高效液相色谱法测定泌淋胶囊中没食子酸的含量

方 灿

贵州省药检所，贵州 贵阳 550004

泌淋胶囊收载于国家药品标准［1］，具有清热解毒，利湿通淋之功效，临床上用于泌尿系感染等疾病的治疗。全方由头花蓼、车前草、酢浆草、石椒草四味药组成，标准中该制剂项下仅有TLC鉴别，无含量测定项。方中头花蓼为主药，其主要活性成分为没食子酸［2］［3］。目前，文献报道的没食了酸定量分析方法多采用高效液相色谱法［4～7］测定。以没食子酸作为质量控制的指标，建立高效液相色谱法测定泌淋胶囊中没食子酸含量测定方法，则可以建立较为有效可靠的质量标准，对于生产和使用中的质量检验和控制，都有较大的意义。本法操作简便，精密度高，分离良好。

1 仪器、试药及试剂

LC-10Avp高效液相色谱仪及其色谱数据工作站;METTLER TOLEDO电子天平;CHXIN-CH-300型超声震荡仪。没食子酸对照品 (批号110831-200302，中国生物制品药品检定所);泌淋胶囊 (10批)、泌淋胶囊阴性样品(缺头花蓼)(均由贵州百祥制药有限责任公司提供);甲醇、乙腈 (色谱纯);磷酸 (分析纯);水 (重蒸水)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验Diamonsil C18色谱柱(5μm，150×4.6mm，迪马公司生产)，流动相：甲醇 -0.4%磷酸溶液 (1：99)，检测波长：272nm，流速：1.0ml/min。在上述色谱条件下，没食子酸峰与其他相邻蜂基线分离，其分离度符合要求。见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram

2.2 线性关系考察 精密称取没食子酸对照品0.01290g， 置100ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，作为对照品溶液(0.1290mg/ml)。精取上述对照品溶液分别用甲醇稀释制成0.01290、0.02580、0.05160、0.07740、0.1290mg/ml的对照品溶液。分别各吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量 (mg/ml)为横坐标，峰面积 (A)为纵坐标。绘制标准曲线，回归方程为：Y=24352727.41X+15348.36，r=0.9999。没食子酸在 0.1290 ～ 1.290μg 范围内线性关系良好。

2.3 精密度实验 取对照品溶液 (51.60μg/ml) 重复进样6次，RSD为0.75%，表明精密度良好。

2.4 重复性考察 取供试品0.1g，6份，精密称定，照含量测定项下的方法测定，含量分别为 13.76、13.51、13.73、13.51、13.76mg/g，平均含量为 13.66mg/g，RSD为 0.88%。

2.5 稳定性考察 取供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、12小时进样，测定峰面积，RSD为0.43%，供试品溶液在12小时内稳定。

2.6 加样回收试验 取已测定含量供试品0.05g各6份，精密称定，置25ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液(0.1290mg/ml)5ml，照含量测定项下的方法操作及测定，结果见表1。

表1 加样回收试验 (n=6)Tab1 Results of determination of average recovery(n=6)

表2 供试品含量测定.结果 (n=3)Tab2 Results of samples determination(n=3)

2.7 供试品含量测定对照品溶液的制备 取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含50μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理1小时，放冷，加甲醇至刻度。摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中没食了酸的含量，见表2。

3 讨论

3.1 头花蓼为泌淋胶囊的君药，没食子酸为头花蓼的主要活性成分之一［2～3］，为提高药品质量，确保疗效，我们对泌淋胶囊中没食子酸含量测定方法进行了研究。

3.2 没食子酸的含量测定方法目前主要是高效液相色谱法，根据文献［4～7］报道的主要方法，选择乙腈-0.4%磷酸溶液、甲醇-0.025mol/L磷酸溶液、甲醇-水-N，N二甲基甲酰胺-冰乙酸等系列流动相分别测定供试品溶液，没食子酸峰与其他相邻蜂分离均不理想，不适合于泌淋胶囊中没食子酸的测定。经多次实验研究，我们选择甲醇-0.4%磷酸溶液 (1：99)作为流动相，没食子酸与其它组分色谱峰分离良好。

3.3 泌淋胶囊由头花寥等4味中药组成，成分较复杂，根据没食子酸的理化性质［8］和文献［4～7］方法，曾用甲醇、50%甲醇、甲醇-25%盐酸 (4：1)等溶剂进行超声及回流提取没食子酸实验。结果表明，本文选择75%甲醇超声提取1小时的方法可行，所得供试品溶液其它杂质峰较少。同时对泌淋胶囊阴性样品溶液 (缺头花蓼)测定，结果表明其他成分不干扰测定。

通过实验研究，本文建立了泌淋胶囊中没食子酸含量的HPLC测定法，方法简便并具有良好的准确性和重现性，有利于药品的质量控制。

［1］ 国家药品标准 (试行) ［S］：WS-10516(ZD-0516)-2002.

［2］全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编 (下册) ［M］.北京人民出版社，1978，282～283.

［3］吴居，王德仁.石莽草化学成分的研究［J］.中草药，1985，16(4).

［4］HPLC测定不同产地的头花蓼中没食子酸的含量［J］.华西药学杂志，2007，22(2)：204～205.

［5］茅向军，许乾丽，熊慧林，等.高效液相色谱法测定热淋清胶囊中没食子酸的含量［J］.中国中药杂志，2002，27(8)：589～591.

［6］沙明，曹爱民，往冰，等.高效液相色谱法测定地胶囊榆中没食子酸的含量［J］.中国中药杂志，1999，24(2)：99～100.

［7］ 健民咽喉片.中国药典一部［S］.2005：565.

［8］国家医药局中草药情报中心站.植物药有效成分分册［M］.北京：人民卫生出版社，1986，479.