婴幼儿食品微生物及微生物毒素调查分析

姜英辉 雷质文 马维兴 张健 韩丽娟 许艳丽

(1.山东出入境检验检疫局 山东青岛 266002;2.荣成出入境检验检疫局)

婴幼儿食品微生物及微生物毒素调查分析

姜英辉1雷质文1马维兴1张健1韩丽娟2许艳丽1

(1.山东出入境检验检疫局 山东青岛 266002;2.荣成出入境检验检疫局)

对婴幼儿食品(配方乳粉、补充谷物、饼干和罐头)分别进行微生物污染以及微生物毒素调查。调查结果表明:357份婴幼儿食品均未检出沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌;11份婴幼儿配方乳粉、1份补充谷物和1份饼干食品中检出坂崎肠杆菌,检出率分别为4.2%,2.4%和2.5%;检出1份补充谷物菌落总数超过国家标准最高安全限量值。13份婴幼儿配方乳粉和3份补充谷物检出肠杆菌科细菌,检出率分别为32.5%和7.1%;14份(婴幼儿)配方乳粉、2份婴幼儿罐头检出蜡样芽孢杆菌,检出率分别为35%和20%;1份婴幼儿配方乳粉检出黄曲霉毒素M1超标。婴幼儿食品存在微生物及其微生物毒素污染的风险,应加强对婴幼儿食品的致病微生物及其毒素的监测和监管。

婴幼儿食品;微生物污染;微生物毒素;调查;分析

1 前言

初生到3岁年龄阶段的婴幼儿,由于身体的特殊条件决定了配方乳粉、米粉、饼干等食品是其主要辅助食物。婴幼儿食品不同于一般食品,有其特殊的营养和卫生要求,必须符合相应的法规标准的要求。近年来,由于食用了劣质食品而导致危害婴幼儿健康的事件时有发生[1,2],这是因为婴幼儿食品在生产、加工、贮存、流通和消费的诸多过程中,都有可能受到有毒、有害、化学物质的污染,进而发生食品安全问题,尤其是婴幼儿食品营养丰富,容易受到微生物的污染,因此,在众多食品安全相关项目中,由微生物引起的污染备受重视。为全面了解我国婴幼儿食品的卫生情况,保证婴幼儿食品安全,笔者对我国婴幼儿食品微生物以及微生物毒素的污染情况进行了调查并对其进行风险分析,可为预防和控制婴幼儿食源性疾病提供参考依据。

根据婴幼儿食品的特点,调查分析将婴幼儿食品分为婴幼儿配方乳粉、补充谷物、饼干和罐头共计4大类,分别对其进行微生物和微生物毒素的调查及污染水平分析。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 样品来源

国内超市和市场购买的婴幼儿食品样品,以及部分青岛口岸进口送检的样品,共计357份,见表1。

表1 婴幼儿食品汇总表

2.1.2 培养基和试剂

平板计数琼脂、10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤、甘露醇卵黄多粘菌素琼脂、胰胨大豆肉汤、缓冲蛋白陈水、氯化镁孔雀绿增菌液、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、亚硫酸铋琼脂、HE琼脂、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素、李氏增菌肉汤、PALCAM琼脂等:购自北京陆桥技术有限责任公司;沙门氏菌显色培养基、李斯特氏菌显色培养基、阪崎肠杆菌显色培养基等:购自科玛嘉公司;GNI鉴定卡:购自法国生物梅里埃公司。

2.1.3 仪器

VITEK II(全自动微生物鉴定和药敏分析仪):由法国生物梅里埃公司生产;HP1200高效液相色谱仪:由美国惠普公司生产;免疫亲和净化处理设备:由美国VICAM公司生产。

2.2 方法

菌落总数按GB 4789.2-2010规定的方法执行;肠杆菌科按照SN/T 0738-1997规定的方法执行;金黄色葡萄球菌按GB 4789.10-2010规定的方法执行;蜡样芽孢杆菌按GB/T 4789.14-2003规定的方法执行;阪崎肠杆菌按GB 4789.40-2010规定的方法执行;沙门氏菌按GB 4789.4-2010规定的方法执行;单核细胞增生李斯特氏菌按GB 4789.30-2010规定的方法执行;黄曲霉毒素B1按GB/T 5009.23-2006规定的方法进行;黄曲霉毒素M1按GB/T 18980-2003规定的方法进行。

