平安丸的质量标准研究

张应辉，蒋 帆，吴 雪（解放军第181医院药剂科，桂林市 541002）

平安丸[1]是由木香、丁香[2]、沉香、香附、青皮、茯苓等19味药组成的复方中药制剂。用于治疗肝气犯胃引起的胃痛、胁痛、吞酸倒饱、呃逆、脘腹胀满等证。方中以木香行气调中、和胃止痛，香附疏肝理气、解郁止痛，共为君药；陈皮理气调中，枳实、青皮、槟榔破气消积，沉香行气止痛、降逆和胃，山楂、麦芽、六神曲消食和中，豆蔻、砂仁化湿行气、温中止呕，共为臣药；延胡索活血以行气，肉豆蔻、丁香、母丁香温中降逆，茯苓、白术、草果仁健脾燥湿，共为佐药。综合全方，具有疏肝理气、和胃止痛之功。为了更全面地控制该制剂的质量，笔者对青皮、陈皮、枳实、肉豆蔻、木香、延胡索进行了薄层色谱（TLC）定性鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法对方中橙皮苷[3，4]进行了含量测定及相应方法学的考察。

1 仪器与试药

2965、2996HPLC系统（美国Waters公司）。

平安丸样品（北京同仁堂（集团）有限责任公司，批号：6013876、6013877、6013878）；橙皮苷、木香烃内酯、去氢木香内酯对照品和肉豆蔻、延胡索对照药材（中国药品生物制品检定所，批号分别为 110721-200512、111524-200503、111525-200404、120926-200505、110736-200422）；硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；甲醇（色谱纯，天津四友生物医学技术开发公司）；水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 青皮、陈皮、枳实的TLC鉴别 取本品10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研匀，加甲醇50 mL，超声处理30 min（功率：250 W，频率：40 kHz），过滤，滤液蒸干，残渣用乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺枳实、缺陈皮、缺青皮及3种药均缺的阴性样品，同法分别制成缺枳实、缺陈皮、缺青皮及3种药均缺的阴性对照溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照TLC法[3]试验，分别吸取以上各溶液5µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）为展开剂，展至约3 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，展至约8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照无干扰。青皮、陈皮、枳实的TLC见图1。

2.1.2 肉豆蔻的TLC鉴别取本品10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研匀，加石油醚（30～60℃）50 mL，浸泡过夜，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺肉豆蔻的阴性样品，

图1 青皮、陈皮、枳实的TLC1.缺陈皮、青皮、枳实阴性对照；2.缺枳实阴性对照；3.缺陈皮阴性对照；4.缺青皮阴性对照；5～7.供试品；8.橙皮苷对照品Fig1 TLC of Citrus reticulata，C.reticulata，Aurantii Fructus Immature1.negative control without C.reticulata，C.reticulata，Aurantii Fructus Immature；2.negative control without Aurantii Fructus Immature；3.negative control without C.reticulata；4.negative control without C.reticulata；5～7.test samples；8.hesperidin control

同法制成阴性对照溶液；另取肉豆蔻对照药材5 g，同法制成对照药材溶液。照TLC法[3]试验，吸取上述溶液各5µL，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-甲苯-甲酸（10∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，于105℃加热至显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。肉豆蔻的TLC见图2。

2.1.3 木香的TLC鉴别 取本品10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研匀，加乙醚50 mL，浸泡过夜，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺木香的阴性样品，同法制成阴性对照溶液；另取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品，加三氯甲烷分别制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法[3]试验，吸取以上溶液各5µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，于105℃加热至显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。木香的TLC见图3。

2.1.4 延胡索的TLC鉴别

取本品20 g，剪碎，加硅藻土10 g，研匀，加二氯甲烷50 mL、氨水1 mL调至碱性，超声处理30 min（功率：250 W，频率：40 kHz），过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min（功率：250 W，频率：40 kHz），滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液；按处方中药味比例，自配不含延胡索的群药，照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照TLC法[3]试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-丙酮-乙酸乙酯（84∶15∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3 min后取出，挥尽板上吸附的余碘，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。延胡索的TLC见图4。

2.2 橙皮苷的含量测定

图2 肉豆蔻的TLC1.缺肉豆蔻阴性对照；2～4.供试品；5.肉豆蔻对照药材Fig 2 TLC of Myristica fragrans1.negative control without M.fragrans；2～4.test samples；5.Myristicae Semen control

图3 木香的TLC1.缺木香阴性对照；2～4.供试品；5.去氢木香内酯对照品；6.木香烃内酯对照品Fig 3 TLC of Aucklandia lappa1.negative control without A.lappa；2～4.test samples；5.dehydrocostunolide control；6.costunolide control

