猪2型圆环病毒自家组织灭活苗的研制及其免疫效果观察

梁俊昌 许瑞利 朱瑞良



猪2型圆环病毒自家组织灭活苗的研制及其免疫效果观察

梁俊昌①②许瑞利①②朱瑞良①

（①山东农业大学动物科技学院 泰安 271018 ②山东省枣庄市市中区畜牧兽医局）

本试验通过检测细胞组织培养PCV2灭活疫苗与自家细胞免疫后PCV2抗体水产，结果表明，自家组织灭活苗是预防PCV2行之有效的办法。

PCV2 自家组织灭活菌 免疫

猪2型圆环病毒(Porcine circovirus type 2，PCV2)病是当今养猪业流行的传染病之一，在现代化规模养猪场中，PCV2往往与其他疫病混合感染[1]，发病率呈上升趋势。该病的广泛流行和蔓延已给世界各国养猪业的发展造成了严重威胁和经济损失[2]。本试验对自家组织苗在某些猪场应用的效果进行了测定。

1 材料和方法

1.1 材料

灭活疫苗-蓝圆二联苗(某高等院校研究所中试产品)；自家组织苗：选试验猪场PCV2发病猪典型间质性肺炎病料，严格按自家组织苗制作程序制作，经0.4%甲醛灭活，恒温汽浴振荡培养箱37℃灭活36h，冷藏备用；圆环病毒2型抗体检测试剂盒；美国伯乐公司680型全自动酶标仪。

1.2 方法与步骤

1.2.1 分组和预试 42日龄健康猪45头，随机分为A、B、C3组，每组15头，分3栏饲养，每组按1~15的顺序逐头打耳缺编号，观察7d，无异常，正式试验。

1.2.2 试验前采血和初免 试验猪49日龄，3个组同时逐头前腔静脉采血5ml，随即颈部肌肉注射相应疫苗或生理盐水：A组(试验I组)每头免疫试验用蓝圆二联苗3ml；B组(试验II组)每头免疫试验用自家组织苗3ml；C组(对照组)每头注射生理盐水3ml。所采血样常温析出血清，按分组对应编号标记，-20℃冷冻保存待检。

1.2.3 初免抗体检测采血和二免 试验猪70日龄采血，试验组逐头免疫相同种类和剂量的疫苗，对照组仍每头注射生理盐水3ml。所采血样析出血清，编号保存。

1.2.4 二免抗体检测采血 试验猪91日龄，全部试验猪逐头前腔静脉采血5ml，所采血样依上述1.2.2和1.2.3析出血清，编号保存。

1.2.5 抗体检测和统计分析 把所采血清，逐份ELISA检测PCV2抗体，血清抗体OD值依分组编号逐头登记。按统计学方法比较各组方差及OD均值差异显著性。

1.2.6 试验猪群观察 试验开始后，逐日观察各试验组和对照组群体的生长、采食、发病情况及外观表现，以判断不同疫苗对PCV2的免疫效果。

2 结果与分析

2.1 PCV2抗体的检测结果和统计分析

试验各组不同阶段PCV2抗体ELISA检测结果表1。为从统计学上判断各组免疫前后抗体水平变化是否存在差异，对各组不同阶段的抗体水平逐对作成对双样本均值分析t检验，检验结果如表2。

表1 各试验组与对照组免疫的不同阶段PCV-2抗体检测结果

表1、表2数据显示：试验I组经蓝圆二联灭活苗1次免疫21d后，血清抗体阳性率从40.00%上升至79.31%，OD均值上升，但与一免前差异不显著。2次免疫21d后，阳性率从79.31%上升至100%，OD均值进一步上升，且与二免前差异极显著。试验II组经自家组织苗1次免疫21d后，阳性率从56.66%上升至100%，OD均值上升，与1免前差异极显著。2次免疫21d后，阳性率仍是100%，OD均值继续上升，且与2免前差异极显著。

