三聚氰胺在肉鸡组织中的残留和消除规律研究

张小燕 ，陆俊贤 ，唐梦君 ，施祖灏 ，葛庆联 ，蒲俊华 ，高玉时

（1.农业部家禽品质监督检验测试中心，江苏扬州 225003；2.中国农业科学院家禽科学研究所，江苏扬州 225003）

三鹿奶粉事件后，我国各乳制品企业生产的奶粉、液态奶、鸡蛋中检出三聚氰胺，以及在以奶粉和鸡蛋为原料的食品中检测出了三聚氰胺，引起人们对三聚氰胺的恐慌和广泛的关注，使这个化合物成为食品公共安全的焦点。

三聚氰胺作为一个化工原料，用途广泛，可用于塑料、涂料、粘合剂和食品包装材料等生产中[1-2]。但三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加到饲料和食品当中。以往多数研究表明，三聚氰胺毒性轻微[3-5]，但动物食入的三聚氰胺在畜产品中存在残留的可能性[6-8]，也就是说三聚氰胺被畜禽食入后可能会转移到肉、蛋、奶中。但其对动物体的毒性机制及其在动物产品中的残留率受到多种因素的影响，如饲料中三聚氰胺含量、动物种类、日粮类型、环境、动物的生理状况等因素的影响。

目前，国内外对三聚氰胺的研究主要集中在毒性和检测方法方面，关于三聚氰胺在家禽组织内的残留和消除规律研究较少，本研究以黄羽肉鸡为试验动物，通过在日粮中添加不同剂量的三聚氰胺探讨其在不同组织内的残留和消除规律，为肉鸡的安全生产提供试验依据，对保障禽产品安全具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试验动物与分组

试验选用1日龄黄羽肉鸡400只，随机分成4组，每组5个重复，每个重复20只鸡，公母各半，进行为期42 d的生长试验。试验日粮以玉米-豆粕，参照NRC（1994）标准和地方鸡饲粮配制。组1饲喂基础日粮，组2、3、4分别在基础日粮中添加0.25%、0.5%、3.0%的三聚氰胺。基础日粮配方见表1。

表1 试验鸡的日粮组成

1.2 饲养管理

试验在国家生产性能测定站进行，试验鸡采用笼养，自由采食、饮水，日常管理与免疫程序按常规进行，试验期为42 d。

1.3 样品采集与处理

残留试验的第7、14、21、28、35、42天，所有处理组每个重复随机选择2只鸡宰杀，取左侧胸肌、肝脏、肾脏，分别将各组织用匀浆机均质后放入玻璃称量瓶-20 ℃保存，待测各组织中的三聚氰胺含量。

试验第43天，所有处理组改喂基础日粮，在改喂基础日粮的第1、2、3、4和5天，对添加组分别采集胸肌肉、肝脏和肾脏，处理方法同上。

1.4 组织中三聚氰胺的检测方法

1.4.1 主要仪器 高效液相色谱系统（Alliance e2695），配置自动进样装置和紫外检测器，美国Waters公司；全自动固相萃取仪（GX-274 ASPEC），吉尔森公司；高速冷冻离心机（HITACHI CR22G），日立公司；干热式氮吹仪（N-EVAP），美国Organomation公司 ；超纯水机（Milli-Q Academic），美国 Millipore公司；超声波清洗机，宁波新芝；PCX阳离子交换固相萃取柱，Agela公司。

1.4.2 药品与试剂 三聚氰胺标准品：99.8%，中国兽医药品监察所；甲醇、乙腈均为色谱纯，美国Merck公司；三氯乙酸、乙酸铅、磷酸、磷酸二氢钾等为国产分析纯。

1.4.3 样品处理 称取（5.0±0.05）g匀浆后的样品，置离心管中，依次加入1%的三氯乙酸溶液18 mL和乙酸铅溶液2 mL，10 000 r/min均质1 min，超声提取20 min，12 000 r/min 离心5 min。取上清液待用。PCX柱活化：分别用3 mL甲醇，3 mL水活化PCX柱， 准确移取5 mL离心后的上清液分次上柱。再用3 mL水和3 mL甲醇洗涤PCX柱，用5%氨化甲醇溶液3 mL洗脱，收集洗脱液。洗脱液于氮吹仪上50 ℃吹干，加甲醇1 mL，振荡溶解，摇匀，过0.45 μm滤膜，高效液相色谱仪测定。

