芹菜根提取物对D-氨基半乳糖所致急性肝损伤的保护作用研究Δ

陈妍，刘军，林伊梅，马亮英，乌莉娅·沙依提（.新疆医科大学第二附属医院药剂科，乌鲁木齐市830063；.新疆医科大学中医学院中药系，乌鲁木齐市 830054）

新疆地产维药芹菜根系伞形科植物欧芹Petroselinum crispum（Mill）Hill的干燥根，主要分布在和田、阿克苏一带。与其他芹菜相比，其根部粗壮，色深，有着独特的地域特色，是维吾尔医药中常用的植物药。

芹菜根作为一种常用的维药以饮片形式在临床广泛用于高血压、高血脂、病毒性肝炎、关节炎等的治疗，但对其活性成分和药理学研究却未见系统报道。目前，其临床应用尚缺乏科学的实验依据。本研究采用D-氨基半乳糖（D-GaIN）复制大鼠急性肝损伤模型，观察维药芹菜根提取物对急性肝损伤的保护作用，为维医临床肝病用药及进一步研发该药提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

75型紫外分光光度计（上海精密仪器仪表有限公司）。

1.2 试药

芹菜根原材料（购于新疆维吾尔民族医院，经笔者鉴定为真品）；联苯双酯滴丸（浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：33020232）；D-GaIN（重庆医科大学生物工程研究室，批号：070312），临用时将其配成10%的生理盐水溶液，用0.01 mol·L-1NaOH调pH值至7.0；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）测试盒（南京建成生物工程研究所提供）。

1.3 动物

普通级Wister大鼠50只，♀♂兼用，体重（200±20）g，由新疆医科大学动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（新）2003-0001）。

2 方法

2.1 药物的提取

取芹菜根原药材粗粉适量，加入6倍量70%的乙醇，回流提取2次，每次1 h，过滤，滤液浓缩、干燥，即得芹菜根提取物。其得率为10.14%，1 g提取物相当于9.86 g生药。

2.2 分组与给药[1]

将50只大鼠随机分为正常对照（等容生理盐水）、模型对照（等容生理盐水）、联苯双酯（0.2 mg·kg-1）和芹菜根提取物高、低剂量（3、1.5 g·kg-1）组。ig给药，连续7 d。末次给药1 h后，除正常对照组外，各组均按0.5 mg·kg-1ip D-GaIN溶液。

2.3 指标的测定

大鼠禁食不禁水20 h后，腹主动脉取血，分取血清，测定天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）。取肝右叶同一部位肝组织，用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。

2.4 统计学方法

实验数据均以±s表示。假设检验水准定为0.05，用统计学软件对计量资料进行正态性、方差齐性检验，5组间各检测指标的比较用单因素方差分析，两两比较用q检验法。所有数据均用SPASS11.0统计软件包处理。

3 结果

3.1 芹菜根提取物对D-GaIN诱导的急性肝损伤模型大鼠血清ALT和AST活性的影响

大鼠注射D-GaIN溶液后，血清ALT、AST活性显著增强（P＜0.01），表明D-GaIN引起了大鼠急性肝损伤，复制模型成功。与模型对照组比较，高剂量芹菜根提取物能显著降低模型大鼠ALT与AST活性（P＜0.01），低剂量芹菜提取物能降低模型大鼠AST（P＜0.05），但对ALT的影响无显著意义，提示芹菜根提取物高剂量组对大鼠急性肝损伤有明显的保护作用。芹菜根提取物对D-GaIN所致大鼠急性肝损伤血清ALT、AST活性的影响见表1。

3.2 芹菜根提取物对D-GaIN诱导的急性肝损伤模型大鼠肝组织MDA含量与SOD活性的影响

与正常对照组比较，模型对照组大鼠MDA含量显著升高，SOD活性显著下降（P＜0.01），表明复制模型成功。芹菜根高、低剂量组与模型对照组比较MDA含量显著降低，SOD活性显著升高（P＜0.01）。提示高、低剂量芹菜根提取物对D-GaIN诱导的大鼠急性肝损伤肝组织的MDA含量升高和SOD活性减弱有抑制作用。芹菜根提取物对D-GaIN所致大鼠急性肝损伤肝组织MDA含量与SOD活性的影响见表2。

表1 芹菜根提取物对D-GaIN所致大鼠急性肝损伤血清ALT、AST活性的影响（±s）Tab1 Effects of P.crispum root on the activities of ALT and AST in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

表1 芹菜根提取物对D-GaIN所致大鼠急性肝损伤血清ALT、AST活性的影响（±s）Tab1 Effects of P.crispum root on the activities of ALT and AST in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

与正常对照组比较：＊P＜0.01；与模型对照组比较：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model control group：#P＜0.05，##P＜0.01

组别正常对照组模型对照组联苯双酯组芹菜根提取物高剂量组芹菜根提取物低剂量组ALT/U·L-1 35.2±2.82 4 028.3±1 949.17＊941.6±1 131.33##1 205±456.84##5 106.8±3 297.11 n 10 10 10 10 10 AST/U·L-1 104.8±12.49 7 435.7±3 447.13＊936.2±930.28##1 178.5±592.44##5 149.5±2 736.22#

