急性髓细胞白血病患者NGF及p75NTR测定的临床意义

韩秀华，李秀梅，姜玉龙，江亚军，刘小林

(连云港市第二人民医院，江苏 连云港 222000)

研究表明，神经生长因子(NGF)不仅可以作为一种丝裂原促进胆管癌、乳腺癌等肿瘤细胞的有丝分裂，还能抑制食管癌、胃癌等肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤分化。但是，NGF在急性髓细胞白血病(AML)中的水平变化和发病机制中的作用在国内外鲜有报道。本研究测定AML患者血清NGF水平以及骨髓白血病细胞群表面低亲和性NGF受体(p75NTR)的表达并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2008年3月～2010年9月于连云港市第二人民医院住院并确诊初治AML患者24例(病例组)，男14例、女10例，年龄13～79(42.8±21.1)岁。其中 M12 例，M29 例，M36 例，M43例，M53例，M61例。化疗方案包括DA、CAG、HA、MA、全反式维甲酸+亚砷酸等。根据张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》进行疗效判断，其中完全缓解(CR)15例，未缓解(NR)7例。CR患者按照巩固强化维持治疗并随访3年总体生存率(OS)，随访终点为患者死亡或至2011年2月28日止，随访时间为1～36(15.4±13.1)个月。选择同期15例健康者作为对照组，男9例、女6例，年龄15～74(38.3±19.1)岁;其性别、年龄构成与病例组比较差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 ELISA法测定血清NGF水平 清晨空腹采取静脉血3 ml置于无抗凝物的真空采血管中，1000 r/min离心20 min后分离血清后置于-70℃冰箱保存。样本收集完毕后用人NGF ELISA试剂盒(美国Genzyme公司产品)标定，用e-STAR-PLUS酶标仪在波长450 nm依序测量各孔的光密度(OD值)。

1.2.2 流式细胞仪测定p75NTR 分别于化疗前和治疗过程中不同时间点抽取患者骨髓液2 ml置于3.8%枸橼酸钠抗凝的真空采血管中。各取骨髓液200 μl至2个检测管，对照管加入CD45-percep、IgG1-PE(购自美国BD公司)，测量管加入荧光标记抗体CD45-percp、p75NTR-PE(购自美国 BD公司)各 20 μl，振荡混匀后室温避光孵育 20 min，加入0.1 mol/L pH 7.0 PBS 2 ml。1000 r/min 离心 20 min后PBS缓冲液洗涤2遍，弃上清后，加入500 μl的PBS缓冲液混匀，悬浮细胞，流式细胞仪(美国BD公司)分析。

2 结果

2.1 两组NGF和p75NTR的表达 两组血清NGF水平及骨髓白血病细胞群表面p75NTR表达水平差异有统计学意义(P均＜0.05)。见表1。

表1 两组NGF和p75NTR表达水平变化()

表1 两组NGF和p75NTR表达水平变化()

注:与对照组比较，*P ＜0.05

组别 n NGF(pg/ml) p75NTR(%)病例组 24 115.08 ±65.51* 56.10 ±16.76*对照组15 64.60 ±33.11 83.39 ±10.99

2.2 NGF和p75NTR表达与AML患者临床特征的关系 AML患者血清NGF和骨髓白血病细胞群表面p75NTR表达水平在不同年龄、性别、外周白细胞计数以及骨髓幼稚细胞比例间差异均无统计学意义(P 均 ＞0.05)。

2.3 AML不同临床疗效患者NGF和p75NTR的表达 24例初治AML患者中，除1例放弃治疗和1例早期死亡外，余22例患者经2个周期标准方案化疗后获CR 15例(CR组)、NR 7例(NR组)，总体缓解率为68.18%(15/22)。AML患者不同临床疗效间NGF和p75NTR表达变化见表2。

表2 AML不同临床疗效间NGF和p75NTR表达变化()

表2 AML不同临床疗效间NGF和p75NTR表达变化()

注:与 NR组化疗前比较，*P＜0.05;与对照组比较，△P＜0.05;与 CR 组化疗后比较，▲P ＜0.05

组别 n NGF(pg/ml) p75NTR(%)病例组CR 15化疗前 119.13 ±54.58 61.18 ±15.58*化疗后 88.33 ±48.86 73.86 ±12.00 NR 7化疗前 120.00 ±92.87 44.29 ±15.61化疗后 114.43±60.90△ 46.82±19.34△▲对照组15 64.60 ±33.11 83.39 ±10.99

