应用原位杂交技术检测宫颈上皮内瘤变的临床研究

欧 勇 李雪兰 韶 峰 丁 矢

（1 湖南省常德职业技术学院医学系病理学教研室，湖南 常德 415000；2 湖南省常德职业技术学院病理诊断中心，湖南 常德 415000）

人乳头状瘤病毒（HPV）感染引起宫颈上皮内瘤变和宫颈癌已成为公认的事实。在临床实践过程中，如何能够有效准确的发现并检测HPV感染是做好HPV感染的发现、预防、早期治疗的关键。本文对本院病理诊断中心确诊为CIN的171例患者作回顾性的研究，探讨应用原位杂交技术在检测HPV上的效果。

1 材料与方法

1.1 材料收集

收集本院病理诊断中心活检标本。依诊断标准诊断为宫颈CIN的标本171例。患者均为女性，年龄为20～54岁。其中CINⅠ标本82例，CINⅡ标本46例、CINⅢ标本43例。

1.2 方法

诊断所采用的HPV DNA检测探针（HPV6/11、HPV16/18型探针）和试剂盒均购自福建泰普生物科学有限公司，这两种探针经实验证实具有不被体内抗体识别且敏感性高的优点。检测步骤：将诊断为宫颈CIN患者在异常转换区或可疑病变区多点活检取材，取出的病理组织固定于多聚甲醛溶液中。固定的组织用石蜡包埋后切片。用二甲苯脱蜡后，逐次以不同浓度的乙醇梯度脱水，并至于空气中自然干燥，再用烤片机预热。再于暗室将检材加至HPV6/11（低危型）、16/18（高危型）探针湿盒中37℃过夜。加一、二抗、滴加HRP聚合物、DAB显色、苏木素复染核、封片。随机选择每张切片5个高倍视野，寻找肿瘤细胞核（阳性表达显棕色），记录切片中阳性细胞占视野内细胞总数的百分比及阳性细胞着色强度。

1.3 阳性表达诊断标准

①根据每张切片5个高倍视野下阳性细胞占视野内细胞总数百分比的平均值（A）进行评分（a）：A≤5%，a=0；A为6%～15%，a=1；A为16%～30%，a=2；A＞30%，a=3。②根据阳性细胞显色程度进行评分（b）：无色0分；黄褐色1分；金色2分；棕色3分。③所得结果（c）c=a×b，c值为0时判定为阴性，c≥1时判定为阳性表达。

1.4 统计学处理

所有数据处理均以SPSS11.0统计软件进行，以P＜0.05作为差异有显著性。其中，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验。

2 结 果

2.1 CINⅠ中HPV检测结果

CINⅠ中 HPV6/11阳性表达率（42.7%）高于HPV16/18阳性表达率（18.3%），差异具有统计学意义（P＜0.05）。具体见表1。

表1 CINⅠ中HPV检测结果

2.2 CINⅡ中HPV检测结果

CINⅡ中HPV16/18阳性表达率（39.1%）明显高于HPV6/11阳性表达率（26.1%），其差异具有统计学意义（P＜0.05）。具体见表2。

表2 CINⅡ中HPV检测结果

2.3 CINⅢ中HPV检测结果

CINⅢ中HPV16/18阳性表达率（58.1%）高于HPV6/11阳性表达率（28.0%），其结果具有统计学意义（P＜0.05）。具体见表3。

表3 CINⅢ中HPV检测结果

2.4 HPV感染及高峰年龄趋势

三个年龄组中，HPV6/l1阳性率对比结果均无显着差异（P＞0.05）。HPV16/18阳性率随年龄增长而增加。31～40岁组HPV16/18阳性率（35.8%）高于20～30岁（9.4%），其中P＜0.05。41～54岁组HPV16/18阳性率（54.9%）高于31～40岁组（35.8%），其中P＜0.01。具体见表4。

表4 各年龄段HPV表达及高峰年龄比较

3 讨 论

HPV病毒属于乳头多瘤空泡病毒科，是一种环状双链DNA病毒，长约8kb，它能特异感染人皮肤和黏膜。按照致病力强弱，可将HPV分为高危型和低危型两种。其中，高危型HPV16型和18型易导致高度子宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发生。从表1～表3数据可知，CIN三型中HPV6/11及HPV16/18的阳性率并不相同。在CINⅠ中，HPV6/11阳性表达率（42.7%）高于HPV16/18阳性表达率（18.3%）（P＜0.05），显示CINⅠ以HPV6/11感染多见；CINⅡ中HPV16/18阳性表达率（39.1%）明显高于HPV6/11阳性表达率（26.1%）（P＜0.05），CINⅢ中HPV16/18阳性表达率（58.1%）高于HPV6/11阳性表达率（28.0%）（P＜0.05），说明在CINⅡ及CINⅢ中以HPV16/18感染多见。其中高危型 HPV感染强烈预示有CIN的存在。结果显示HPV16/18感染与宫颈癌前病变（上皮内瘤变）有密切关系。本组CINⅠ～Ⅲ中同时出现HPV6/11和HPV16/18的比率在9.8%～21.7%，表明HPV高、低危病毒的混合性感染在CIN病变中还是较为常见的。

本组3个年龄组中，低危型（HPV6/11）的阳性率随年龄增高而下降。但组间比较结果并不具有统计学意义（P＞0.05）。而高危型（HPV16/18）阳性率随年龄增长而增加。31～40岁组HPV16/18阳性率（35.8%）高于20～30岁（9.4%）（P＜0.05）。41～54岁组HPV16/18阳性率（54.9%）高于31～40岁组（35.8%）（P＜0.01）。从以上资料比较显示可知，高危型HPV16/18感染率随年龄增加而增加。高龄妇女受HPV16/18感染概率较大。

本文采用原位杂交技术检测HPV病毒，保持了固有形态，准确定位待测物，具有简单，敏感性高，特异性强等优点，同时还可以降低假阴性涂片引起的风险。上皮内瘤变发展到癌症大约需要10～15年。因此，广泛应用原位杂交技术检测HPV感染类疾病，可以使更多宫颈病得到确诊，减少浸润性肿瘤的发生，真正做到早期诊断、早期治疗。

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