3 结果及分析

3.1 婴幼儿配方乳粉

3.1.1 菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌的检测

对265份婴幼儿配方乳粉样品中的40份样品进行了菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌的定量检测,结果见表2。

表2 婴幼儿配方乳粉菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌检测结果

(续表)

结果显示:40份婴幼儿配方乳粉样品均未检出金黄色葡萄球菌;34份样品菌落总数含量＜1000 cfu/g(其中9份样品菌落总数＜10cfu/g),未超过GB 10765-2010《婴儿配方食品》[3]的可接受水平限量值(m值),其余6份样品菌落总数＞1000cfu/g(其中最高为6300cfu/g),也均未超过GB 10765-2010最高安全限量值(M值);13份样品检出肠杆菌科细菌(代替大肠菌群计数),检出率32.5%;14份样品检出蜡样芽孢杆菌,检出率35%。

3.1.2 致病菌检测

(1)对265份婴幼儿配方乳粉样品进行致病菌的检测,共检出阪崎肠杆菌11份,检出率4.2%;沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌均未检出。

(2)265份婴幼儿配方乳粉样品中,在国内市场上购买了50个品牌244份样品,检出阪崎肠杆菌10份,检出率4.1%;口岸送检原料乳粉及原装乳粉21份,检出阪崎肠杆菌1份,检出率4.8%。国内市场上购买样品和口岸送检样品,阪崎肠杆菌的检出率基本一致。

(3)265份婴幼儿配方乳粉样品中,牛乳粉260份,检出阪崎肠杆菌11份;羊乳粉5份,均未检出阪崎肠杆菌。

3.1.3 黄曲霉毒素检测

265份婴幼儿配方乳粉样品中,口岸送检的21份样品未检出黄曲霉毒素;国内市场上购买的样品中有3份检出黄曲霉毒素。其中NF027样品为羊乳粉,检出黄曲霉毒素B1含量为0.32μg/kg;NF022样品和NF029样品为牛乳粉,分别检出黄曲霉毒素M1含量为0.57μg/kg和0.22μg/kg;其余样品中均未检出黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素B1。

2005年欧盟新的限量标准规定:在包括谷类食物在内的婴幼儿食品以及在具有特别医疗目的的婴儿食品中,黄曲霉毒素B1的最大限量均为0.1 μg/kg。2010年我国国家卫生标准[3-5]规定婴儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品中黄曲霉毒素M1或B1最大限量为0.5μg/kg。本次采集调查的婴幼儿配方乳粉样品中检出3份样品含有黄曲霉毒素,其中1份样品黄曲霉毒素M1含量为0.57μg/kg,超过我国国家卫生标准的规定。其余2份样品分别有检出黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素M1,虽然符合国家卫生标准的规定,但超过欧盟2005年的限量标准。

3.2 补充谷物食品

42份补充谷物食品样品中包括38份国内生产样品(编号MF001-MF038),4份口岸送检样品(编号MF039MF042),主要为婴幼儿即食的各类米粉、麦粉以及强化添加各类蔬菜、肉类、鱼类和强化因子的米粉和麦粉。

3.2.1 菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌的检测

对42份补充谷物食品样品进行了菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌的定量检测,结果见表3。

表3 婴幼儿补充谷物食品菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科检测结果

结果显示,所有补充谷物食品样品均未检出蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌;3份样品检出肠杆菌科细菌,检出率7.1%;42份样品中编号为MF042的进口婴儿米粉被检出菌落总数数量最高,为170000 cfu/g,远远超过婴幼儿辅助谷类食品国家标准10000cfu/g的最高安全限量要求。

3.2.2 致病菌检测

对42份补充谷物食品样品进行致病菌的检测,检出阪崎肠杆菌1份,检出率2.4%,检出样品为国内生产的婴儿米粉(MF005);沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌均未检出。

3.2.3 黄曲霉毒素检测

42份补充谷物食品样品中均未检出黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素M1。

3.3 饼干食品

40份饼干样品中包括30份国内生产样品和10份进口及口岸抽检样品,主要有婴幼儿食用的磨牙棒、手指饼、婴儿饼干等。

3.3.1 菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌的检测

40份饼干样品中都未检出蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌;有22份样品的菌落总数＜10 cfu/g,其余样品均不超过500 cfu/g。