表2 PCV2血清抗体检测结果的统计学检验

2个试验组分别经2次蓝圆二联苗和自家组织苗免疫后，血清PCV2抗体水平都能有效上升。虽然从统计学角度，试验I组一免21d后与一免前血清抗体水平对比，差异不显著，但其抗体阳性率及OD均值都有明显提高或上升(OD均值由0.153上升至0.3062)，且P(|t|>tα/2)＝0.0729，已经很接近H0的拒绝域(0.025)，尚不能据此否认该组一免21d后血清抗体水平显著上升。要确知抗体是否显著上升，仍需进一步试验数据。

对照组经1次注射生理盐水21d后，血清抗体阳性率从70%下降至56.67%，OD均值下降，但与1次注射生理盐水前差异不显著。2次注射生理盐水21d后，抗体阳性率进一步下降到53.33%，但OD均值却有所上升，且与2次注射生理盐水前差异极显著。不能把这一抗体水平显著上升归因于注射生理盐水。因OD均值上升的同时，抗体阳性率却进一步下降，OD均值的上升，不是总体普遍上升的结果，而是个别样本超常上升的影响。这种结果，可能与个别试验样本PCV2自然感染有关。

2.2 免疫效果观察

试验II组(自家组织苗免疫组)猪群从初次免疫开始，到20周龄，生长一直正常，与该场正常猪无异。试验I组(蓝圆二联苗组)和对照组(生理盐水组)从12周龄开始，逐渐表现出与该场未使用自家组织苗免疫以前猪群散发性PCV2流行期间完全相同的症状。直到15周龄补注射自家组织苗，17周龄加强免疫1次；并在每次注射苗前3d开始，连续7d饲料中添加抗生素协助预防和治疗，猪群才开始逐步恢复正常。

3 讨论

试验结果表明，在市场未有免疫效果确切的PCV2疫苗销售以前，采集自场病猪典型间质性肺炎病料制作自家组织苗，仍是预防PCV2行之有效的办法。猪群经细胞培养PCV2制作的灭活苗免疫后，PCV2抗体显著上升，但不能有效预防PCV2发病。说明PCV2的结构蛋白抗体，不能有效预防PCV2发病。自家组织苗中含有PCV2与其他病原或有机微粒融合体这一可能性外，还可能有以下2种原因：（1）PCV2寄生靶细胞问题。PCV2与HIV(爱滋病毒)具有很大的相似性，都是在免疫细胞内寄生和复制。HIV疫苗之所以20多年至今仍未研制成功，除了因为HIV存在频繁变异外，还因为它寄生在人体免疫细胞，其中和抗体无法有效突破免疫细胞固有的免疫屏障，中和在细胞内寄生的HIV。传统疫苗通过激发免疫细胞的免疫方式，对HIV免疫没有任何效果[3]。（2）病毒。细胞系统分泌蛋白对病毒的免疫作用：已有的研究证实，昆虫的杆状病毒-昆虫细胞系统，可高水平表达外源蛋白—多角体蛋白，这些蛋白覆盖并保护着核体内的病毒粒子。通过提纯这种蛋白，可对动物产生一定的免疫源性。使用间质性肺炎病料制作自家组织苗之所以能较好地预防PCV2发病，也可能因为PCV2感染肺泡细胞后，刺激肺泡细胞产生某种分泌蛋白，这种分泌蛋白对PCV2具有某种保护作用，或者促进其在机体内复制。机体经这种分泌蛋白免疫后，能有效中和这种分泌蛋白[4]，从而抑制PCV2在机体内复制，或使PCV2在机体内失去保护屏障，无法在细胞内生存，使PCV2不发病。

[1] 孙艳明, 赵德明. 猪圆环病毒分子生物学研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2006, 33(7): 62-64.

[2] 陈艳红,郭鑫,赵荣茂,等.我国规模化猪场主要繁殖障碍性病毒病的血清学调查[J]. 中国兽医杂志,2007,43(6):33-35.

[3] 胡兰银, 张骞, 肖建锋等. 引起猪发病死亡主要疫病的病原学调查[J]. 畜禽业, 2007,32(12):15-17.

[4] 邱艳红, 吴峻华, 叶玮等. 福州市猪圆环病毒(PCV-2)血清学调查[J].中国兽医杂志, 2005, 41(8): 26-27.

（2011–03–23）

S852.5+2

A

1007-1733(2011)04-0013-02