1.4.4 色谱条件 色谱柱：Phenomenex SCX柱，250 mm×4.6 mm ，5 μm ；流速 1.5 mL/min ；柱温为室温；流动相为乙腈：磷酸盐缓冲液（35/65，V/V）；进样量 20 μL。

1.5 统计分析

采用SPSS软件（16 .0）进行单因素方差分析，多重比较采用One-Way ANOVA法。计算结果均以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 三聚氰胺在黄羽肉鸡不同组织中的残留规律

图1A列出了各处理组胸肌中三聚氰胺含量的变化趋势。由图1A可以看出，0.25%和0.5%添加组在饲喂前2周胸肌中三聚氰胺残留量缓慢上升，后趋于稳定，饲喂第6周残留量达到最高；3%添加组饲喂前2周胸肌中三聚氰胺残留持续上升，后趋于稳定并有一定的波动，第5周含量达到峰值。

图1B列出了各处理组鸡肝脏中三聚氰胺含量的变化趋势。由图1B可看出，0.25%和0.5%添加组肝脏中三聚氰胺残留量分别于饲喂前2周持续增加，随后有一定波动，直到残留试验结束含量达最高；3%添加组肝脏中三聚氰胺含量在前2周持续增加，在第2周达峰值，后有所波动。

图1C列出了各处理组鸡肾脏中三聚氰胺含量的变化趋势。由图1C可看出，0.25%添加 组肾脏中三聚氰胺含量于前1、2周持续增加，随后保持稳定至残留试验结束；0.5%和3%添加组肾脏中三聚氰胺含量于前3周缓慢增加，后有下降并趋于稳定，第3周达峰值。

表2给出了不同剂量三聚氰胺日粮饲喂42 d后黄羽肉鸡各组织中三聚氰胺平均含量，由表2可知，各处理组鸡胸肌、肝脏、肾脏中三聚氰胺含量均显著高于对照组，各处理组之间三聚氰胺含量差异显著；各组织之间肾脏中三聚氰胺含量较高，且显著高于肝脏及胸肌中含量。

表2 日粮三聚氰胺不同剂量添加水平对黄羽肉鸡不同组织中三聚氰胺残留量的影响

2.2 三聚氰胺在黄羽肉鸡不同组织中的消除规律

饲喂基础日粮后胸肌中三聚氰胺含量随时间变化趋势见图2A，从图中可以看出，各处理组鸡胸肌中三聚氰胺含量逐渐降低，并于第3、4天达到基本稳定，在较低的范围内波动，但在胸肌组织中三聚氰胺并没有完全消除。

饲喂基础日粮后肝脏中三聚氰胺含量随时间变化趋势见图2B，从图中可以看出，0.25%和0.5%添加组鸡肝脏中三聚氰胺含量逐渐降低，至消除试验结束，3%添加组鸡肝脏中三聚氰胺含量第1天降低缓慢，后逐渐降低至消除试验结束。

饲喂基础日粮后肾脏中三聚氰胺含量随时间变化趋势见图2C，从图中可以看出各处理组鸡肾脏中三聚氰胺含量逐渐降低，并于第3、4天达到基本稳定，在较低的范围内波动，但在肾脏组织中三聚氰胺并没有完全消除。

