六味地黄丸对大鼠脂肪细胞生长的影响

蒋俊和，刘蓉芳

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.咸宁市中医医院，湖北 咸宁 437100）

随着人们保健意识的提高，人们越来越注重养生保健。保健品中以补虚为主，而补虚又以补肾为主，导致时下补肾药物被大量滥用。不可否认，六味地黄丸确实是一种好药，但并非人人皆宜、多多益善。我们在临床使用过程中发现即使无糖型六味地黄丸也可能具有引起各类人群肥胖的副作用[1]。因此，研究六味地黄丸对机体脂肪细胞生长的影响，对于科学、合理地使用六味地黄丸，具有很重要的指导意义。本文通过动物实验进一步证明其作用，并对其机制进行了初步探讨。现将实验方法及结果报道如下。

1 材料与方法[2-3]

1.1 材料

1.1.1 动物 SD大鼠，雄性75只，体质量200～220 g，清洁级，湖南农业大学实验动物中心提供。

1.1.2 药物 六味地黄丸8粒为3 g，每日用量为9 g），河南宛西制药，公司提供。批号：061263。

1.1.3 仪器 卡尺，软尺，精度为0.00的电子秤，动脉导管，剪刀，止血钳，OLYMPUS1X70倒置显微镜。Motic Image Advanced 3.0图像分析系统。

1.2 方法

1.2.1 药物配制方法 六味地黄丸水溶液的配制：每天新鲜配制，以48粒六味地黄丸溶入100 mL蒸馏水中，搅拌待充分混匀后放入4℃冰箱保存备用。

1.2.2 高脂高营养饲料配制方法[4]自购原料，配方由湖南中医药大学实验动物中心加工。配方为：每100 g饲料中内含猪油10 g，全脂奶粉15 g，白糖10 g，花生油 10 g，基础饲料 55 g。

1.2.3 动物分组及饲养方法 75只雄性SD大鼠，按体质量随机分为3组，每组25只，3组大鼠平行饲养。正常组给予普通饲料，高脂饲料组（简称对照组）给予高脂饲料，于每天上午9：00给予蒸馏水灌胃。六味地黄丸组给予普通饲料，并于每天上午9：00给予六味地黄丸（简称实验组）灌胃每只大鼠生药量为90 mg/100 g，溶液浓度为固定浓度，4周和8周灌胃剂量随大鼠体质量增加而变化，自由饮用洁净水及摄食。实验室温度18～27℃，相对湿度：40%～70%。

1.2.4 检测指标及方法[5]分别于第4周和第8周末，从各组随机取出10只大鼠，根据体质量以2%戊巴比妥钠溶液2.3 mL/kg（45 mg/kg）腹腔注射麻醉并称体质量。取软尺经大鼠双侧髋骨顶点绕腹1周测量大鼠腹围，并记录。然后再用卡尺经大鼠鼻尖至肛门测量大鼠体长，并记录，用以计算大鼠Lee Index(肥胖评判指数)。大鼠体质指数Lee Index=体质量(g)1/3×103/体长(cm)。最后沿腹正中线打开腹腔，取出肾周、肠系膜、睾周的脂肪垫并在精度为0.00的电子秤上称取质量，记录，将肾周脂肪垫放入装有甲醛固定液的瓶中，送检。脂肪垫用甲醛固定液浸泡、脱水、切片、HE染色。在OLYMPUS1X70倒置显微镜下观察脂肪组织病理学改变，用Motic Image Advanced 3.0图像分析系统采集图像，并将图像用摄影镜头传输到微机显示屏上，用Motic Image Advanced 3.0图像分析系统测得脂肪细胞的截面积。最后计算所得的数据均值作为该部位脂肪细胞面积的最终数值。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般情况观察

第1～2周：正常组大鼠摄食、活动、二便同前；实验组、对照组大鼠摄食量均较正常组减少；实验组大鼠有排软便甚至腹泻情形，垫料更换频繁，活动减少；对照组大鼠也存在活动减少，排便软等情况。

第3～4周：实验组、对照组大鼠排软便现象持续，但摄食较前增加；其中实验组小便量多,垫料更换频繁、活动不多、喜卧，部分大鼠腹围开始增大但组内不均匀；对照组大鼠腹围快速增大并组内均匀，活动不多、嗜睡、大便软、量不多；正常组摄食一般，活动相对其他组较多，腹围无增大现象,二便正常。

第5～8周：实验组、对照组大鼠摄食均较正常组增多；实验组排大便软而多、活动减少、嗜睡、体态丰满,但不及对照组,并组内肥胖程度不均衡,性情温顺、皮肉结实、毛色光亮、体毛分布均匀、少脱毛；对照组排大便软而少、活动少、精神萎顿、反应迟钝、体形肥胖、腹围大,组内相互间均衡,皮肉松弛、毛色无光亮、多脱毛、体毛分布不均匀；正常组大鼠摄食、活动均同前,皮肉结实度和毛色光亮度均不及实验组,偶有脱毛。