3.3.2 致病菌检测

对40份饼干食品进行致病微生物检测,检出阪崎肠杆菌1份,检出率为2.5%,样品为国内生产的饼干样品(MYB009);所有饼干食品均未检出沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌。

3.3.3 黄曲霉毒素检测

40份饼干样品中均未检出黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素M1。

3.4 罐头食品

婴幼儿罐头食品样品共计10份,全部为国内生产的产品,主要包括各种蔬菜泥、水果泥以及蔬菜肉制品混合食品。

3.4.1 菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科细菌的检测

罐头食品的菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科结果见表4。

表4 婴幼儿罐头食品的菌落总数、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠杆菌科检测结果

表4结果显示,10份婴幼儿罐头食品样品的菌落总数含量最高为360cfu/g,均满足GB 10770-2010《婴幼儿罐装辅助食品》[6]规定的限量要求;金黄色葡萄球菌和肠杆菌科计数都小于3.0 MPN/g;从样品FZ004和FZ010中检出一定数量的蜡样芽孢杆菌,检出率为20%。

3.4.2 致病菌检测

由于婴幼儿罐头食品的需求量较小,婴幼儿罐头食品与乳粉、米粉以及饼干相比,其市场销售的品牌和品种较少,因此本次调查所取的婴幼儿罐头食品的样品数较少。从所取的10份样品中均未检出阪崎肠杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌。

3.4.3 黄曲霉毒素检测

10份婴幼儿罐头食品样品中均未检出黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素M1。

4 讨论

2004年FAO/WHO制定婴幼儿配方乳粉标准时,在日内瓦召开了婴幼儿配方乳粉的专家研讨会。研讨会专家根据婴幼儿配方乳粉中有关微生物或微生物毒素在婴幼儿配方乳粉中存在和引起婴幼儿疾病的证据,将微生物危害分为3类[7]。

(1)阪崎肠杆菌和沙门氏菌属于A类,它们与婴儿疾病之间有确定的因果关系,都能引起婴幼儿疾病(如全身感染、坏死性小肠结肠炎和严重的腹泻),并且它们都能在乳粉中检出。

1)阪崎肠杆菌主要对新出生婴儿,尤其是对发育不良、免疫功能低下的婴幼儿最具感染性[8]。受到污染的婴幼儿配方乳粉,是婴幼儿感染传播的媒介和来源[8]。陆峥等人[9]调查了179份北京市售国产婴幼儿配方奶粉及婴幼儿食品,共检出11株阪崎肠杆菌,其中82份牛配方乳粉的阳性检出率为1.22%,6份羊配方乳粉的阳性检出率为66.67%,婴幼儿配方米粉的检出率为8.45%;2004年,我国阜阳劣质奶粉样品中污染阳性率为12.6%[10]。本次调查结果表明,我国婴幼儿配方乳粉、补充谷物食品等存在阪崎肠杆菌的污染,婴幼儿配方乳粉的阪崎肠杆菌检出率为4.2%,补充谷物食品的检出率为2.4%,饼干食品中也首次报道检出阪崎肠杆菌。

2)在本次调查中未检出沙门氏菌阳性样品,配方乳粉和其他婴幼儿食品中检出沙门氏菌的报道也很少,来自FAO/WHO资料也显示极少在终产品中检测到沙门氏菌[7]。由于某些沙门氏菌血清型有可能以很低剂量致病,这对婴儿来说可能要求给予特别关注,尤其是对那些高度易感的婴幼儿,如早产儿、低体重儿和免疫受损的婴幼儿。

(2)肠杆菌科的细菌被FAO/WHO定为B类危害的微生物[7],已确认可引起婴幼儿致病(如全身感染、坏死性小肠结肠炎和严重的腹泻),并且可在婴幼儿食品中检出,但是从流行病学或微生物学上,并不能确认受到肠杆菌科污染的婴幼儿食品是引起婴幼儿疾病的传播媒介和来源。本次调查对分离到的肠杆科菌细菌进行鉴定,确认检出阴沟肠杆菌、泛菌属、非脱羧勒克氏菌、解鸟氨酸拉乌尔菌和产酸克雷伯氏菌等。

