RP-HPLC法测定北虫草发酵培养物中虫草素的含量

2011-08-07刘静平王永春李勇贾景明宁夏医科大学总医院银川市750004沈阳产品质量监督检验院沈阳市036沈阳药科大学沈阳市006

中国药房 2011年47期

刘静平，王永春，李勇，贾景明（.宁夏医科大学总医院，银川市750004；.沈阳产品质量监督检验院，沈阳市 036；3.沈阳药科大学，沈阳市 006）

北虫草Cordycepsmilitaris（L.）Link又名蛹虫草，是真菌门子囊菌亚门肉座目麦角菌科虫草属的模式种[1]，是我国名贵中药材之一，主要分布于吉林、辽宁、陕西、河北等地[2]。作为我国中药宝库的瑰宝，它具有提高人体免疫力、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤等多种医疗和保健作用。

虫草素（3′-脱氧腺苷，3′-Deoxyadenosine）亦称虫草菌素（Cordycepin），是一种核苷类抗生素。虫草素的分子式为C10H13N5O3，相对分子质量为251，熔点为230～231℃，最大吸收波长为259 nm[3]。最初虫草素是从北虫草培养物中分离得到的[4]，具有显著的药理活性[5]。笔者改进了虫草素的测定方法，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定北虫草发酵培养物中虫草素的含量，并与野生北虫草做了对比试验。

1 仪器与材料

1.1 仪器

HPLC仪，含LC-10ATvp泵、SPD-10ATvp紫外检测器（日本岛津公司）；AT-330柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2104N电子天平（上海民桥医疗器械有限公司）；KH2200B超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司，频率：40 kHz，功率：80W）。

1.2 试药

水为娃哈哈纯净水，甲醇、乙腈为色谱纯；虫草素标准品（美国Sigma公司，含量≥99%）。

1.3 样品

北虫草发酵培养物（韩国东亚大学，批号：DAU-Cm-Kangwon-1）；野生北虫草药材由韩国东亚大学提供，由沈阳药科大学贾景明教授鉴定为北虫草C.militaris（L.）Link，标本存放于沈阳药科大学标本馆（标本号：200608210-A）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DIAMONSIL-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水-甲醇（5∶90∶5）；流速：0.8m L·min-1；检测波长：259 nm；柱温：40℃。在此条件下，虫草素的保留时间为14min。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.虫草素标准品；B.北虫草发酵培养物；C.野生北虫草药材Fig 1 HPLC chromatogram s A.cordycepin standard；B.fermented C.militaris；C.w ild materials of C.militaris

2.2 标准品溶液的制备

精密称取虫草素标准品3.2mg，加入50%乙醇溶液定容至25m L，混匀，即得（每1m L溶液含虫草素0.128mg）。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取北虫草发酵培养物0.2 g，溶于5m L 50%乙醇溶液中，超声提取30min，补足失重，先经滤纸粗滤，再经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。用微量进样器精密吸取10μL滤液进样。

2.4 线性关系考察

分别吸取虫草素标准品溶液4、2、1.2、0.8、0.4、0.2m L，置10m L容量瓶中，以50%乙醇溶液定容，混匀，制得浓度分别为51.20、25.60、15.36、10.24、5.12、2.56 μg·m L-1的系列标准溶液，按上述色谱条件进样测定峰面积。以峰面积积分值（Y）对标准品浓度（X）作线性回归，得回归方程为Y＝23 979X+16 085（r＝0.999 8，n＝6）。结果表明，虫草素检测浓度在2.56～51.20 μg·m L-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。