2.2.1 色谱条件色谱柱：SB-C18（150 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（33∶67）；检测波长：284 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1。理论板数按橙皮苷色谱峰计算应不少于2 000。在此条件下，样品中橙皮苷与其他组分均能达到基线分离。色谱见图5。

2.2.2 溶液的制备 （1）对照品溶液：精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含橙皮苷0.10 mg的溶液，即得。（2）供试品溶液：取本品0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min（功率：250 W，频率：50 kHz），放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，即得。（3）阴性对照溶液：按处方中药味比例，配成不含青皮、陈皮和枳实的样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

图4 延胡索的TLC1.缺延胡索阴性对照；2～4.供试品；5.延胡索对照药材Fig4 TLC of Corydalis yanhusuo1.negative control without C.yanhusuo；2～4.test samples；5.Corydalis Rhizoma control

图5 高效液相色谱图A.缺陈皮、青皮和枳实阴性对照；B.橙皮苷对照品；C.供试品Fig5 HPLC chromatogramsA.negative control without C.reticulata，C.reticulata，Aurantii Fructus Immature；B.hesperidin control；C.test samples

2.2.3 线性关系考察 精密吸取0.10 mg·mL-1的橙皮苷对照品溶液0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密吸取20 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值（y）为纵坐标，橙皮苷进样量（x）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为y＝2 180 640.93x+14 982.03（r＝0.999 9，n＝6）。结果表明，橙皮苷进样量在0.1～1.1 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.4 精密度试验 精密吸取同一批平安丸（批号：6013876）供试品溶液，按上述色谱条件进样6 μL，测定峰面积，重复6次。结果，RSD＝0.16%（n＝6），表明方法精密度良好。

2.2.5 重复性试验 取同一批样品（批号：6013876）适量，共6份，按供试品溶液的制备方法处理后，照上述色谱条件测定。结果，RSD＝0.96%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.2.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批（批号：6013876）样品6份，每份0.25 g，分别精密加入0.322 5 mg·mL-1的橙皮苷对照品溶液5.0 mL，按供试品溶液制备方法处理，照上述色谱条件测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.2.7 样品含量测定 分别取3批样品，照上述色谱条件进样测定。结果，3批样品（批号：6013876、6013877、6013878）的橙皮苷含量分别为7.025、6.668、6.673 mg·g-1。由此结果可规定，本品含橙皮以橙皮苷（C28H34O15）计，每丸不少于24.0 mg。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery tests（n＝6）

3 讨论

处方中青皮、陈皮、枳实三者化学成分近似[5]，有5种相同的黄酮类成分和4种相同的胺类成分，其中均以橙皮苷含量最高，故本研究中3种中药的定性鉴别和含量测定均以橙皮苷为标准。

本标准采用TLC法对方中青皮、陈皮、枳实、肉豆蔻、木香、延胡索进行了定性鉴别，可鉴别出青皮、陈皮、枳实、肉豆蔻、木香、延胡索的特征斑点且阴性对照无干扰，鉴别条件专属性及重现性良好，能够有效控制产品质量。

本试验测定橙皮苷含量时采用HPLC法，分离效能高，分析速度快，操作稳定性好，回收率高，重复性好，处方中其他成分对测定没有干扰，可有效控制该制剂的内在质量。

笔者进行含量测定时，曾试用甲醇-水（40∶60）、甲醇-0.1%磷酸溶液（35∶65）、甲醇-0.1%磷酸溶液（33∶67）为流动相。结果，以甲醇-0.1%磷酸溶液（33∶67）分离最好，色谱峰能达到基线分离。取橙皮苷对照品，在200～400 nm波长范围内扫描，结果在284 nm波长处有最大吸收，故选择284 nm作为检测波长。本制剂为丸剂，参考《中国药典》，根据橙皮苷的性质，选择70%乙醇、95%乙醇、甲醇作为提取溶剂，采用超声提取和回流提取2种方法比较，同时进行了超声时间和溶剂量的考察。结果表明，用甲醇超声提取方法提取30 min得到的橙皮苷含量明显高于其他方法；同时，0.5 g样品使用甲醇50 mL已足以完全提取橙皮苷。

[1]陈可骥主编.慈禧光绪医方选议[M].北京：中华书局，1981：141.

[2]张军锋，张树军.丁香属植物的化学成分和药理作用的研究进展[J].海南大学学报（自然科学版），2007，25（2）：200.

[3]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录36、附录34.

[4]林 清，吴雪梅，马晓鹂，等.HPLC法测定健脾颗粒中橙皮苷的含量[J].中国药房，2009，20（9）：698.

[5]陈 红，刘传玉，李承晏.青皮的化学及药理作用研究进展[J].中草药，2001，32（11）：1 050.