2.2 大鼠Lee’s指数及腹围比较

4周时：对照组大鼠腹围和Lee’s指数均较正常组和实验组大，并且差异有统计学意义 （P＜0.05，P＜0.01），显示肥胖对照成功；而实验组与正常对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），提示此时六味地黄丸对大鼠的致肥胖作用不显著。见表1。

8周时：对照组和实验组大鼠Lee’s指数与腹围均较正常对照组增大，并且差异有统计学意义（P＜0.01），提示此时六味地黄丸具有与高脂饲料相同的致肥胖作用；但对大鼠指标的影响比六味地黄丸更显著（高脂与六味地黄丸比P＜0.01），提示六味地黄丸对大鼠致肥胖的能力要大于正常饲料，但又不及高脂饲料。见表1。

从时间上看，正常组腹围和Lee’s指数第8周与第4周相比，无明显差异；而对照组和六味地黄丸组的大鼠腹围和Lee’s指数，第8周均较第4周明显增大，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。 结果见表1。

表1 六味地黄丸对大鼠腹围与Lee’s指数数值的影响 （n=10，s）

表1 六味地黄丸对大鼠腹围与Lee’s指数数值的影响 （n=10，s）

注：与正常组比△P＜0.05，△△P＜0.01；与对照组比*P＜0.05，**P＜0.01；与第 8 周比 #P＜0.05，#＃P＜0.01。

腹围(cm) Lee’s指数第4周 第8周 第4周 第8周正常组 16.790±1.216 17.390±1.162# 301.673±5.751 301.692±5.858对照组 18.240±0.368△△ 24.320±0.210＃# 312.787±7.349△ 333.009±9.378△△#实验组 16.830±0.962**19.720±2.612△△**＃ 302.062±12.942*316.265±15.134△△**#组 别

2.3 大鼠腹腔内脏脂肪含量、脂肪个数及面积

随着饲养时间的增加，正常组脂肪个数和脂肪面积无明显变化，而对照组和实验组大鼠脂肪含量明显增加，差异有统计学意义（P＜0.01），脂肪细胞面积明显增大（P＜0.01），单位视野所见的脂肪细胞个数显著减少（P＜0.01）。但组间比较有差别。见表2。

4周时：对照组的脂肪含量最多，与正常组和实验组比较差异有统计学意义（P＜0.01），虽然其脂肪细胞面积均值最大、脂肪细胞个数均值最少，但较正常对照组差异无统计学意义（P＞0.05），而较实验组差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。 实验组的脂肪含量与正常组比差异无统计学意义（P＞0.05），但其脂肪细胞个数之多和脂肪细胞的面积之小较正常组差异有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

8周时：正常组的脂肪细胞个数及面积，相对第4周无明显改变（P＞0.05），而对照组和实验组均较第4周有明显的改变（P＜0.01）；并且六味地黄丸显示出与高脂饲料同样增多脂肪含量、增大脂肪面积、减少单位视野所见脂肪细胞个数的能力，即较正常对照组均差异有统计学意义 （P＜0.01）；但高脂饲料对大鼠的这种影响较六味地黄丸更为显著 （对照组与实验组比，P＜0.05）。见表2，图 1～2。

表2 六味地黄丸对大鼠脂肪含量、细胞个数及面积的影响

表2 六味地黄丸对大鼠脂肪含量、细胞个数及面积的影响

注：与正常组比△P＜0.05，△△P＜0.01；与对照组比 *P＜0.05，**P＜0.01；与第 8 周比 #P＜0.05，#＃P＜0.01。

组 别脂肪含量(g) 脂肪细胞个数(个) 脂肪细胞面积(μm2)第4周 第8周 第4周 第8周 第4周 第8周正常组 11.155±1.153 12.734±0.793## 29.50±6.15 30.20±4.39# 77 751.27±19 631.62 78 153.23±17 040.09#对照组 14.825±0.901△△ 19.565±1.923△△＃ 25.90±12.47 11.90±4.70△△#＃ 128 777.8±84 848.51 270 737.0±124 656.33△实验组 11.099±0.721** 15.370±1.537△△**#＃ 64.10±13.09△△** 18.00±5.40△△*#＃ 28 030.75±11 158.19△△* 148 746.5±42 680.81△*△#＃*