(3)蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等被FAO/WHO列为C类微生物[7],这些菌虽然在婴幼儿食品中检出,但没有确认引起婴幼儿相应的病症。本次调查从婴幼儿食品中检出蜡样芽孢杆菌16份,其中配方乳粉中检出14份,检出率为35%;罐头食品检出2份,检出率为20%。蜡样芽孢杆菌可产生致吐毒素和致腹泻毒素,致吐毒素耐热,是引起食物中毒的主要成分,从原料乳中分离出的83株菌中85%是致腹泻毒素阳性菌株[11]。目前,尚未见蜡样芽孢杆菌污染婴幼儿食品引起致病的研究和报道,也未见相关的国家卫生标准对蜡样芽孢杆菌的限量要求,但近年来对我国部分地区原料奶中微生物污染调查的结果表明[12],蜡样芽孢杆菌在原料乳中的污染不容乐观,因此有必要对加强对我国婴幼儿配方乳粉中蜡样芽孢杆菌的监测和监管。

(4)对3份检出黄曲霉毒素的样品进行霉菌检测,其中从NF027中分离到青霉菌,NF022和NF029号样品没有检出任何霉菌生长,因此可以推断出配方乳粉中的霉菌、黄曲霉和黄曲霉毒素之间不存在必然的联系。婴幼儿配方乳粉中的黄曲霉毒素可能主要来自饲料中黄曲霉毒素的污染,通过奶牛乳汁的分泌而最终污染到产品。

[1] 刘秀梅,装晓燕,郭云昌.中国安徽阜阳劣质婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的污染[J].中国食品卫生杂志,2005,11(1):10-12.

[2] 吴雅儿.因喂服染有蜡样芽胞杆菌奶粉引起婴儿腹泻1例[J].海峡预防医学杂志,2003,9(5):4.

[3] GB 10765-2010婴儿配方食品[S].

[4] GB 10767-2010较大婴儿和幼儿配方食品[S].

[5] GB 10769-2010婴幼儿谷类辅助食品[S].

[6] GB 10770-2010婴幼儿罐装辅助食品[S].

[7] Joint FAO/WHO workshop on Enterobacter sakazakii and othermicroorganisms in powdered infant formula,Geneva,2004-02-02-05.

[8] Van Acker J,De Smet F,Muyldermans G,et al.Outbreak of necrotizing enterocolitis associated with Enterobacter sakazakiiin powdered milk formula[J].Journal of Clinical Microbiology,2001,39(1):293-297.

[9] 陆峥,王丽丽,王迪,等.北京市售国产婴幼儿配方奶粉及婴幼儿食品带染阪崎肠杆菌调查[J].中国卫生检验杂志,2008,18(1):140-141.

[10] 刘秀梅,装晓燕,郭云昌.中国安徽阜阳劣质婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的污染[J].中国食品卫生杂志,2005,11(1):10-12.

[11] GR IFFTHS M W.Toxin production by psychotropic Bacillus spp.present in milk[J].Food Protect,1990,53(9):790-792.

[12] 吴海清,陈庆森,庞广昌,等.津晋豫鲁部分地区原料奶中微生物污染情况调查[J].食品科学,2008,29(5):373-377.

Survey and Analysis of Contamination Level of Microorganism and Microbial Toxin in Infant Foods

Jiang Yinghui1,Lei Zhiwen1,MaWeixing1,Zhang Jian1,Han Lijuan2,Xu Yanli1

(1.Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Qingdao,Shandong,266002;2.Rongcheng Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau)

To survey and assay the contamination level of microorganism and microbial toxin in infant food,which includ formula milk powder,added cereal,biscuits and canned food.The results showed that Salmonella spp and Listeria monocytogenes were not detected in 357 kinds of infant food samples.Eleven strains of E.sakazakii were detected in infant formula milk powder,one in added cereals and one in biscuits,the detection rate was 4.2%,2.4%and 2.5%respectively.The aerobic plate count in one added cereal was exceeded the limit of national food safety standard.Thirteen of 40(32.5%)infant formula milk powders and 3 of 42(7.1%)added cereals were contaminated with bacteria of Enterobacteriaceae.Fourteen of 40(35%)infant formula milks and 2 of 10(20%)canned food were detected contaminated with Bacillus cereus.Aflatoxin M1 was excessive in one infant formula milk powder.Infant foods have the risks in microbial and microbial toxin contamination,the monitoring and supervision of pathogenic microorganisms and toxins in infant food should be strengthened.

Infant Food;Contamination;Toxin;Survey;Assay

R187

国家质量监督检验检疫总局课题(2006IK138)