低危骨髓增生异常综合征免疫表型分析

孙富英，金洁萍，毛淑丹

(辽宁医学院第一附属医院，辽宁 锦州 121001)

骨髓增生异常综合征(MDS)是造血干/祖细胞(CD34+)的恶性克隆性疾病，表现为骨髓原始细胞形态和数目异常、无效造血及不同程度的外周血细胞数目减少，并高风险地向急性白血病转化［1］。国内外研究证实，免疫表型分析有助于MDS的诊断及预后评估，但低危MDS患者免疫表型分析报道较少。本研究对低危MDS患者骨髓免疫表型分型诊断及鉴别诊断的临床意义进行了探讨。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2008年3月～2010年12月我院MDS住院患者27例(MDS组)，均依据2008年WHO标准分型确诊［2］。男17例、女10例，年龄32～86岁、中位年龄58岁;其中RA型4例，RAS型4例，RCMD型16例，RAEB-1型3例。27例均为低危(IPSS评分0～1.0分)MDS患者，其中骨髓增生低下6例。另选择再生障碍性贫血(AA)患者12例(AA组)，男7例、女5例，年龄25～76岁、中位年龄41岁;对照组18例，男8例、女10例，年龄26～79岁、中位年龄47岁;其中，外周血单纯红细胞减少轻度贫血的缺铁性贫血11例，外伤截肢7例。三组性别、年龄差异无统计学意义。

1.2 方法 检测标本均经过对方知情同意后采集，然后行骨髓涂片、流式细胞术分析及常规染色体核型分析(染色体核型分析对照组除外)。流式细胞仪为美国Beckman Coulter公司FC500MPI型，发射荧光采用488 nm激光激发。采取研究对象的骨髓液2～3 ml EDTA抗凝，对经溶血素裂解红细胞骨髓中所有有核细胞进行分析。调整细胞数至(0.5～1.0)×106/ml，分别加入抗体 HLA-DR-FITC/CD33-PE/CD34-ECD/CD117-PC5/CD45-PC7、CD10-FITC/CD56-PE/CD34-ECD/CD19-PC5/CD45-PC7、CD5-FITC/CD7-PE/CD34-ECD/CD2-PC5/CD45-PC7、HLADR-FITC/CD11b-PE/CD34-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7、CD11b-FITC/CD13-PE/CD16-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7及阴性对照，取某一抗原表达≥20%为阳性。单克隆抗体为Beckman Coulter产品。

2 结果

2.1 MDS及各亚型、对照组、AA组之间CD34+测定结果 见表1。

表1 MDS组及各亚型、对照组、AA组CD34+测定结果(%，)

表1 MDS组及各亚型、对照组、AA组CD34+测定结果(%，)

注:与对照组、AA 组比较，*P ＜0.05

组别 n CD34+MDS 组 27 3.50 ±0.50*RA/RAS 8 2.40 ±0.12 RCMD 16 4.50 ±0.30*RAEB-1 3 5.90 ±0.70*对照组 18 2.10 ±0.17 AA组12 0.13 ±0.02

2.2 低危MDS免疫表型分析 27例MDS患者原始细胞、成熟粒细胞、单核细胞经检测可见各系细胞免疫表型异常表达，也有多重异常表达表现。①原始细胞免疫表型异常表现为:CD34+表达比例相对或绝对增加，表达 CD11b或 CD15、CD13、CD33，或HLA-DR表达缺失;异常表达淋巴系抗原 CD7、CD56。②成熟粒细胞免疫表型异常表现为:SSC减低(细胞内颗粒减少)，粒系抗原之间表达关系异常以 CD13/CD16、CD11b/CD15 明显，CD10、CD11b、CD13、CD15、CD16抗原不同步表达，CD13或 CD33表达的缺失，出现异常CD56的表达，CD45表达减低。③单核细胞系表达异常表现为:单核细胞比例减少，CD11b、CD13、CD33、HLA-DR 表达关系异常，CD16、CD33表达缺失，异常表达CD56。27例MDS患者免疫表型特征见表2。

表227 例MDS患者免疫表型特征(例)

3 讨论

目前，细胞形态和细胞遗传学改变仍是MDS诊断的重要依据。但是MDS病态造血类型繁多，且缺乏特异性。染色体核型异常在MDS患者的检出率为40% ～70%［3］，在幼稚细胞数不增高的 MDS患者中伴有异常核型尚不足32%［4］，造成低危MDS患者诊断困难。为此，2006年维也纳国际工作会议将流式细胞术作为MDS的辅助诊断标准［5］。

本研究对27例低危MDS患者免疫表型分析结果显示，几乎所有MDS患者存在髓细胞分化抗原的异常表达;单一细胞群的多重表达在RCMD、RAEB-1较RA/RAS更明显;粒细胞系或单核细胞系表达异常患者占92.5%，结果与 van de Loosdrecht等［6］报道的92%病例存在粒细胞或单核细胞表达异常一致。MDS患者出现单一细胞免疫表型异常不具有特征性，因为单一细胞免疫表型异常也可见于营养不良性贫血等非MDS患者［7］。近年来，研究较多的流式积分对MDS预后的影响资料［6，8］显示，一系的多个异常表达或多系表达异常均确定为主要免疫表型异常，不同抗体组合对MDS诊断更具意义。27例低危MDS患者单一细胞群多重表达率为51.8%，而≥2个细胞亚群的表达率为88.9%。此显示流式细胞术比MDS遗传学检测阳性率33.3%(27例MDS患者9例染色体核型异常)更敏感。

随着MDS进展，CD34+细胞表达呈现增高趋势，流式细胞术检测MDS患者CD34+表达与骨髓细胞形态原始细胞数呈正相关［9］。低危组MDS患者CD34+表达在各亚型(RA/RAS、RCMD、RAEB-1)逐渐增高，此与文献［10］报道一致。尽管RA/RAS类型CD34+细胞与对照组差异无统计学意义，但低危MDS各类型与AA患者CD34+细胞表达不同仍具有鉴别诊断意义。本文24例RA/RAS、RCMD中，13例CD34+表达百分率高于正常对照组，但形态学原始细胞分类均在正常范围，提示低危组MDS早期已有MDS恶性克隆的存在。成熟粒细胞免疫表型表达的减少揭示了细胞分化障碍、凋亡增加导致外周血细胞一系或多系减少，反馈刺激骨髓异常造血干细胞增加，形成骨髓过度增生伴病态造血的低危组MDS发病机制。本结果还表明，MDS患者CD34+异常表达较形态改变更早。同时在低危MDS患者CD34+细胞有少部分表达CD7，其临床意义有待进一步探讨。

本研究发现，RA/RAS亚型见到粒细胞SSC的明显下降，但是根据 WHO分型标准 RA/RAS型MDS病态造血细胞小于粒细胞系细胞的10%，因此流式细胞术可检测到较形态学改变更早的微小变化。Lorand-Metze等［11］探讨MDS与外周血细胞减少的非克隆性疾病粒细胞SSC改变，结果发现MDS患者早幼粒细胞的SSC是减低的，并与外周血白细胞计数相关。通过CD34+细胞、早幼粒细胞和晚幼粒细胞的SSC分析能够鉴别87%的病例是否为克隆性。

总之，应用流式细胞术进行MDS的免疫表型检测，较染色体核型分析有高度的敏感性，亦较细胞形态学检测有独特的优势。

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