247例人乳头状病毒感染与宫颈病变关系的分析

张 蓓,林清平,陈小苑

(福建省厦门市第二医院妇产科,福建厦门,361021)

人乳头状病毒(HPV)感染的检测是筛查和预防宫颈癌的关键问题之一。本研究采用核酸分子快速导流杂交基因微阵列分型检测技术,以厦门市第二医院妇科门诊及住院女性HPV感染患者为研究对象,探讨HPV感染与宫颈病变的关系。

1 对象和方法

搜集2008年12月～2011年8月厦门市第二医院妇科门诊及住院女性2385例宫颈HPV分型检测结果,其中HPV感染共502例,阳性检出率21.04%,选择感染高危型HPV又可追查到同期宫颈病理结果的患者209例,感染低危型HPV(因子宫肌瘤、子宫腺肌症等疾病术前行HPV检测,术后宫颈病理结果)的患者38例。患者年龄26 64岁,平均36岁。本研究以这247例患者为研究对象,探讨HPV感染与宫颈病变的关系。

根据我院病理科诊断,247例患者根据宫颈病变程度将其分成4组:①慢性宫颈炎组,86例,占34.82%;②低级别鳞状上皮病变组,包括CIN I 63例,占25.51%;③高级别鳞状上皮病变组,包括CIN Ⅱ49例,CIN Ⅲ36例,共占34.41%;④宫颈癌组,13例,均为鳞状细胞癌,占5.26%。

主要试剂及仪器:HPV核酸扩增分型检测系统,包括DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒及杂交试剂盒和医用核酸分子快速杂交仪由潮州凯普生物科技有限公司生产,TC-25/H基因扩增仪由杭州博日科技有限公司生产。

样本采集和测定:①HPV分型标本取样步骤及要求以潮州凯普生物有限公司生产的一次性宫颈细胞采集器取宫颈脱落细胞标本,先用棉签将阴道或宫颈过多的分泌物轻轻擦拭干净,再用专用宫颈刷伸入宫颈口处轻轻转动宫颈刷使其顺时针旋转5圈,然后再放入专用细胞保存液试管中。以上标本均于4℃保存,2周内检测。②HPV的分型检测 严格按照凯普HPV分型检测试剂盒要求进行DNA提取,PCR扩增,快速导流杂交,显色后对样本进行结果判断,共能检测16、18 、31 、33 、35 、39 、45 、51 、52 、56 、58 、59 、68 、6 、11 、42、43、44 、53、66、CP8304 等 21 种 HPV 基因型 。

所有数据录入计算机,采用Minitab15统计软件进行统计学分析。

2 结 果

2.1 HPV检测结果

在247例HPV感染患者中,检出21种亚型中的18种亚型,共314株HPV病毒,未检出42、43及44亚型。高危型HPV感染率最高的3种亚型分别是:16型21.97%(69/314),52型17.52%(55/314),58型11.15%(35/314),其他亚型分别为33型5.41%(17/314),18型5.1%(16/314),31型4.46%(14/314),68型3.5%(11/314),56型3.5%(11/314),39型2.23%(7/314),51型1.91%(6/314),45型1.59%(5/314),59型1.27%(4/314),35型0.64%(2/314);低危型HPV感染率最高的3种亚型分别是:53型7.32%(23/314),CP8304型5.73(18/314),6型2.87%(9/314),其他亚型分别为11型1.91%(6/314),66型 1.91%(6/314)。单一高危型感染152例;单一低危型感染37例;多重感染58例,其中仅同时感染多种高危型31例,同时感染多种低危型1例,同时感染高危和低危型26例。

2.2 HPV感染类型与宫颈病变的关系

根据患者感染的HPV类型,可以把患者分为3组:A组:仅感染高危型HPV(包括单一亚型感染和多种亚型混合感染),B组:仅感染低危型HPV(包括单一亚型感染和多种亚型混合感染),C组:同时感染高危型和低危型HPV的混合型感染。3种感染与宫颈病变类型间的关系见表1。

