姜的温中功效物质研究

崔瑛，纪彬，冯志毅，王君明

姜，是姜科zingiberaceae姜属植物Zingiber officinale Rosc的根茎。作为中药使用，分别为生姜、干姜和炮姜。生姜始载于《名医别录》，性味辛，温。归肺、胃、脾经。功效解表散寒，温中止呕，化痰止咳。主治风寒感冒，呕吐，肺寒咳嗽[1]。干姜始载于《神农本草经》，性味辛，热。归脾、胃、肾、心、肺经。功效温中散寒，回阳通脉，温肺化饮。主治中焦寒证脘腹冷痛、呕吐、泄泻，亡阳厥逆，寒饮咳喘[1]。炮姜始载于《珍珠囊》，性味苦、涩，温。归脾、肝经。功效温经止血，温中止痛。主治虚寒性吐血、便血、崩漏、脘腹疼痛，泄泻[1]。姜的三个炮制品种虽然有生姜微温、辛散力强；干姜性热，温阳、散寒力强；炮姜味苦而涩，善止耗散等不同。但也均具有温性、归脾胃经、温中等共同特征。

姜的主要成分为挥发油、烷基酚类、长链不饱和脂肪酸酯苷类等[2]，但生姜、干姜、炮姜三者在成分构成上有一定差异[3,4]。药理研究表明，姜具有解热、镇痛、抗炎、镇静、催眠、抗惊厥、兴奋心脏、增强心肌收缩力、抗缺氧、抗溃疡、止吐、促进胃酸分泌、保肝利胆、抑制血小板聚集、抗氧化、抗病原微生物等作用[5]。可见，目前对姜化学成分和药理作用已有广泛、深入的研究，但对于姜温中功效的物质基础，在认识上还存在空白。针对这一现实，本实验采用“病证―效应―血清药物化学分析”结合的研究方法，在中医脾胃虚寒病证模型上，观察姜的温中作用，同时对含药血清进行化学分析，以此获得对姜的温中功效物质的认识。

1 材料

1.1 药材与试剂

生姜，购于郑州，产地山东潍坊。经河南中医学院陈随清教授鉴定为姜科zingiberaceae姜属植物Zingiber off i cinale Rosc的根茎。干姜、炮姜均由实验室按《中国药典》2010版自制。

食醋：江苏恒顺醋业股份有限公司，批号：20100126，总酸度4g100mL-1。胃泌素试剂盒：解放军总医院科技开发中心放免所，批号：20101120。胃动素试剂盒：解放军总医院科技开发中心放免所，批号：20101120。6-姜酚标准品：河南中医药研究院惠赠。甲醇、乙腈（色谱纯），迪马科技有限公司。

1.2 仪器

Waters2695高效液相色谱仪，美国Waters公司；Waters2996二极管阵列检测器，美国Waters公司；Empower色谱工作站，美国Waters公司；3-18K高速冷冻离心机，Sigma公司；AE240电子分析天平，瑞士梅特勒仪器有限公司；榨汁机，佛山市顺德区嘉豪实业有限公司。

1.3 动物

SPF级wistar大鼠，体重280±10g，雄性，购自郑州大学医学院实验动物中心。合格证号：豫2010-0001。

2 方法

2.1 药物配制

将鲜姜切碎后以家用榨汁机榨取鲜姜汁，每500g生姜可榨取200mL左右姜汁。相当于原药材2.5 gmL-1，备用。

取生姜、干姜、炮姜适量，分别以10倍量和8倍量水回流提取30min，合并水煎液浓缩至适当的浓度。

2.2 分组与给药

将160只大鼠随机分为10组，每组16只。即正常组，模型组，生姜汁高剂量组，生姜汁低剂量组、生姜水煎液高剂量组、生姜水煎液低剂量组、干姜水煎液高剂量组、干姜水煎液低剂量组、炮姜水煎液高剂量组和炮姜水煎液低剂量组。不限食水适应性饲养3天，室温保持在20℃左右，喂饲为标准全价饲料。然后禁食过夜，称重，标记。每天上午造模，模型组、给药组灌胃4℃食醋10mLkg-1。连续造模10天[6]；正常组灌胃生理盐水10mLkg-1。第6天下午给药组大鼠按剂量开始灌胃给药，给药体积均为10mLkg-1。连续给药5天。实验期间，观察动物外观行为状态、体重、进食量等。

2.3 指标检测

末次给药60min后，各组大鼠随机取8只，摘眼球取血，每只大鼠取血4mL左右，置离心管中，3500r.min-1离心10min，分离血清，一部分制备供HPLC分析的样品，另一部分按试剂盒方法测量胃泌素和胃动素。剩余大鼠禁食不禁水24小时，灌胃炭末30min后处死，称胃全重与净重计算胃中物质残留率；测小肠全长与炭末前端所到达的距离计算小肠推进率[7]。

2.4 含药血清HPLC分析

色谱条件：Dikma Platisil ODS C18色谱柱(5µm,250×4.6mm )，检测波长：240nm；流速：0.8mL.min-1；流动相：A为水，B为乙腈；洗脱梯度为：10%B (0min)→20%B (10min) → 50%B (20min)→70%B (40min) →85%B (55min) →100%B (60min)。