表2 芹菜根提取物对D-GaIN所致的急性肝损伤肝组织MDA含量与SOD活性的影响（±s）Tab2 Effects of P.crispum root on MDA content and SOD activity in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

表2 芹菜根提取物对D-GaIN所致的急性肝损伤肝组织MDA含量与SOD活性的影响（±s）Tab2 Effects of P.crispum root on MDA content and SOD activity in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

与正常对照组比较：＊P＜0.01；与模型对照组比较：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model control group：#P＜0.01

组别正常对照组模型对照组联苯双酯组芹菜根提取物高剂量组芹菜根提取物低剂量组SOD/U·L-1 178.52±5.05 80.35±10.00＊122.6±2.86#117.45±6.36#108.65±6.05#n 10 10 10 10 10 MDA/nmol·L-1 2.11±1.7 7.05±2.89＊2.71±0.92#2.86±1.04#4.93±1.23#

4 讨论

肝脏损伤的原因大致可分为化学性损伤和免疫性损伤两大类。D-GalN主要损伤胞质内细胞器，耗竭体内磷酸尿苷，使依赖其生物合成的核糖蛋白、脂糖等物质减少，限制细胞器及酶的生成和补充，使细胞器受损。由D-GalN引起的急性肝损伤模型常用作筛选抗肝炎药物；D-GalN还可以产生氧化应激反应产生氧自由基，攻击脂质细胞膜，造成肝细胞脂质过氧化性损伤[2]。

血清ALT水平的高低可灵敏反映肝细胞变性、坏死的程度，其大部分存在于细胞浆中[3]。AST主要位于线粒体，少部分位于细胞浆。当肝脏轻度受损、细胞膜通透性开始增加时，胞浆内ALT、AST释放入血，而线粒体内AST则不释放，只有肝细胞严重受损时才释放入血。当肝实质细胞结构受损，特别是实膜性结构受损时，胞浆内ALT和线粒体内AST释放，从而引起血清ALT和AST升高[4]。

联苯双酯在临床上已经很少使用，但在很多动物药理学实验上依然广泛应用，其原因是联苯双酯是专属的降酶药，而其降酶作用也比较明显，其他作用的干扰程度较小，而本研究选用的检测指标正是氨基转移酶，因此笔者选用该药作为阳性对照药，主要是观察对比芹菜根对肝损伤大鼠氨基转移酶升高的抑制作用。

据笔者对维医院医师临床使用该药的调查结果来看，芹菜根是一种低毒性的药物，且目前也没有发现由于使用该药而出现任何不良反应的情况。笔者对该药做过半数致死量的实验，发现无法测出半数致死量。因此，笔者又对该药进行了限量实验，大鼠禁食一夜后ig 5 g·kg-1（大鼠的胃所能容纳的3 mL体积中药物溶解的最大量）药物浸膏，观察14 d，没有发现动物死亡。证实该药物为低毒的受试物，剂量以＞5 g·kg-1表达。在选取剂量时，笔者选用了最大溶解量[5 g·kg-1，相当于临床上人正常用药（0.15 g·kg-1）的20倍]的60%，即3 g·kg-1为高剂量，50%的高剂量为低剂量作为实验所用剂量。

实验中选取7 d作为实验天数是参考《药理实验方法学》第3版上规定的急性肝损伤的实验天数。同时，在进行正式实验之前，笔者以最常用的5、7、10、15 d做过预试，发现以上4个时间段所测结果没有显著区别，与《药理实验方法学》中规定的一致。

大鼠ip D-GalN后，血清ALT、AST活性与肝组织中MDA含量升高，SOD活性下降，显著高于正常对照组。笔者以联苯双酯作为阳性对照，研究结果表明，联苯双酯组血清AST、ALT活性与肝组织中MDA含量显著低于模型对照组，SOD活性高于模型对照组。给予芹菜根提取物后，各给药组的血清ALT、AST活性与肝组织中MDA含量均低于模型对照组，SOD活性均高于模型对照组。说明维药芹菜根对急性肝损伤有一定的保护作用。其中高剂量的作用更为显著，显示出一定的剂量依赖性。对于芹菜根护肝作用的机制，目前尚不清楚，还有待进一步的研究。

[1]徐叔云，陈 修.药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2005：200.

[2]王迪生，高继君.赤芍甘草冲剂对D-半乳糖诱导肝损伤的保护作用[J].中国临床药理学与治疗学，2006，11（9）：1 026.

[3]李 萍，谢金鲜，林启云.民族药余甘子对D-半乳糖胺致小鼠肝损伤的影响[J].中国民族民间医药杂志，2003，6（2）：61.

[4]姜 洁，窦昌贵，张玉彬.注射用鲨鱼肝再生因子对小鼠急性化学性肝损伤的影响[J].药物生物技术，2004，11（5）：324.