紫花地丁花提取物的分离鉴定

王亚薇，沈喜海，张志伟，张丹丹，李 洋

(河北科技师范学院理化学院，河北秦皇岛，066600)

紫花地丁(Viola yedoensis Makino)为堇菜科(Violaceae)植物，又名野堇菜、辽堇菜、光瓣堇菜，分布于我国东北、华北、华东、中南等地［1］。为多年生莲座状草本，高7～14 cm，花有卡柄，萼片卵状披针形，花瓣紫堇色，具细管状，直或稍上弯;花期4～5月，紫色小花，全草可入药，其性寒，味苦、辛，有清热解毒、凉血消肿之功效，临床上常用于治疗痢疾、乳房炎、黄疸、目赤肿痛，以及外敷治跌打损伤、毒蛇咬伤等［2，3］。据报道［4］，紫花地丁含有有机酸、黄酮及其甙类、酚类成分、糖类、氨基酸、多糖及蛋白质、皂甙等10 多种有效成分［5］，并可富集 Cu，Fe，Mn，Zn，Mg 等微量元素［6］。白殿罡［7］、陈玉花［8］等采用气相色谱及质谱联用技术对紫花地丁全草成分进行了研究，并确定了其主要成分。紫花地丁作为一种中药材，研究植株各部分的成分更有助于对其药用价值的利用。而有关紫花地丁花成分的研究很少。笔者用乙醚对其花中成分进行提取，经过柱色谱和薄层色谱分离后，采用紫外分析仪对分离物进行了初步的测定。对紫花地丁花成分的研究具有十分重要的意义。

1 材料和方法

1．1 实验材料

紫花地丁花2010年4月采于河北科技师范学院院内。将其置于干燥箱中，40℃烘干，用研钵充分研细，保存备用。

1．2 仪器与试剂

1．2．1 仪器 DGF－1A型立式电热鼓风干燥箱，电子天平，KQ－100DB型数控超声波清洗器，SHZ－D(III)循环水式真空泵，TGL－16B(高速)离心机，UV－2401PC紫外分析仪。

1．2．2 试剂 层析用硅胶(0．075～0．150 mm，0．053 ～0．075 mm)，薄层色谱用硅胶，乙醚，无水乙醇，甲醇，正丁醇，丙酮，二氯甲烷，三氯甲烷，石油醚，乙酸乙酯等为分析纯。

1．3 提取与分离

1．3．1 提取方法 称取5．0 g备用粉末放入250 mL的三角瓶中，加入100 mL乙醚，超声波提取0．5 h。过滤，收集滤液，残渣继续提取2次，合并3次提取的滤液，在34～35℃蒸发浓缩至4 mL左右。置于表面皿中，在空气中使乙醚自然挥发，得到青黑色膏状物质。

1．3．2 分离方法 在薄层板上点样，分别用乙醚、乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇作展开剂展开。其中乙醚和乙酸乙酯中展开速度较快且效果较好，但两者展开点颜色不同。故选用乙醚和乙酸乙酯分别作展开剂，点样多次，分离展开，将颜色、位置相同的样点刮下合并，分别用展开剂溶解，高速离心取上清液放于小瓶中待测。

称取100．0 g层析用硅胶(0．075～0．150 mm)在110℃下活化4 h，加入适量的石油醚，浸泡一段时间，湿法装柱。柱高40 cm左右。浓缩所得膏状物在少量石油醚浸泡的硅胶中拌匀，注入层析柱中洗脱分离。操作如图1所示。另称取100．0 g层析用硅胶(0．053～0．075 mm)在110℃下活化2 h，加入适量的石油醚，浸泡一段时间，湿法装柱，然后梯度洗脱(溶剂极性B＞A，B溶剂梯度洗脱，即A，B两溶剂混合体积比为 A∶B=10∶0→9∶1→8∶2→7∶3→6∶4→5∶5→4∶6→3∶7→2∶8→1∶9→0∶10)，操作如图2 所示。

图1 紫花地丁花粉末提取物提取分离示意图一

图2 紫花地丁花粉末提取物提取分离示意图二

1．4 分离液鉴定

1．4．1 薄层色谱分离液紫外光谱测定 将薄层色谱法所得上清液，调整浓度，测定紫外图谱。分别用展开剂作参比溶液，消除溶剂的影响。

1．4．2 第1次柱色谱分离液紫外光谱测定 第1次柱色谱分离液，放于干燥的小瓶中，在空气中使乙醚自然挥发，然后用乙醚溶解测定紫外图谱。乙醚作参比液，消除溶剂干扰。

1．4．3 第2次柱色谱分离液紫外光谱测定 第2次柱色谱分离液，直接测定紫外图谱，用对应的梯度洗脱液作参比溶液，消除溶剂干扰。

2 测定结果与分析

根据图谱中吸收峰的位置和峰形，分析确定了部分应用价值较广泛的分离物的名称(表1)。

表1 部分分离产物

3 结 论

采用超声波提取方法及柱色谱和薄层色谱分离技术对紫花地丁花的成分进行了初步测定，确定了其中的部分分离产物，主要为黄酮类，香豆精类，饱和脂肪酸类等物质。已确定物质为7－羟基－5－甲氧基黄酮，山萘黄素－3－二葡萄糖苷，山萘黄素－7－鼠李糖－3－二葡萄糖苷，7－羟基－5－甲氧基黄酮，槲皮素－3－氧－二葡萄糖苷，4′－羟基－7，3′－二甲氧基二氢黄酮，7－羟基－4′－甲氧基－二氢黄酮，7，8－二甲氧基香豆精，8－异戊烯－7－氧－异戊烯基香豆精。为紫花地丁花的开发利用提供理论依据。

［1］杨鹏鹏，闫福林，梁一兵，等．紫花地丁化学成分的研究［J］．新乡医学院学报，2008，25(2):185－187．

［2］李定刚，张武岗，宋毓民，等．紫花地丁抗菌活性成分研究［J］．西北农林科技大学学报:自然科学版，2006，34(4):87－90．

［3］李海涛，杨琳，章广玲，等．紫花地丁煎剂调节小鼠巨噬细胞功能的体内实验研究［J］．华北煤炭医学院学报，2004，6(5):553－554．

［4］刘嘉，徐润生，程存归．两产地紫花地丁挥发油的化学成分研究［J］．中成药，2009，31(10):1 575－1 577．

［5］李金艳，伟忠民．中药紫花地丁的研究进展［J］．中国现代中药，2008，10(1):27－29．

［6］梁雪芹，李志宏，李秀珍，等．紫花地丁中微量元素浅析［J］．黑龙江医药，1995，8(3):166－167．

［7］白殿罡．紫花地丁挥发性化学成分的分析［J］．长春大学学报，2008，18(5):69－71．

［8］陈玉花，肖德华．紫花地丁挥发油化学成分分析［J］．内蒙古民族大学学报:自然科学版，2008，23(1):22－23．