周后，以制备的小鹅瘟灭活油乳剂抗原颈部皮下注射1.0ml/只，进行强化免疫；间隔2周后用灭活油乳剂抗原再次强化免疫1次，颈部皮下注射2.0ml/只；以后间隔8周进行1次强化免疫，每次颈部皮下注射2.0ml/只；（2）从第2次强化免疫后第７d开始，每隔3d抽样用琼脂扩散方法测定高免蛋黄中抗小鹅瘟特异抗体效价；蛋黄与生理盐水按1:3(V/V)稀释后，加与蛋黄等体积三氯甲烷进行萃提，用琼扩方法检测萃提上清液中抗小鹅瘟特异抗体效价，若上清液琼扩抗体效价达到1:64以上即可集蛋，用于制备小鹅瘟蛋黄抗体；（3）将蛋壳消毒，打蛋并充分除去蛋清、胚盘和系带，收集蛋黄；于蛋黄中加入3倍体积的生理盐水，充分搅拌均匀，然后在蛋黄液中加入与蛋黄等体积的三氯甲烷，充分振荡混合均匀，室温作用60min，以3500~ 4000rpm离心30min，收集上层清液备用；（4）在分离的上清液中加入终浓度为0.05%的甲醛溶液，充分搅拌混匀，37℃保温密封8~12h；用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即得琼扩抗体效价达到1:32及以上异源抗小鹅瘟蛋黄抗体。