土茯苓配方颗粒对临床常见致病菌的抗菌研究*

殷网虎 袁武军 曹美琳

江苏省镇江市中医院（江苏镇江 212003）

土茯苓配方颗粒对临床常见致病菌的抗菌研究*

殷网虎 袁武军 曹美琳

江苏省镇江市中医院（江苏镇江 212003）

目的 观察土茯苓配方颗粒对临床主要致病菌的抗菌效果。方法 采用美国临床实验室标准化委员会（CLSI/NCCLS）推荐的液体稀释法检测MIC，琼脂稀释法检测MBC，K-B纸片法检测土茯苓维生素C联合抗菌作用。结果 土茯苓配方颗粒对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌、洋葱伯克霍尔德菌的MIC50分别为25、1.56、12.5、25、0.78、6.25mg/mL；土茯苓维生素C复合纸片的抑菌圈均明显大于土茯苓配方颗粒纸片。结论 土茯苓配方颗粒抗菌活性较强，联合使用维生素C可以增强其抗菌效能。

土茯苓配方颗粒 最小抑菌浓度 药物敏感试验 最小杀菌浓度

近年来，滥用抗菌药物造成细菌耐药率不断上升。面对这一严峻现状，发挥中药抗菌的优势已成为重要课题［1］。土茯苓是百合科植物光叶菝葜（Smixlax glabra Roxb.）的干燥根茎，具有除湿、解毒、通利关节等功效，临床主要用于治疗梅毒、淋浊、筋骨挛痛、脚气、疗疮、痈等［2］。土茯苓配方颗粒是一种采用低温萃取、真空浓缩制成的全组分颗粒剂。本文采用K-B法和液体稀释法分别观察了土茯苓配方颗粒及联合维生素C对临床常见菌株的抗菌作用。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 实验菌株共计211株，其中208株分离自我院及镇江市其他医疗单位临床标本，各菌株均经BDcrystal鉴定仪鉴定；3株标准菌株购自杭州天和微生物试剂有限公司。临床分离菌株中，铜绿假单胞菌33株，大肠埃希菌56株，金黄色葡萄球菌52株，粪肠球菌27株，肺炎克雷伯菌20株，洋葱伯克霍尔德菌20株。3株标准菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC29213。

1.2 试剂仪器 M-H（Muller-Hinton）药敏琼脂培养基和M-H肉汤干粉培养基，由杭州天和微生物试剂有限公司提供。土茯苓配方颗粒由江阴天江药业有限公司提供，批号1101231。维生素注射液 （维生素C）由江苏恒顺中奇药业有限公司提供，批号110502。BDcrystal自动微生物鉴定仪及鉴定卡由美国BD公司提供。

1.3 土茯苓药液准备 称取土茯苓配方颗粒50g，加入蒸馏水50mL，配成质量浓度为1g/mL的原药液，以2.5mol/L NaOH调节pH至7.2，10磅高压30min灭菌，-30℃冰箱保存，试验前以MH肉汤稀释。

1.4 土茯苓及土茯苓维生素C复合药敏纸片的制备 用打孔器将滤纸打成直径为6mm的纸片，高压灭菌。将15μL灭菌土茯苓原液加到纸片上，相当于15mg/片，35℃烘干备用；另取部分中药原液，加入维生素C注射液（0.25g/mL），使维生素C终质量浓度为22.2mg/mL，混匀后每纸片加15μL混合液，制成土茯苓配方颗粒维生素C复合纸片，35℃烘干备用［3］。

1.5 MIC、MBC及抑菌圈的测定 MIC测定采用CLSI/NCCLS推荐的液体稀释法检测，MBC采用琼脂稀释法［4］。在测出土茯苓的MIC后，将MIC下的液体培养物接种普通琼脂培养皿，35℃下培养24h，无细菌生长培养物的最低土茯苓质量浓度为其MBC。挑取被测菌于生理盐水中，制成0.5麦氏浓度的菌悬液，用无菌棉拭子将菌悬液均匀涂布在M-H琼脂平板表面，稍干后以无菌镊子分别将制备好的土茯苓纸片和土茯苓维生素C复合纸片紧贴于M-H琼脂表面，纸片间相距24mm，35℃孵育18～24h，测量抑菌圈直径，观察土茯苓维生素C的联合抗菌作用。每批药敏试验均用金黄色葡萄菌ATCC29213、铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922 3株标准菌株和抗生素庆大霉素在相同条件下作质控试验，以控制中药药敏测定过程。

2 结 果

2.1 土茯苓配方颗粒对不同细菌的体外抗菌活性 见表1。土茯苓配方颗粒对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌等临床分离菌株的MIC50为0.78～25mg/mL，显示土茯苓配方颗粒具有较好的抗菌作用。MIC50最低的是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌，MIC50分别为1.56mg/mL和 0.78mg/mL。

表1 土茯苓配方颗粒对208株细菌的MIC、MBC结果（mg/mL）

2.2 土茯苓配方颗粒与维生素C联合运用的抗菌效果 见表2。土茯苓配方颗粒维生素C复合纸片的抑菌圈要大于土茯苓配方颗粒，两者对各组菌种的抑菌圈直径比较，差异明显（P＜0.01）。