血清分析：同组每只动物取相同体积的血清混合均匀，精密量取2mL，精密加入甲醇8mL，蜗旋3min，4000r.min-1，离心10min，取上清液7mL，回收甲醇，定容至1mL。转移置2mL离心管内，15000r.min-1，离心10min，取上清液按上述色谱条件进行血清样品测定，记录色谱图。

2.5 统计分析

实验中所有数据使用SPSS17.0统计软件进行统计分析，计量资料数据以平均数±标准差(X±S)表示，多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，以P<0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对脾胃虚寒大鼠体重和进食量的影响

与正常对照组比较，造模动物体重、进食量明显下降。给药组在第5天后体重增长有所改善，进食量也有所增加。而模型组的体重和进食量一直呈下降状态。见图1、图2。

3.2 对脾胃虚寒大鼠肠蠕动、胃泌素、胃动素的影响

与正常对照组比较，模型组动物小肠推进率、胃泌素和胃动素含量显著下降（P<0.05）；胃排空率明显增加（P<0.05）。表明脾胃虚寒模型造模成功。干姜高剂量组较模型组小肠推进率、胃泌素和胃动素含量显著增加（P<0.05）；胃排空率明显减少（P<0.05）。干姜低剂量组较模型组胃排空率减少和胃泌素含量显著增加（P<0.05），表明干姜具有显著的温中散寒的作用。炮姜高剂量组较模型组胃泌素含量显著增加（P<0.05），炮姜低剂量组较模型组胃动素含量显著增加（P<0.05），对推进率和排空率无显著改善，说明炮姜有一定的温中散寒作用。而生姜汁和生姜水煎液组较模型组无显著改善。见表1。

表1 对脾胃虚寒大鼠肠蠕动、胃泌素、胃动素的影响（x¯±S）（n=8）

3.3 含药血清HPLC研究

按“2.4”色谱条件，将实验各组动物血清上样，得到以下HPLC色谱峰（见图3～7）。通过与正常血清、模型血清、6-姜酚标准品以及药材HPLC色谱比较，在温中实验中干姜水煎液高剂量组和炮姜水煎液高剂量组的含药血清中发现了姜的移行成分。通过与标准品色谱图对比，温中实验的大鼠含药血清中姜的移行成分均为6-姜酚。见图6，图7。

4 讨论

4.1 姜，虽然有生姜、干姜、炮姜等不同炮制品，但三者均有温中之功。研究姜温中功效的物质基础，应该在脾胃虚寒模型上，结合药效进行。因此，试验选择比较公认的脾胃虚寒动物模型。试验中，该模型动物均出现体重减轻，食量减少，且畏寒，蜷缩，竖毛，精神萎靡。并出现明显的活动减少，表现为倦卧少动，反应迟钝，唇色苍白，捉拿时反抗无力，渐见体型瘦弱，可见便溏等明显的脾胃虚寒的症状和体征。模型组小肠推进率降低，胃残留率增多，胃泌素含量下降，与正常对照组比较有显著差异。上述表明，脾胃虚寒大鼠造模成功。

4.2 试验观察到，干姜高剂量组较模型组小肠推进率、胃动素和胃泌素含量明显增加，胃排空率明显降低，干姜低剂量组较模型组除小肠推进率无明显改善外，其余指标与干姜大剂量组结果相当，表明干姜具有显著的温中作用。炮姜高、低剂量组只是分别在胃动素和胃泌素含量上较模型组有明显改善，而生姜汁、生姜水煎液在上述四项指标上较模型组仅有改善的趋势。实验表明，在生姜汁、生姜、干姜、炮姜4个品种中，以干姜的温中作用最佳，这与传统干姜为温中要药的认识吻合。

4.3 通过对实验动物血清HPLC分析，在给予干姜、炮姜的模型动物血清中，观察干姜、炮姜的血中移形成分，经比较分析确认为6-姜酚。结合药效实验结果，我们认为，6-姜酚为干姜、炮姜温中功效物质的代表性化学成分。

[1] 高学敏.中药学[M].北京:中国中医药出版社,第二版,2007:55, 239,308.

[2] 王维皓,王智民.姜的化学、药理研究进展[J].中国中药杂志,2005(20):30.

[3] 朱国元,彭国平,文红梅.HPLC内标法测定干姜和炮姜中6-姜酚的含量[J].中药材,2001,24(9):652.

[4] 黄雪松,汪建民,王兆升.干姜、姜皮、炮姜中辣味成分的HPLC测定[J].中草药,1999,30(6):423.

[5] 王本祥.现代中药药理学[M].天津:天津科学技术出版社,第一版,1999:64,610.

[6] 邱赛红,李飞艳,尹健康,等.两种大鼠脾胃虚寒模型制备方法的比较[J].湖南中医学院学报,2004,24(6):30.

[7] 段长农,程宜福.小鼠半固体糊法加活性炭测定胃排空[J].皖南医学院学报,2002,21(3):594.