2.4 NGF和p75NTR表达与患者3年OS的关系以全部24例患者治疗前NGF和p75NTR表达水平的中位数设定为界值分为NGF或p75NTR高表达组、NGF或p75NTR低表达组，以此分别绘制Kaplan-Meier生存曲线观察患者3年OS。NGF高表达组3年OS为38.9%，低表达组为48.6%，两组比较差异无统计学意义(P=0.672);p75NTR高表达组3年OS为43.6%，低表达组为38.5%，两组比较差异亦无统计学意义(P=0.548)。

3 讨论

p75NTR具有复杂的生物学功能，可以介导细胞的存活、增殖、分化或凋亡等效应，在不同的细胞类型、发育阶段及局部环境中执行的功能往往不同［1］。

近年来大量临床和基础研究显示，NGF及其受体在肿瘤组织中异常表达，参与肿瘤的发生发展但表达水平却不尽一致［2～6］。NGF 在胆管癌、乳腺癌［7］以及伴肝硬化的肝细胞癌中高表达，支持了NGF在肿瘤进展中起促进癌细胞增殖的作用，并提示NGF阳性表达随着肿瘤恶性程度的增高而增高，且与肿瘤的淋巴转移密切相关。目前，p75NTR被认为是一个潜在的抑癌基因，p75NTR可有效地抑制前列腺癌、膀胱癌、胃癌及视网膜母细胞瘤等恶性肿瘤细胞的生长，这种抑制作用是通过改变细胞周期调节蛋白的表达来影响细胞周期、诱导凋亡来实现的。相反，也有研究报道胰腺导管癌p75NTR表达较正常胰腺组织表达上调［6］。目前，对于不同肿瘤组织p75NTR表达差异的具体机制仍未完全阐明。Troeger等研究120例ALL儿童患者的低亲和性NGF受体水平发现，p75NTR高表达是小儿ALL良好的预后标记。为此我们推测血清NGF高表达可能参与B-ALL的发生发展过程，且可能参与白血病骨髓微环境的维系，并对白血病的发生发展起促进作用;而p75NTR表达下调可能通过调节TrkA信号转导以及抑制白血病细胞凋亡等作用机制参与白血病的发生发展，此有待进一步研究。

本研究发现，随着白血病病情的缓解，NGF和p75NTR均不同程度地恢复正常，提示两者对判断白血病患者的近期疗效可能具有一定的参考价值。虽然缓解后AML患者NGF和p75NTR与对照组比较差异无统计学意义，但从表达水平看尚未完全正常。本文结果还显示，NGF和p75NTR高表达组3年OS较低表达组差异无统计学意义，此不排除样本量不足对研究结果的影响。因此，我们下一步将扩大样本量进一步评价NGF和p75NTR在预后评价中的意义。

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［2］Lazova R，Tantcheva-Poor I，Sigal AC.p75 nerve growth factor receptor staining is superior to S100 in identifying spindle cell and desmoplastic melanoma［J］.J Am Acad Dermatol，2010，63(5):852-858.

［3］Qian Y，Takeuchi S，Chen SJ，et al.Nerve growth factor，brain-derived neurotrophic factor and their high-affinity receptors are overexpressed in extramammary Paget＇s disease［J］.J Cutan Pathol，2010，37(11):1150-1154.

［4］Meng LX，Ding ZJ，Chen XP，et al.The expression and significance of nerve growth factor and its receptors in pancreatic ductal adenocarcinoma［J］.Zhonghua Neike Zazhi，2009，48(7):562-565.

［5］Wang W，Zhao H，Zhang S，et al.Patterns of expression and function of the p75(NGFR)protein in pancreatic cancer cells and tumours［J］.Eur J Surg Oncol，2009，35(8):826-832.

［6］Liu M，Su YH，Chen Y.Expressions of neurotrophic factors and their receptors in prostate cancer［J］.Zhonghua Nankexue，2010，16(2):129-131.

［7］Dollé L，Adriaenssens E，Yazidi-Belkoura I，et al.Nerve growth factor receptors and signaling in breast cancer［J］.Curr Cancer Drug Targets，2004，4(6):463-470.