表2 土茯苓配方颗粒与维生素C联合运用的抑菌圈直径比较（mm，±s）

表2 土茯苓配方颗粒与维生素C联合运用的抑菌圈直径比较（mm，±s）

与土茯苓配方颗粒比较，*P＜0.01。

菌 种 n 土茯苓配方颗粒 土茯苓配方颗粒维生素C铜绿假单胞菌 33 12±8 15±9*大肠埃希菌 56 15±9 17±8*金黄色葡萄球菌 52 13±11 15±12*粪肠球菌 27 14±11 16±12*肺炎克雷伯菌 20 17±10 19±13*洋葱伯克霍尔德菌 20 16±9 20±11*

3 讨 论

抗生素诞生之初就出现细菌耐药现象［5］，目前在全球范围内蔓延。仅仅依靠开发新的抗生素来抑制细菌耐药性的产生显得较为困难。由于中药成分复杂、作用方式多样等特点，细菌较少对中药产生耐药，使得近年来中药抗菌的相关研究成为热点［6］。

土茯苓含有生物碱、落新妇苷、异黄杞苷、甾醇、皂苷、鞣质等成分［7］。土茯苓配方颗粒是土茯苓的全提取物，该种剂型避免了水煎剂和醇提取剂导致的部分成分的流失。从实验结果来看，土茯苓配方颗粒对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌、洋葱伯克霍尔德菌的MIC50分别为 25、1.56、12.5、25、0.78、6.25mg/mL，显示土茯苓配方颗粒具有较好的抗菌作用，尤其是对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌抗菌效果最为明显，MIC50仅为1.56mg/mL和0.78mg/mL。对于中药的抗菌机理，有作者认为，部分中药成分含有多羟基结构，能发生共振，化学键振动的波长与细菌长度范围相当时，即会发生共振，遭到共振的细菌或病毒被杀灭［8］。

相关文献提示，中药与维生素C联用，能明显增强中药的抗菌效果［3］。本研究通过土茯苓配方颗粒维生素C复合纸片的抗菌观察，表明维生素C确能增强土茯苓的抗菌效果，加入维生素C后的抑菌圈直径均较单味土茯苓增大，究其原因，推测土茯苓等中药中含有较多的黄酮、皂苷等还原性物质，维生素C具有较强的还原性，能提高中药中还原性物质的活性，从而提高其抗菌作用。

综上所述，土茯苓配方颗粒对临床常见致病菌具有较好的抑制作用，维生素C能明显增强土茯苓的抗菌作用，本研究为临床抗菌治疗提供了一个不同的思路和选择。

［1］李建志，刘旭红，杨丽珍，等.11种中草药抗菌作用实验研究［J］.中医药信息，2009，26（3）：82-83.

［2］蒋受军.菝葜属植物菝葜和土茯苓现代研究概况［J］.内科，2010，5（2）：191-195.

［3］蔡璇，彭松，施金玲，等.五种中药对139株微生物体外抗菌活性的实验研究［J］.药学服务与研究，2005，5（3）：267-290.

［4］NCCLS ／CLIS.Perfromance Standards for Antimicrobial Susceptibility testing fifteenth in formational supplement M 100-S15，25（l）：44-52.

［5］Walsh C.Molecular mechanisms that confer antibacterial drug resistance ［J］.Nature，2000，4J06（6797）：775-781.

［6］刘芬，姜成.对产ESBLs大肠杆菌有抑制作用的中草药初步筛选［J］.福建中医学院学报，2009，19（2）：33-34.

［7］李强.土茯苓现代研究概述［J］.中国药业，2008，17（14）：76-77.

［8］黄为华.化学键振动共振杀菌抗病毒机理 （VI）［J］.中国中医药科技，2010，17（2）：150-152.

Experimental Study of Smixlax Glabra Particles on Common Clinical Pathogent

YIN Wang-hu,YUAN Wu-jun,CAO Mei-lin
Zhenjiang Hospital of Traditional Chinese Medicine （Zhenjiang 212003， Jiangsu）

Objective:To observate the antibacterial activity of Smixlax glabra Particles on common clinical pathogent.Methods:The antibacterial activity about combination of Smixlax glabra Particles and vitamin C was assayed by K-B method.The minimum inhibitory and the minimum bactericidal concentrations respectively were tested using the dilution method.Results:The MIC50of Smixlax glabra Particles on P.aeruginosa,E.coli,S.aureus,Enterococcus faecalis,Klebsiella Pneumoniae subsp.pneumoniae and Burkholderia cepacia were respectively 25mg/mL,1.56mg/mL,12.5mg/mL,25mg/mL,0.78mg/mL,6.25mg/mL.The acteriostatic circle about combination of Smixlax glabra Particles and vitamin C were significantly greater than that of the Smixlax glabra Particle.Conclusion:Smixlax glabra Particle has strong antibacterial activity.It plus vitamin C can enhance antibacterial efficacy of Smixlax glabra Particle.

Smixlax glabra Particle;Minimal inhibitory concentration;Drug sensitive test;Minimal bactericidal concentration

R285.5

A

1004-745X（2011）12-1957-02

江苏省镇江市科技局社会发展项目（SH2006049）

2011-08-01）