图1 六味地黄丸对第4周大鼠脂肪细胞的影响光镜图（10×10）

图2 六味地黄丸对第8周大鼠脂肪细胞的影响光镜图（10×10）

3 讨论

从中医理论上认识,六味地黄丸导致肥胖的原因可能是在体内形成了痰湿，而形成痰湿引起肥胖可能与以下几个方面有关。

3.1 肾阴阳失衡

中医认为，最理想的健康状态，是阴阳平衡的状态，即《黄帝内经》中记载的“阴平阳秘，精神乃治”。肾阴,又称元阴、真阴,是人体阴液的根本,对全身各脏腑组织起滋养、濡润的作用。肾阳,又称元阳,是人体阳气的根本,对全身各脏腑组织起温煦、推动的作用。肾阴肾阳互相制约，对人体的代谢和功能起着调节作用，其中任何一方偏盛或偏衰都会导致阴阳不平衡而引起疾病。

历代医家认为六味地黄丸是补肾之专品，并将其视为补阴之神方。如 《校注妇人良方》、《景岳全书》、《证治准绳》皆认为六味地黄丸为“壮水之剂，夫人之生，以肾为主，凡病皆由肾虚而致，此方乃天一生水之剂，无有不可用者，世所罕知。”《医宗已任编》从六味地黄丸的组成及药性上分析，认为“此纯阴重味润下之方也，纯阴肾之气，重味肾之质，润下肾之性，非此不能使水归其壑。……自此以来，为补阴之神方矣。”

正常大鼠体质是处于阴阳平衡的状态，服用六味地黄丸这种偏于助长肾阴一方的药物后，势必破坏了原先的阴阳平衡状态，导致肾阴过度滋长，机体滋润太过；而肾阳的一方却相对不够，温煦不及，不能制约肾水，从而津液生成过多或者运行缓慢，将原来的“滋润、灌溉”变成了水湿泛滥，水液不走常道，或渗入肠胃，则大便溏；或水液停留体内，日久聚而为痰引起肥胖。实验中观察到实验组大鼠小便多，垫料易湿、更换频繁和大便稀软甚至不成形之现象，是否因六味地黄丸对正常体质大鼠造成肾阳温煦不及而导致体内津液气化失常而引起，尚待进一步研究。

3.2 脾肾功能失衡

人体之中,精微物质的生成、转化的过程，即《素问·阴阳应象大论》中“气归精，精归化”的过程。这一过程需要保持相对的动态平衡，精微物质才能被有效利用，代谢物则排出体外。反之，精微物质若失去平衡，不能转化，则精微物质不能被机体所利用，反而形成痰湿积聚。《景岳全书》称：“痰即人之津液，无非水谷所化。此痰也既化之物，而非不化之属也。但化得其正，则形体强，营卫充；而痰涎本血气，若化失其正，则脏腑病，津液败，而血气即成痰涎”。六味地黄丸虽然是三阴并补之方，但以滋补肾阴为主。土能克水，由于滋补肾阴太过，引起肾水泛滥，则反侮脾土，即土为水湿所困，导致脾的运化水谷精微功能失常，脾不散精，积聚浊败，渐成痰湿积聚，反为其害。

3.3 脾胃功能失调

脾为阴土，胃为阳土，脾喜燥恶湿，而胃喜湿恶燥。虽然中医理论认为六味地黄丸其组方有“三补”“三泻”，“滋而不腻”“补而不滞”之说，其中茯苓、泽泻利水祛湿，但其量效不敌熟地、山药、山茱萸之滋腻，因而正常体质下的大鼠，其脾土仍然为水湿所困；胃喜湿恶燥，它不为湿所困，加之六味地黄丸方中山药、茯苓又有健脾胃之功，从而形成了胃强脾弱之证。即实验中六味地黄丸能使大鼠食欲增加，但由于不能很好的将所摄取进来的水谷精微正常地布散，故最后形成了肥胖。讨论中后两点也正符合中医理论中“脾为生痰之源”之说。

六味地黄丸是非处方药品，而不是保健品，它适用中医辨证属于肾阴虚证或见肝肾阴虚证的患者。因此，我们认为必须按照中医的辨证，或在中医师的指导下服用，否则不但不能保健养生，反而会适得其反。

[1]蒋俊和，六味地黄丸对人体体脂指数的影响[J].湖南中医药导报，1996，（11）：32.

[2]王 威，蒋海涛，李玉红，等.小鼠、大鼠高甘油三酯血症、脂肪肝模型的比较[J].天津中医药，2006，6（3）：192-194.

[3]熊 鹰，王俊芳，陈仪坤，等.高脂膳食对雌、雄大鼠肥胖程度影响差异研究[J].现代预防医学，2006，33（4）：507-508.

[4]葛可佑.中国营养科学全书[M].北京：人民卫生出版社，2004：871-875.

[5]袁 青，靳 瑞，欧阳博文，等.“肥三针”治疗单纯性肥胖大鼠的实验研究[J].中医药学报，2003，31（6）：34-36.

[6]肖子曾，赵 婧，戴 冰，等.六味地黄方超微饮片含药血清对大鼠前脂肪细胞的影响[J].湖南中医药大学学报.2010，30（1）：22-24.