高效液相色谱法测定胆香鼻炎片中绿原酸含量

赵晓荣，郭洪丽，孙长仁，白 静，王玉金，王宏宇

(吉林省白山市食品药品检验所，吉林 白山 134300)

胆香鼻炎片是由猪胆汁膏、广藿香、白芷、金银花等9味中药组成的复方制剂[1]。金银花与其功能主治密切相关，主要活性成分为绿原酸。绿原酸含量测定方法成熟、简便准确，故采用《中国药典(一部)》金银花含量测定项下的方法及液相色谱条件[2]进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－2010A型高效液相色谱仪，Class－vp色谱工作站。绿原酸对照品(批号为110753－200212，供含量测定用，中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为国产分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:迪马 C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱温:25 ℃;流动相:乙腈 －0.4% 磷酸(60 ∶40);流速:0.8 mL/min;检测波长:327 nm;进样量:20 μL。在此条件下，色谱图见图1。理论板数按绿原酸峰计算，n=6 952，供试品色谱峰得到较好分离，参照中国药典的规定，确定其理论板数按绿原酸峰计算应不低于3 000。

2.2 溶液制备

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取 0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，用50%甲醇补足减失的质量，滤过，精密量取续滤液 5 mL，置 25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含8 μg的溶液，作为对照品溶液(10℃以下保存)。取不含金银花的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，色谱图见图1。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相应的色谱峰，而阴性对照品溶液无干扰，证明本法可行。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取绿原酸对照品9.85 mg，加50%甲醇使溶解并制成质量浓度为7.88 μg/mL的对照品溶液，分别精密吸取 5，10，15，20，30，40 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标、进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为 A=2 991 453 C －3 754，r=0.999 9(n=6)。结果表明，绿原酸进样量在0.039 4～0.315 2 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液(3.94 μg/mL)，连续进样依法测定。结果主成分峰面积的 RSD=1.0%(n=5)，表明方法的精密度较好。

稳定性试验:取同一绿原酸对照品溶液(7.88 μg/mL)，依法测定，每隔3 h进样1次。结果峰面积的 RSD=0.4%，表明绿原酸的50%甲醇溶液在12 h内稳定性较好。

重现性试验:取同一批(批号为090105)样品，依法测定。结果的 RSD=0.7%(n=5)，表明方法具有良好的重现性。

加样回收试验:取已测知含量的同批样品(批号为090101，含量为1.384 1 mg/g)0.25 g，取6份，精密称定，两份为一组，分别精密加入绿原酸对照品 0.394，0.078 8，1.182 mg，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 绿原酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别取10个批号的样品，按拟订的含量测定方法进行测定，结果见表2。按2005年版《中国药典(一部)》金银花药材含量测定方法，测定3批金银花药材中绿原酸的含量，结果见表3。根据10批样品及3批药材的含量测定结果，考虑到绿原酸的不稳定性以及生产工艺过程中的波动等因素，暂订本品每片含金银花以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于 0.30 mg。

表2 10批样品中绿原酸含量测定结果(mg/g)

表3 金银花药材含量测定结果

3 讨论

取绿原酸对照品的 50%甲醇溶液(7.88 μg/mL)，经岛津UV－2450型紫外分光光度计在200～400 nm波长范围内扫描，结果绿原酸在327 nm波长处有最大吸收，故确定327 nm波长为测定波长。经过多次试验，高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量，使原标准得到了提高，有效地控制了药品的内在质量。

[1]WS3－B－0795－91，卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:152.