HPLC法测定氨酚那敏三味浸膏胶囊中对乙酰氨基酚含量

刘正磊，冯素香

氨酚那敏三味浸膏胶囊由对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、四季青叶等组成，用于缓解感冒或流行性感冒引起的发热、头痛、咽痛、鼻塞、咳嗽等。含对乙酰氨基酚的复方制剂是目前使用较多的解热镇痛药，其含量测定方法因配伍组方理化性质不同而不同。现行2010版《中国药典》二部中对乙酰氨基酚原料的含量测定采用的是分光光度法，而对乙酰氨基酚滴剂的含量测定采用的是高效液相色谱法[1～3]。故本文用高效液相色谱法对氨酚那敏三味浸膏胶囊中对乙酰氨基酚的含量进行测定，以期建立氨酚那敏三味浸膏胶囊中对乙酰氨基酚的含量测定方法。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪（配Waters2695 Separations Module，Waters2996 Photodiode Array Detector），Empower2色谱工作站）；XS105分析天平 (瑞士梅特勒)；XK96-A型快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公司）；KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；对乙酰氨基酚对照品（批号：10018-200408，中国药品生物制品检定所）；氨酚那敏三味浸膏胶囊（芜湖绿叶制药有限公司）；甲醇（色谱醇，Fisher公司）；乙腈（色谱醇，Fisher公司）；磷酸、氯仿等试剂均为分析纯；纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Venusil XBP C18 (250×4.6 mm,5 μm)；流动相:甲醇-0.05%磷酸（15:85）；检测波长：240 nm；柱温30 ℃。

2.2 对照品溶液的制备

取对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含对乙酰氨基酚0.4 mg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品胶囊10粒，倾出内容物，研细，称取0.5 g，移至100 mL量瓶中，加甲醇-水（20:80，v/v）50 mL，超声处理10 min，加上述溶液至刻度，滤过，取续滤液1 mL，加上述溶液稀释至10 ml，即得。

2.4 空白试验

按照处方比例和工艺制成缺对乙酰氨基酚的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液。将阴性对照品溶液，对照品溶液及供试品溶液分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，结果见图1。结果表明，处方中其他药材和辅料不干扰对乙酰氨基酚的含量测定。

2.5 线性关系考察

2.6 中间精密度试验

取同一批样品，由3人在不同的时间按上述条件进行测定3次，平均标示含量为96.4%，RSD%=1.81，结果表明：中间精密度良好，符合定量分析要求。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0，0.5，1，2，4，6，8，10，12，24 h按上述条件注入液相色谱仪，结果对乙酰氨基酚峰面积平均值为6891285.65，RSD%=1.04，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验

取同一批号样品6份，按照上述供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，分别进行测定，平均标示含量为98.1%，RSD=1.78%，结果表明：对乙酰氨基酚重复性试验良好。

2.9 耐用性试验

2.9.1 不同色谱柱 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在三支不同色谱柱Venusil XBP-C18色谱柱（4.6×250 mm,5 μm，Agela V9520525ck0063）、Sinochrom ODS-BP C18(250×4.6 mm,5 μm，大连依利特)，Waters C18（02533032313634）的条件下，其它条件按上条件进行测定，其标示含量分别为97.2%、99.1%、98.3%。结果表明在其它条件不变的情况下，不同色谱柱对样品含量测定结果和色谱峰的分离度均未有明显影响。

2.9.2 不同流速 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，流速分别设定为0.9，1.0，1.1 mLmin-1，其它条件按上述条件进行测定，其标示含量分别为97.2%、99.5%、98.1%。结果表明在其它条件不变的条件下，流速的微小变化对样品含量测定结果和色谱峰的分离度均未有明显影响。

2.9.3 不同波长 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，检测波长分别设定为238，240，242nm，其它条件按上述条件进行测定，其标示含量分别为97.8%，96.5%，97.1%，结果表明在其它条件不变的条件下，不同波长对样品含量测定结果和色谱峰的分离度均未有明显影响。

2.9.4 不同柱温 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在不同柱温28，30，32℃的条件下，其它条件按上述条件进行测定，其标示含量分别为96.1%， 97.6%，95.9%。结果表明在其它条件不变的条件下，柱温的微小变化对样品含量测定结果和色谱峰的分离度均未有明显影响。

2.1 0 加样回收率试验

取本品10粒，倾出内容物，研细，精密称取0.3 g，精密加入对乙酰氨基酚对照品适量，置100 mL量瓶中，按照供试品处理方法进行样品处理及测定，计算回收率，平均回收率为101.4%，RSD=1.61%。

2.1 1 样品含量测定

取胶囊样品，按上述条件进行测定，结果三批样品对乙酰氨基酚平均标示含量为95.5%，98.4%，94.5%。

3 讨论

本文研究表明，高效液相色谱法能将对乙酰氨基酚与辅料完全分离，方法稳定，从而真实地反映出对乙酰氨基酚溶液的含量，在以对乙酰氨基酚峰计，理论板数超过2000的色谱柱上, 能取得理想的结果[4～5]。由于分光光度法测定时，辅料对测定有干扰，所以高效液相法测定结果比分光光度法测定结果略低。本试验采用HPLC法测定氨酚那敏三味浸膏胶囊中对乙酰氨基酚，方法操作简便、结果准确、稳定性好、专属性强，可用于氨酚那敏三味浸膏胶囊中对乙酰氨基酚的含量测定和质量控制方法。

[1] 中华人民共和国药典委员会.《中华人民共和国药典》二部[S].北京:中国医药科技出版社,2010: 234.

[2] 王玉,张哲,陈西敬,等.高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚的血药浓度及其生物利用度[J].中国临床药学杂志,2002,11(2):97.

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