TNF-α在胆脂瘤中的表达与64排CT的表现的关系

蔡胜艳，王宏伟，王乐秋，董祥梅

1.牡丹江医学院红旗医院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龙江 牡丹江157013；2.牡丹江医学院 病理教研室，黑龙江 牡丹江 157013

0 前言

胆脂瘤型中耳炎是耳科常见疾病，多伴有听小骨破坏，而导致传导性耳聋；患者的生存质量下降，如不及时治疗，将进一步引起“硬膜外脓肿”等严重并发症。其骨质破坏作用是导致各种颅内、外并发症的主要原因，严重者可危及患者生命。CT扫描仍是胆脂瘤的主要检查手段，64排CT具有良好的密度及空间分辨率，图像清晰，解剖定位准确，能清晰显示耳部细微结构，能对病变侵犯范围及程度作出精确判断。近年来随着分子生物学的发展，多种细胞因子在胆脂瘤的发生发展中的作用得到了证实，本实验在对TNF-α在胆脂瘤发生发展中的作用进行了研究，并进一步探讨了TNF-α与听小骨在CT表现上骨质破坏程度的关系。

1 材料和方法

1.1 一般资料

病例选自牡丹江医学院红旗医院2008年3月～2010年3月接受64排螺旋CT检查的胆脂瘤患者30例，常规石蜡包埋制成4μm厚的切片进行TNF-α免疫组织化学染色。患者年龄为20～50岁，平均35岁，其中，男性18例，女性12例。

1.2 64排螺旋CT扫描方法

采用Aquiline 64排螺旋CT扫描机。扫描条件：120kV，200mAs，层厚0.5mm。30例患者均行横断扫描，患者仰卧，先扫定位片后，设定扫描计划。扫描范围从外耳孔至岩骨上缘，层厚及层间距均为1mm。窗宽：3000Hu；窗位：2000Hu。64排CT所见听小骨改变按骨质破坏方式，程度分为：消失（全部或部分）、破坏（包括听小骨密度降低，边缘欠光滑）、移位、关节融合固定。

1.3 免疫组织化学染色

本研究采取Envision System通用二步法检测TNF-α，所需材料为：兔抗人TNF-α蛋白多克隆抗体，PV6000试剂盒，DAB显色试剂（以上试剂均购自北京中山生物技术有限公司）。

1.4 结果判断

每个标本随机选3张切片计数细胞数。在光镜200倍下进行阳性细胞计数，每片取3个不同的清晰视野，每个视野下阳性细胞百分率(%)＝阳性细胞数/总细胞数×100%，取其均值±标准差(±s)%。

1.5 统计学分析

应用x2检验对实验结果进行统计学分析，探讨胆脂瘤临床CT征象与TNF-α蛋白表达的相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNF-α在胆脂瘤与正常外耳道皮肤的表达比较（表1）

表1 TNF-α在胆脂瘤与正常外耳道皮肤的表达比较

2.2 胆脂瘤中听小骨的CT破坏程度与TNF-α表达的关系比较（表2）

结果显示TNF-α蛋白表达水平与HRCT扫描听小骨骨质破坏程度密切相关，随着TNF-α蛋白表达水平增加骨质破坏程度也随着加重，组间的差异均有统计学意义（P<0.05）。

表2 胆脂瘤中听小骨的CT破坏程度与TNF-α表达的关系比较

3 讨论

TNF-α在中耳胆脂瘤骨质破坏中的作用及与HRCT扫描骨质破坏程度的关系：肿瘤坏死因子（TNF）于1975年发现，1985年学者们根据其细胞来源和分子结构不同，将TNF分为α型和β型，TNF-α主要由脂多糖（LPS）等激活的单核巨噬细胞产生[1]。

TNF-α是由157个氨基酸残基组成，分子量为17kD的疏水性蛋白质，在70℃条件下1h即失活，对蛋白酶敏感。天然TNF-α主要由激活的巨噬细胞和一些细胞系，如HL-60、U937等细胞所分泌，在另外一些条件下其本身也能产生TNF-α的基因。TNF-α受体分布广泛，多种肿瘤细胞或细胞系可表达TNF-α受体，许多正常细胞，如成纤维细胞、血管内皮细胞、人胚肺细胞、鼠肝细胞等均表达一定水平的TNF-α受体[2]。

TNF-α的生物学活性相当广泛，已经远远超过其名称本身的含义，除了具有抗肿瘤作用外，其对免疫反应、机体代谢、炎症反应具有重要的调节和介导作用。TNF-α可直接杀伤或抑制某些肿瘤细胞；可促进细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表达主要组织相容性复合体I（MHC-I）类抗原并增强其杀伤活性；可刺激单核细胞、内皮细胞等分泌IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α本身及其他趋化因子等；可以增强中性粒细胞等的吞噬和杀伤病原体的作用，促进肝细胞合成急性期蛋白，引起发热等[3]。

Kinoshita[4]与Chodynik[5]分别用ELISA和免疫放射法证实了胆脂瘤上皮组织中TNF-α水平明显高于外耳道上皮的TNF-α水平。本实验用免疫组化法在蛋白水平对胆脂瘤组织和正常外耳道皮肤的TNF-α表达情况进行了研究，结果表明，胆脂瘤组织的TNF-α表达水平明显高于正常外耳道皮肤，两者之间具有显著性差异，结果与Kinoshita等人基本一致。

同时结果显示，不同听小骨骨质破坏程度CT表现组间TNF-α的表达水平有差异，并且发现胆脂瘤组织中TNF-α的表达水平与胆脂瘤的骨质破坏程度呈相关性，即胆脂瘤上皮中TNF-α的表达水平越高，胆脂瘤导致的骨质破坏范围越广，累计的部位越多。因此，我们可以推断，TNF-α是胆脂瘤引起骨质破坏的一个关键因素。所以，观察胆脂瘤组织中的TNF-α的表达水平既可以进一步帮助明确诊断，又可以为判断预后提供有力根据。

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