HPLC法同时测定竹沥止咳液中黄芩苷和柚皮苷的含量

蒋 玲 左梅方

(1广西桂林食品药品检验所，广西桂林市辖区西城路22号，541002;2桂林医学院药学系)

竹沥止咳液由竹沥、黄芩、化橘红等9味中药组成，具有清热化痰，止咳平喘之功效，用于治疗风热咳嗽，咳痰不爽等症。竹沥止咳液现行质量标准中无含量测定项目［1］，该制剂中的黄芩含黄芩苷［2］，化橘红含柚皮苷［3］，我们采用高效液相色谱法同时测定竹沥止咳液中黄芩苷和柚皮苷的含量，结果较为满意。

1 仪器与试药

1.1 仪器 PE－200高效液相色谱仪(美国珀金埃尓默公司)，包括低压四元泵、UV/VIS检测器、自动进样器、在线脱气机、柱温箱及Tcnav色谱工作站;A＆D GR－202电子分析天平(日本 A＆D公司);岛津 UV－2450紫外分光光度计(日本岛津公司)。

1.2 试药 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715－200815，质量分数95.2%);柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110722－200309);竹沥止咳液(由桂林市某医院提供，批号20080710，20081010，20081217);乙腈、磷酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:phenomenex C18柱，(250mm×4.6mm，5μm);流动相:乙腈 －1mL·L－1磷酸(21∶79);流速:1.0mL·min－1;检测波长:283nm;柱温35℃;进样量 10μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品10.20mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为黄芩苷对照品储备液。取储备液3mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得(含黄芩苷58.2624μg·mL－1)。精密称取柚皮苷对照品12.60mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为柚皮苷对照品储备液。取储备液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得(含柚皮苷50.4μg·mL－1)。

2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品2mL，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 空白溶液的制备 按处方比例，分别制备缺黄芩或化橘红的阴性样品，依2.3项下制备空白溶液。

2.5 专属性实验 取上述供试品溶液、对照品溶液和空白溶液，照色谱条件测定，结果空白溶液在与黄芩苷对照品和柚皮苷对照品保留时间相应的位置无色谱峰出现，表明处方中其他药味对测定无干扰。见图1。

2.6 线性范围考察 分别取黄芩苷对照品储备液3mL和柚皮苷对照品储备液2mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别进样1、5、10、15 和 20μL，进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得黄芩苷线性方程:Y=3046512.5X+61516.3，r=0.9999，和柚皮苷线性方程:Y=1633465.5X+38875.4，r=0.9997。结果表明黄芩苷和柚皮苷分别在0.05826～1.16525μg和0.05040～1.00800μg范围内线性关系良好。

2.7 稳定性实验 取同一份供试品溶液，室温放置0、5、10、15 和20h，按2.1 项下色谱条件，分别进样测定，记录峰面积，黄芩苷峰面积RSD为0.5%;柚皮苷峰面积RSD为0.9%，说明供试品溶液在20h内稳定。

2.8 精密度实验 分别取黄芩苷对照品溶液和柚皮苷对照品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样5次，峰面积的RSD分别为0.4%和0.3%，说明精密度良好。

2.9 重复性实验 精密量取同一样品(批号20080710)6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，按色谱条件测定，以峰面积外标法计算。结果平均含量为黄芩苷2.3037mg·mL－1，RSD=0.7%;柚皮苷 0.5721mg·mL－1，RSD=0.7%，表明重复性良好。

2.10 回收率实验 精密量取已知含量的样品(批号20080710)1mL，精密加入 0.21877mg·mL－1的黄芩苷对照品溶液10mL和0.25200mg·mL－1的柚皮苷对照品溶液3mL，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定并计算回收率。结果，黄芩苷平均回收率为99.6%，RSD=1.3%，柚皮苷平均回收率为100.8%，RSD=0.7%(n=6)，见表1。

表1 黄芩苷和柚皮苷回收率实验结果

2.11 样品测定 取批号为 20080710、20081010、20081217的三批样品，分别按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，以峰面积外标法计算，结果3批样品中黄芩苷含量分别为2.3037、1.3953 和 2.2916mg·mL－1，柚皮苷含量分别为 0.5721、0.7028 和0.5593mg·mL－1。

3 讨论

3.1 检测波长的选择 分别以黄芩苷对照品及柚皮苷对照品的甲醇溶液作紫外光谱扫描，黄芩苷在278nm处有最大吸收，柚皮苷在283nm处有最大吸收，考虑到样品中柚皮苷含量较小，选择283nm为测定波长，以获得较大的响应值。

3.2 流动相的选择 笔者比较了乙腈－磷酸水溶液、乙腈－乙酸水溶液、甲醇－磷酸水溶液、甲醇－乙酸水溶液等不同的组分和比例，结果选定乙腈－1mL·L－1磷酸(21∶79)为流动相，在此条件下，2个待测组分峰形良好、分离效果佳，其他成分无干扰，流动相配制也简单。

3.3 本方法操作简便，精密度、重复性、稳定性和回收率较好，可用于竹沥止咳液的质量控制。

［1］广西壮族自治区食品药品监督管理局.医疗机构制剂注册批件［S］.桂 C060035，2006，11，8.

［2］肖培根.新编中药志第一卷［M］.北京:化学工业出版社，2002:862－875.

［3］肖培根.新编中药志第二卷［M］.北京:化学工业出版社，2002:156－161.