中药分期治疗对兔桡骨骨折延迟愈合X线及血清ALP的影响

李天朗 唐志宇 王祖祥 付 勇 温 月

(1四川省德昌县人民医院，四川省凉山彝族自治洲德昌县德州镇东风路20号，615500;2广州中医药大学)

骨折延迟愈合与不愈合是骨科临床常见的并发症，中医认为骨折的愈合是“瘀去，新生，骨合”的过程，根据骨折特点分为初、中、晚三期，分期治疗是中医药治疗骨折的指导原则，骨延迟愈合或不愈合按分期属骨折愈合晚期。本实验观察了中药分期治疗对骨折延迟愈合X线及血清ALP的影响，现将实验资料及结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 新西兰兔75只，2.0～2.5kg，雄性，动物合格证编号:0064192。动物设施使用证明:0032590，均由广州中医药大学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂和主要仪器 骨腊:由德国AESCULAP厂提供(批号:209354);7060型日立全自动生化分析仪(日立株式会社生产)，广州中医药大学实验动物中心提供;万东500mAX线机由广州中医药大学第三附属医院提供。

1.3 模型制作 雄性新西兰兔75只，用戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉(30mg/kg)，无菌施术，于左侧桡骨中下1/3处纵行切开皮肤及皮下组织，暴露左侧桡骨中下1/3部位，在旋前圆肌肌止远端切开骨膜，切除长10mm的骨干与骨膜。分5组，除模型组外其余4组髓腔用骨腊封闭，造成骨延迟愈合模型，逐层缝合肌肉筋膜，关闭切口。肢体不做内外固定允许自由负重、活动，分笼标准饲料喂养，术后连续3天用青霉素40万单位肌肉注射预防感染。

1.4 干预方法 1)基本方剂:所用的基本方剂是根据高等中医药院校统编教材《中医正骨学》中的肢伤一方、二方及三方，经加减而成。2)药液制备:按传统中药水煎剂制备方法制成含生药1.5g/mL的浓缩液。3)给药方法:根据动物体重和体表面积确定给药量，灌胃，根据不同分期起始，早晚各1次。治疗2组术后第2天开始给药(按骨折分期，一、二、三方分别灌胃7、21、28天)。治疗1组、治疗3组4周成模后给药。模型组和延迟愈合模型组术后第2天灌胃给予等容量的生理盐水。

1.5 骨折分期 1)自然分期治疗组(治疗2组):造模后即根据“中医骨折三期治疗”原则，分3期干预。早期活血化瘀、行气止痛，选用加减肢伤一方;中期接骨续筋、舒筋活络，选用加减肢伤二方;后期补益肝肾、强筋壮骨，选用加减肢伤三方。2)模型建立治疗组(治疗1组、治疗3组):依据骨折分期，骨延迟愈合模型建立后按分期属骨折愈合后期，予补益肝肾、强筋壮骨，选用加减肢伤三方，其中治疗3组成模后骨延迟愈合区注入自体红骨髓2mL。

1.6 X线评分标准 各组动物分别在实验第4周末和第8周末拍摄桡骨正侧位X线片，进行X线肉眼评分。0分:在X线片上未发现骨痂阴影;1分:在X线片上可见到骨痂阴影，骨折线比较模糊;2分:有明显骨痂生长，骨折线显著模糊;3分:有丰富骨痂生长，骨折线接近消失;4分:骨折线消失，完全连接，接近骨化。

1.7 血清碱性磷酸酶(ALP)测定 各组动物分别在实验第4周和第8周末耳中央动脉采血2mL，检测血清ALP含量(直接法)。

2 结果

第4周末治疗2组血清ALP明显高于其他4组，差异极显著，P＜0.01;第8周治疗2组与模型组比较差异极显著，P＜0.01，与延迟愈合模型组比较差异显著，P＜0.05，治疗1组和治疗3组血清ALP与模型组比较显著下降，P＜0.05，与治疗2组比较无显著性差异，P＞0.05(见表1)。X线肉眼评分:术后第28天模型组极显著高于其他4组，P＜0.01;延迟愈合模型组极显著高于各治疗组，P＜0.01;术后第56天:模型组极显著高于延迟愈合模型组和治疗1组，P＜0.01，治疗2组极显著高于治疗1组和治疗3组，P＜0.01，治疗3组显著高于治疗1组，P=0.01。模型组与治疗2组、治疗3组无明显差异，P＞0.05，见表2。

3 讨论

骨形成和骨吸收是骨代谢的两个基本过程，骨形成的相对增强和骨吸收的相对减弱是骨折愈合的基础。中医根据骨折损伤的发展过程，分为初、中、晚3期，骨延迟愈合或不愈合按分期属骨折愈合晚期，运用补气血健脾胃、益肝肾舒筋络之法，有利于骨折的愈合。

表1 骨折后不同时段新西兰兔血清ALP指标(U/L，s)

表1 骨折后不同时段新西兰兔血清ALP指标(U/L，s)

注:与模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与延迟愈合模型组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

模型组13 120.54±32.9 9 90.56±35.47延迟愈合模型组 15 120.33±40.33 11 96.72±26.79治疗1组 15 123.27±22.81 14 74.79±20.68*治疗2组 12 155.54±23.33△△＊＊ 9 62.44±27.67△＊＊治疗3组 15 122.4±35.54 11 67.27±24.34*

表2 各时间点X线肉眼观察评分(s，n=9)

表2 各时间点X线肉眼观察评分(s，n=9)

注:与模型组比较，＊＊P＜0.01;与延迟愈合模型组比较，△△P＜0.01;治疗2组与治疗1组相比，□□P＜0.01;治疗3组与治疗1组相比，▲▲P=0.01;治疗2组与治疗3组相比，■■P=0.01。

时间 第28天 第56天2.6717±0.21292 3.6700±0.58355延迟愈合模型组 1.8300±0.19162＊＊ 2.2700±0.25942＊＊治疗1组 1.0200±0.11489＊＊△△ 2.9200±0.26574＊＊△△治疗2组 1.1400±0.12560＊＊△△ 3.7789±0.20630△△□□■■治疗3组 1.1600±0.12853＊＊△△ 3.3300±0.62884模型组△△▲▲

试验第28天各治疗组和延迟愈合模型组X线肉眼观察评分皆明显低于模型组，第56天各治疗组均高于延迟愈合模型组，治疗3组和治疗2组与模型组无明显差异，治疗2组效果最好。提示依据骨折分期不同而给予不同的中药，可以干预骨延迟愈合模型成模，预防骨延迟愈合，有利于骨折的愈合。同时发现早期即对骨折进行中药治疗干预比后期进行干预更有效，中药配合骨髓移植较单纯骨髓移植效果更明显。ALP主要由成骨细胞分泌，可反映出成骨细胞的成骨能力。治疗2组4周时血清ALP升高明显高于其他4组，提示体内成骨细胞处于活跃状态，骨形成功能增强，8周时骨折基本愈合时先于其他组下降，提示血清中ALP含量可反映骨折愈合的情况。因此，对骨折患者进行血清ALP的监测，可对骨折愈合情况作出早期判断，并采取相应措施及时干预。

研究结果提示，中药分期治疗明显提高骨折X线肉眼评分以及血清ALP含量，中药组均有促进骨折愈合的作用。其可能机制是分期治疗更能激活成骨细胞，提高骨形成能力，能更有效地促进钙盐的沉积，因此对骨折进行分期辨证治疗是必要的，有利于加速骨折愈合，其进一步的机制需要今后利用组织学、免疫组化等方法进行探讨。