葛根醇提物对2型糖尿病模型大鼠的保护作用研究

方道硕（成都大学附属医院药剂科，成都市 610106）

随着现代生活节奏的加快，人们越来越忽略自身的健康，从而导致营养过剩、形体肥胖、运动减少，而以上因素也是诱发2型糖尿病的重要原因。有研究表明[1，2]，胰岛素抵抗（IR）贯穿于2型糖尿病的始终，是2型糖尿病发生各种慢性并发症的病理基础。如果能减轻IR就能相应地增加胰岛素的敏感性，从而能有效地降低血糖水平，延缓并发症的发生。已有文献报道[3，4]，我国传统中药葛根具有扩张冠状动脉、降低外周血管阻力、抑制血小板聚集及改善微循环等作用，临床上主要用于心、脑血管疾病的治疗。近年来发现其对缺血-再灌注后的心、肺、脑等脏器具有较好的保护作用。但葛根对于糖尿病保护作用的报道少见，因此笔者通过2型糖尿病大鼠模型来研究葛根对其的保护作用，以为葛根的临床应用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

UV751GD型紫外-可见分光光度计（上海精科实业有限公司）；AX-120型电子天平（日本岛津公司）；OneTouch型强生血糖仪（美国强生公司）；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）ELISA测定试剂盒由成都晶美生物制品有限公司提供。

1.2 试药

葛根（购自成都大学附属医院中药房）由笔者鉴定为真品。盐酸二甲双胍片（上海延安药业有限公司，批号：101204）；链脲佐菌素（STZ，广州市齐云生物技术有限公司，批号：110112）；其余试剂为分析纯。

1.3 动物

健康Wistar大鼠60只，♂，体重（200±40）g，由四川大学实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（川）2009-09）。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 葛根醇提物的制备 将葛根磨成细粉，加处方量6倍的50%乙醇，回流提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h，合并2次滤液，即得葛根醇提物，备用。

2.1.2 复制模型 Wistar大鼠60只，适应性喂养1周，随机取10只大鼠作正常对照，空腹12 h后尾iv柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液2.5m L·kg-1，给予正常饮食。取100m L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液（pH 4.5）溶解STZ 2 g，配制成2%溶液，50只大鼠空腹12 h后尾iv STZ（25mg·kg-1，即2%STZ溶液2.5m L·kg-1），给予高糖高脂饲料喂养，自由进食及饮水，均不使用胰岛素。72 h后测大鼠空腹尾静脉血糖，血糖值以11.1mmol·L-1≤空腹血糖（FBG）≤33.3mmol·L-1且伴有糖耐量减退者为2型糖尿病大鼠模型复制成功。

2.1.3 分组与给药 Wistar大鼠分为6组，分别为正常对照（等容生理盐水）、模型（等容生理盐水）、二甲双胍（70mg·kg-1）和葛根醇提物高、中、低剂量（150、100、50mg·kg-1）组。ig给药，每天1次，连续8周。

2.1.4 指标的测定 ig给药结束后，大鼠空腹12 h称体重，ip 2%戊巴比妥钠生理盐水溶液40mg·kg-1麻醉，股动脉取血并检测FBG、血清胰岛素（Flns）含量、血清IL-6、TNF-α。胰岛素敏感性指数（ISI）的计算参照文献方法[5]：ISI＝ln（1/Flns×FBG），因其为非正态分布，分析中取其自然对数，并以正常对照组为对照，计算相对胰岛素敏感性。FBG采用强生血糖仪检测；血清IL-6、TNF-α含量采用试剂盒测定。

2.2 结果

2.2.1 葛根醇提物对2型糖尿病模型大鼠ISI的影响 模型组大鼠的ISI较正常对照组显著升高（P＜0.01）；二甲双胍组和葛根醇提物高、中剂量组的ISI较模型组显著降低（P＜0.01或P＜0.05），提示葛根醇提物有降低ISI的作用。葛根醇提物对2型糖尿病模型大鼠ISI的影响见表1。

表1 葛根醇提物对2型糖尿病模型大鼠ISI的影响Tab 1 Effects of Pueraria lobata ethanol-extract on ISI in type2 diabeticmodel rats

2.2.2 葛根醇提物对2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影响 模型组大鼠的TNF-α、IL-6的含量较正常对照组显著升高（P＜0.01）；二甲双胍和葛根醇提物高、中剂量组较模型组显著降低（P＜0.01或P＜0.05），提示葛根醇提物有降低TNF-α、IL-6含量的作用。葛根醇提物对2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影响见表2。

表2 葛根醇提物对2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影响Tab 2 Effects of P.lobata ethanol-extract on the contents of TNF-αand IL-6 in type 2 diabeticmodel rats

3 讨论

IR是2型糖尿病发病的重要原因，并贯穿2型糖尿病的全过程，也是2型糖尿病发生各种慢性并发症的病理基础，改善IR成为近年来糖尿病治疗领域关注的热点。笔者通过测定FBG、Flns的含量，计算出ISI，发现用药后ISI明显低于模型组，说明葛根醇提物能降低模型大鼠的ISI。

有报道指出，IR人群的脂肪组织中存在TNF-α过度表达，IR的2型糖尿病患者的肌细胞中TNF-α表达比胰岛素敏感的正常人群高4倍[6]。TNF-α可干扰周围组织胰岛素作用从而引起IR，伴有IR的肥胖啮齿类动物和人类肥胖者的脂肪组织TNF-α基因均呈过度表达，而去TNF-α基因肥胖小鼠ISI明显高于正常肥胖小鼠，表明TNF-α参与IR的形成[7]。笔者通过测定TNF-α含量，发现用药后葛根醇提物高、中剂量组TNF-α含量显著低于模型组，说明葛根素醇提物能通过下调TNF-α改善脂肪组织IR。

IR与急性相反应的激活有关。IL-6作为急性相反应的主要细胞因子，可能通过多种途径影响2型糖尿病的发病机制，如IL-6水平增高，使肝细胞处于应激状态而大量分泌急性相蛋白，使纤维蛋白原、C反应蛋白等增加，纤维蛋白原增加从而使血黏度增加，易于形成血栓和发生栓塞。通过IL-6激活脑、肝、血管内皮、脂肪组织的急性相反应，参与IR和2型糖尿病的发病等。笔者通过测定IL-6含量，发现用药后葛根醇提物高、中剂量组IL-6含量显著低于模型组，说明葛根醇提物能通过下调IL-6改善脂肪组织IR。

综上所述，葛根醇提物可降低2型糖尿病模型大鼠ISI和TNF-α、IL-6含量，以为葛根在2型糖尿病治疗的临床应用提供理论依据。

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[6]沈 隽.TNF-α与肥胖、2型糖尿病的胰岛素抵抗[J].国外医学生理病理科学与临床分册，2001，20（2）：154.

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