高效液相色谱法测定猪肉中喹乙醇

田 蕴 蒋向君 贺 燕 葛 敏

（江苏省连云港市畜产品质量监督检验测试中心，连云港 222001）

喹乙醇又称喹酰胺醇，商品名为快育灵、倍育诺，是化学合成的喹嗯啉类广谱抗菌药物。20世纪70年代初由西德拜尔药厂研究合成的饲料添加剂，有良好的广谱抗菌效果，并具有蛋白同化作用，可提高动物的饲料转化率与瘦肉率，促进动物生长。但由于喹乙醇有蓄积毒性，对大多数动物有明显的致畸作用，对人也有潜在的致畸形、致突变、致癌作用，不规范使用喹乙醇不仅直接危害动物机体的健康，还能对人类健康造成极大的危害，因此喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂，《中国兽药典》（2010版）对喹乙醇也有明确规定喹乙醇禁用于禽、鱼及体重超过35kg的猪，农业行业标准NY 5029-2008《无公害食品 猪肉》中规定喹乙醇不得检出。

依据GB/T 20797-2006肉与肉制品中喹乙醇残留量的测定方法，对猪肉中喹乙醇含量测定过程中，加标回收率较低，本文根据喹乙醇见光易分解的特性，减少了称样量，改进了前处理过程，建立了一种测定猪肉中喹乙醇含量的有效方法，进行了回收率试验，得到了满意的回收率，在平时的检测过程中，获得了满意的效果。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

Waters高效液相色谱仪（2487检测器）；组织捣碎机；振荡器；离心机；氮吹仪；旋涡混合器；喹乙醇标准品（含量98.4%，中国兽医药品监察所）；乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；正已烷（色谱纯）；超纯水

1.2 仪器分析条件

色谱柱：symmetryC18柱（5μm，4.6×250mm）；流动相：乙腈+水（10+90）；流速：1.0ml/min；检测波长：380nm

2 实验方法

2.1 添加回收样的制作

取适量样品，于组织捣碎机中捣碎，混合均匀后，称取22份样品，每份5g（精确到0.01 g），于50 ml离心管中。其中，2份作为空白样品，5份加入50 μL10 μg/ml的标样，制成添加量为0.1 mg/kg的样品；5份加入15 μL100 μg/ml的标样，制成添加量为0.3 mg/kg的样品；5份加入50 μL100 μg/ml的标样，制成添加量为1 mg/kg的样品；最后5份加入100 μL100 μg/ml的标样，制成添加量为2 mg/kg的样品。

2.2 样品提取

加入15 ml乙腈，振荡提取10 min，4 000 r/min离心后将上清液转入另一50ml离心管中，残渣用10 ml乙腈重复提取1次，振荡离心后将2次上清液合并，加入5 ml正已烷振荡10 min，静置分层，取下层液于60 ℃水浴中用氮气吹干，用2 ml流动相溶解残留物，旋涡混匀，经0.45 μm滤膜后供色谱测定。

2.3 标准曲线

准确称取50.81 mg喹乙醇标准品（使用前于105℃干燥1.5h），于50 ml容量瓶，用甲醇溶解定容，配制成1.0 mg/ml的标准溶液，取10 ml该溶液于100 ml容量瓶中，用甲醇定容，稀释成100 μg/ml的标准溶液。

取适量100 μg/ml的标准溶液，用甲醇逐级稀释成为0.2 μg/ml、0.5 μg/ml、1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、5.0 μg/ml的标准工作溶液，上机测定，此溶液临用现配。

3 结果与讨论

3.1 标准曲线的回归方程及相关系数

在0.2～5.0 μg/ml浓度范围内，以峰面积为纵坐标（y），喹乙醇浓度为横坐标（x），得出标准曲线的回归方程及相关系数见表1。

表1 标准曲线的回归方程及相关系数

3.2 不同浓度加标回收率及精密度

空白样品经测定不含喹乙醇，不同浓度加标回收率及精密度结果见表2。

3.3 样品分析

按照本方法对实验室采集的30份猪肉样品进行分析。其中，2份检出喹乙醇，检出含量为0.25 mg/kg及1.20 mg/kg，测定结果令人满意。

3.4 检测过程注意事项

因喹乙醇见光易分解，整个操作过程要严格避光，有条件的最好在暗室内操作，此举非常关键，尤其是氮气吹干过程，通过试验发现，在用氮气吹干过程中，如不注意避光，得到的回收率非常低，仅为百分之十几，甚至为零；另外，所有溶液尽量选用棕色容量瓶保存。

表2 不同浓度加标回收率及精密度（n=5）

3.5 结论

本文提供的方法便捷快速，回收率高，重现性好，精密度高，向猪肉样品中添加喹乙醇标准品，添加量为0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg时分别测得回收率为71.1%、77.1%、84.9%、90.7%，在实际的检测过程中，测定结果令人满意。