RP-HPLC法测定人血浆中齐拉西酮的浓度Δ

黄洪勇，吕路线，王金宝，钱东丽，师天元（.新乡医学院第二附属医院，新乡市45300；.河南省生物精神病学重点实验室，新乡市 45300）

齐拉西酮（Ziprasidone，ZIP）是一种新型的非典型广谱抗精神病药，和其他非典型抗精神病药相比，ZIP与5-羟色胺（5-HT）2A的亲和力较强，对H1、α1受体有适度的亲和力，与D1、α2受体的亲和力较弱，几乎不与M1受体结合，临床适用于治疗急性及慢性精神分裂症以及其他各种精神疾病所引起的明显阳性症状、明显的阴性症状和改善患者认知功能[1]。同时，其还能减轻精神分裂症伴随的情感障碍。ZIP不增加患者的体重和血清泌乳素水平，无代谢异常的危险，锥体外系反应发生率低，性功能障碍不良反应较低，QTc间期延长不明显[2]。国外曾以监测患者体内齐拉西酮的血药浓度来指导临床用药、预警不良反应和规避风险。本文建立以反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定人体血浆中齐拉西酮浓度的方法，该方法快速、简便、灵敏度高、重现性好，适用于齐拉西酮的临床研究和不良反应监测。

1 材料

1.1 仪器

1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；XT-120A电子分析天平（瑞士普利赛斯公司）；ULTRE FREEZE-3410超低温冰箱（丹麦HETO公司）；XK96-A快速涡旋混合器（姜堰市新康医疗器械有限公司）；LXJ-Ⅱ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂）。

1.2 试药

齐拉西酮对照品（徐州恩华药业集团有限责任公司，批号：20080101，含量：98.96%）；内标：地昔帕明（Desipramine，美国Sigma公司，批号：065K1340，含量：98.00%）；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：美国Diamonsil®C18反相柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30℃；流动相：乙腈-甲醇-缓冲液（5 mL三乙胺加入1 000 mL水中，冰醋酸调节pH值3.2）＝28∶12∶60；流速：1.3 mL·min－1；检测波长：254 nm；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液：取齐拉西酮对照品约10 mg，准确称定，加甲醇溶解，转移至100 mL容量瓶中，定容，即得。于冰箱4℃保存备用，临用前用甲醇稀释成所需浓度。

2.2.2 内标溶液：依法制备出10 μg·mL－1地昔帕明甲醇溶液为内标溶液。

2.3 血浆样品处理

取400 μL含药血浆，加至10 mL具塞锥形玻璃离心管中，加入内标溶液100 μL，涡旋振荡1 min，加入二氯甲烷5 mL，涡旋振荡提取2 min，4 000 r·min－1离心10 min，取有机层置于一干燥具塞尖底试管中，离心管中再加入二氯甲烷5 mL，同法操作。振荡混合2次提取液，40℃水浴氮气吹干，残渣用100 μL流动相复溶后，4 000 r·min－1离心10 min，取20 μL进样。

2.4 专属性考察

在“2.1”项色谱条件下，血浆内源性物质、代谢物及其他杂质不干扰主峰的分离和测定，齐拉西酮和内标保留时间分别为6.45 min和11.15 min。齐拉西酮的有效板数为10 000，分离度19.6，拖尾因子1.02。高效液相色谱图见图1。

2.5 线性关系考察及灵敏度试验

取空白血浆300 μL共8份，分别加入齐拉西酮系列对照品溶液100μL，使血浆中药物浓度分别相当于0.022、0.044、0.088、0.176、0.352、0.704、1.408、2.816 μg·mL－1，振荡混匀，然后按“2.3”项下方法处理，记录色谱。以齐拉西酮血浆浓度（c）对齐拉西酮峰面积/内标峰面积的比值（F）进行线性回归，得标准曲线方程为c＝2.760 3F－0.073 8（r＝0.999 2，n＝8），结果表明，齐拉西酮血药浓度在0.022～2.816 μg·mL－1范围内线性关系良好。当信噪比（S/N）≥10时，最低定量限为0.022 μg·mL－1。

图1 高效液相色谱图A.空白血浆；B.齐拉西酮对照品溶液+内标溶液；C.血浆样品+齐拉西酮对照品溶液+内标溶液；D.患者血样+内标溶液；1.齐拉西酮；2.地昔帕明Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.ziprasidone reference standard+internal standard；C.plasma sample+ziprasidone reference standard+internal standard；D.plasma sample of patient+internal standard；1.ziprasidone；2.desipramine