3 讨论

3.1 三聚氰胺在肉鸡组织中的残留规律

武书庚等[9]研究发现，动物采食含三聚氰胺的饲料后，三聚氰胺会在胸肌中沉积，不同剂量的三聚氰胺在胸肌中沉积达到稳定需要的时间不同，且呈现剂量效应。三聚氰胺在日粮中的含量越高，胸肌中三聚氰胺的含量越大，沉积达到稳定所需时间越短。国内有研究发现，三聚氰胺在猪体内残留量在饲喂5 d后达到最大值，而后主要以原形药物形式从尿液中排出，而其在血液中的浓度在达到峰值以后呈现逐渐下降的趋势[10]。燕磊等人报道，当饲粮中三聚氰胺含量≥100 mg/kg，肉鸭组织中三聚氰胺残留量随日粮中三聚氰胺含量的升高而线性升高[11]。本试验研究发现，饲粮中添加三聚氰胺可在黄羽肉鸡体内胸肌、肝脏、肾脏等组织中检测到残留，表明进入体内的三聚氰胺分布广泛，且各组织中三聚氰胺残留量均随饲粮中三聚氰胺浓度升高而升高，各处理组之间的残留量差异显著；且3%处理组三聚氰胺残留量上升速率较其它两组更快，达到峰值的时间较短，这可能是因为动物采食的日粮中三聚氰胺含量越高，三聚氰胺通过动物的吸收进入血液最终被转移到组织中的含量也相应增加，并且三聚氰胺含量越大，在组织中的运输速度越快，因此残留达到稳定所需时间也就越短。

本试验发现从添加同一浓度三聚氰胺处理组来看，不同组织中三聚氰胺的残留浓度不一致，肾脏的残留最高，其次为肝脏和胸肌。可能原因是三聚氰胺在机体内的代谢属于不活泼代谢，泌尿系统是机体代谢和排出三聚氰胺的主要途径，肾脏是三聚氰胺排泄的主要场所，三聚氰胺易在肾脏蓄积，与燕磊，L，M.B.等报道一致[11-12]。MAST等[8]试验发现大鼠单次口服三聚氰胺后组织残留最高部位为膀胱，其次为输尿管、肝脏、肾脏，其中肝脏与肾脏浓度差别不大，分别为1.8和1.3μg/kg。余晓华在饲料中添加1 000 mg/kg三聚氰胺饲喂肉鸡29天后发现，肾脏、肝脏和肌肉残留浓度分别为3.05，2.54，2.46 mg/kg[13]。本试验0.25%处理组第六周胸肌、肝脏和肾脏中三聚氰胺残留量分别为27.54、29.25、31.42 mg/kg，其残留量较高，原因可能是饲粮中三聚氰胺添加剂量比较高，而其它组织如血液等中的三聚氰胺残留量有待进一步研究。

3.2 三聚氰胺在肉鸡组织中的消除规律

有研究发现，停药后三聚氰胺在猪体内可食组织中的残留量呈现下降趋势，并在低浓度饲喂情况下，在停药后基本可以清除完全，残留量极少[10]。另外三聚氰在鸡体内也是富集快代谢快，鸡体内胸肌、肝脏、肾脏等组织中三聚氰胺在停药5 d后代谢较快[13]。在肉鸭和肉鸡上的研究分别发现，饲喂添加不同浓度的三聚氰胺日粮42 d后，转为饲喂不含三聚氰胺的饲料7 d，胸肌、肝脏和肾脏均未检出三聚氰胺[11-12]。本试验研究发现，随着消除时间的增加，各组织中三聚氰胺含量均逐渐降低；各处理组在停喂含三聚氰胺饲料5 d后各组织中三聚氰胺含量趋于稳定，但还没有完全消除；而从图2中可看出，3%处理组其三聚氰胺消除速率较0.25%和0.5%处理组快。

三聚氰胺在肝脏内消除较缓慢，且波动较大，原因可能是肝脏不能对三聚氰胺进行代谢[6]，各组织中缓慢释放后造成一定时间内血液中仍有三聚氰胺存在，使得肝脏中三聚氰胺残留消除速率较慢。随消除时间的增加，肾脏中三聚氰胺残留量逐渐降低，与肝脏和胸肌相比，停喂5 d后肾脏中三聚氰胺含量较高，进一步说明肾脏是三聚氰胺最主要的排泄场所。

总之，三聚氰胺在体内消除是个缓慢过程，当改喂基础饲料后，由于三聚氰胺在动物体内仍有残留，三聚氰胺会通过组织释放、血浆运输、肾脏排泄、动物产品等途径被缓慢排出体外。本试验只研究了停喂5 d内三种组织的消除规律，其它组织及各组织中三聚氰胺完全消除所需要的时间还需进一步研究。

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