表1 HPV类型与宫颈病变类型间的关系

2.3 多重HPV感染与宫颈病变的关系

为了研究多重HPV感染与宫颈病变类型的关系,本研究将HPV多重感染患者分为:D组,仅同时感染多种高危亚型HPV;E组,同时感染多种低危亚型HPV。将感染单一HPV患者分为:F组,仅感染一种高危亚型HPV;G组,仅感染一种低危亚型HPV。结果见表2。

表2 HPV多重感染与宫颈病变类型间的关系

从表2可见,感染多种高危亚型HPV与感染单一高危亚型HPV对感染者的病变类型并无影响。本次研究中因感染多种低危亚型HPV样本量过少,故无法完成与单一低危亚型HPV感染的比较。

2.4 不同宫颈病变类型患者中HPV亚型分布

慢性宫颈炎组中检测出 16、18、31、33、39、51、52 、56、58 、59、68、6、11 、53、66、CP8304 亚型,感染率最高的3种亚型分别是:52型 27.18%(28/103),16型10.68%(11/103),CP8304型10.68%(11/103);低级别鳞状上皮病变组中检测出16 、18、31、33、35、39 、45、52、56、58、59 、68、6、11、53.、66、CP8304 亚型,感染率最高的3 种亚型分别是:52型16%(16/100),68型14%(14/100),16型12%(12/100);高级别鳞状上皮病变组中检测出 16、18、31 、33、45、51 、52、56、58、59 亚型,感染率最高的3种亚型分别是:16型41.05%(39/95),18型26.31%(25/95),52型13.68%(13/95);宫颈癌组中检测出 16、18、45、56、58 、68亚型,感染率最高的3种亚型分别是:16型50%(8/16),18型18.75%(3/16),45型12.5%(2/16)。HPV16与宫颈病变严重程度明显相关,他在宫颈癌、高级别鳞状上皮病变组、低级别鳞状上皮病变组和宫颈炎组感染率分别为50%、41.05%、12%、10.68%。4组HPV感染率相比差异显著(χ2=40.525,P<0.01)。

3 讨 论

宫颈癌是女性生殖系统中发病率占第1位的妇科恶性肿瘤,严重威胁了妇女的生命健康。德国科学家Harald Zur Hausen因提出人乳头瘤病毒感染与宫颈癌发病的相关性学说而获得2008年诺贝尔生理和医学奖,使得宫颈癌发病的传统肿瘤研究模式转化为以HPV感染为中心的新病因学的研究模式。持续性高危型HPV感染导致宫颈病变和宫颈癌发生学说的确立,使宫颈癌成为目前唯一一种病因明确的可以预防和治愈的恶性肿瘤[1-2]。宫颈癌在全球妇女癌症死亡率中位居第2位,每年全球大约有50万新发宫颈癌病例,约20万人死于宫颈癌。HPV作为宫颈癌的主要病因的发现揭示了其感染性疾病的本质,这对预防和治疗都产生了巨大的影响[3]。目前已经分离出 100多种HPV基因型,不同类型的HPV致病力存在较大的差异。根据与女性生殖道疾病的关系,HPV被分为高危型群和低危型群,其中以高危型与宫颈癌的发生关系最为密切[4]。

从表1的结果来看,单纯高危型HPV感染与单纯低危型HPV感染组相比,高危型HPV感染者宫颈癌构成比显著高于低危型HPV感染者。提示宫颈癌的发生与高危型HPV关系密切。

高危型HPV持续感染是宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件,而HPV的多重感染是否会增加和促进宫颈癌变的发生目前却无统一说法。多数人认为,多重感染并不增加宫颈癌的发生率[5-6],但也有学者认为多重感染促进宫颈癌的发生[7]。本研究中从表2结果来看,高危型HPV的多重感染与单一亚型感染比较(χ2=1.284,P>0.05)不同宫颈疾病的构成比差别不显著,与周武等的研究结果相一致[8]。提示高危型HPV无论单一或多重感染并不改变宫颈病变的程度。

宫颈癌组织中主要感染的HPV基因型存在地理差异。在本次研究中宫颈癌的主要感染型别依次是:16型(50%),18型(18.75%),45型(12.5%),与国际癌症研究协会的调查基本相近[5]。宫颈癌及高级别鳞状上皮病变组中HPV16型感染率均居首位,且随病变级别增加感染率逐步上升,提示HPV16型感染仍是宫颈癌的最大威胁。

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