2.6 回收率及精密度试验

取空白血浆3份，分别按“2.5”项下方法制备浓度为0.044、0.352、1.408 μg·mL－1的齐拉西酮血浆对照品溶液，然后按“2.3”项下方法处理。每种浓度日内平行测定5次；3种浓度隔日测定1次，一共5次。分别计算日内、日间精密度，并根据同一天内低、中、高3个浓度血浆对照品结果计算相对回收率；另配0.044、0.352、1.408 μg·mL－1对照品溶液，以此为标准，计算齐拉西酮的绝对回收率，结果见表1。

表1 回收率及精密度试验结果（n＝5）Tab 1Results of recovery and precision tests（n＝5）

2.7 冻融稳定性试验

分别按“2.5”项下方法制备低、中、高浓度（0.044、0.352、1.408 μg·mL－1）的齐拉西酮血浆质控样品若干份，分别在室温放置0、2、4、6、12 h，反复冻融0、1、2、3、4次，于－20 ℃冰箱保存0、5、10、20 d后，按“2.3”项下方法处理，进行样品的色谱测定。结果，齐拉西酮测定含量的RSD≤8.25%，表明血浆中齐拉西酮在室温下12 h、冻融4次、－20℃冷冻20 d条件下稳定。

2.8 患者血样含量测定

取患者上肢静脉血5 mL，离心分取血浆，按“2.5”项下平行处理3份，避光低温保存至测定。RP-HPLC法测定血浆中齐拉西酮的含量，结果重现性比较好，详见表2。

表2 患者血样的测定结果（n＝3）Tab 2Results of the determination of blood sample（n＝3）

3 讨论

精神分裂症患者在药物治疗上大多联用了一些镇静剂如地西泮，因此，这些物质不易作为内标的首选[3]。本文建立的方法选用了患者不常联用的地昔帕明作为内标，避免了患者血样本身对分析过程的影响，扩大了方法现实应用中的患者范围。

有关齐拉西酮体内分析方法主要有高效液相色谱法、液-质联用法、荧光法等，然而现有的高效液相色谱法保留时间不太合适[4，5]，基线漂移[6]；液-质联用法仪器昂贵、色谱柱寿命有限[7]；荧光法需要专门设备[8]。笔者建立的RP-HPLC法既可显著改善峰形，又可使保留时间适中，减少工作量，具有样品前处理简单、分析仪器普及率高、简便、快速、准确、灵敏度高等优点，适用于齐拉西酮的临床研究和不良反应监测。

（本研究在河南省生物精神病学重点实验室（新乡医学院）完成，特此致谢！）

[1]Swainston HT，Scott LJ.Ziprasidone：a review of its use in schizophrenia and schizoaffective disorder[J].CNS Drugs，2006，20（12）：1 027.

[2]Stroup TS，Lieberman JA，Swartz MS，et al.Effectiveness of olanzapine，quetiapine，risperidone，and ziprasidone in patients with chronic schizophrenia following discontinuation of aprevious atypical antipsychotic[J].Am J Psychiatry，2006，163（7）：611.

[3]何海霞，周远大，唐 竟，等.高效液相色谱法测定人血浆中齐拉西酮浓度[J].药物分析杂志，2006，26（6）：752.

[4]Sudha RB，Venkata RP.Estimation of ziprasidone hydrochloride monohydrate in bulk and capsules by reverse phase HPLC[J].E-Journal of Chemistry，2006，3（12）：169.

[5]李华芳，沈一峰，葛庆华，等.盐酸齐拉西酮在中国健康志愿者中的药代动力学研究[J].上海精神医学，2006，18（4）：222.

[6]Singh A，Rao BM，Deshpande GR，et al.A Rapid stability-indicating LC method for ziprasidone hydrochloride[J].Chromatographia，2007，65（2）：191.

[7]Dirbashi OY，Enein HY，Odaib A，et al.Rapid liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for quantification of ziprasidone in human plasma[J].Biomedical Chromatography，2006，20（4）：365.

[8]Raymond FS，Mira F，Christoph UC，et al.Determination of plasma ziprasidone using liquid chromatography with fluorescence detection[J].Journal of Chromatography B，2004，799（2）：201.