愈骨胶囊镇痛和抗炎活性的实验研究Δ

王琴，邢茂，易美彤，敖利(.重庆市中医院药物研究部，重庆市40000；.第三军医大学第二附属医院药剂科，重庆市400037)

愈骨胶囊是重庆市中医院中医骨伤验方，由血竭、骨碎补、续断、牛膝、红花、元胡等组方而成。方中血竭活血化瘀、消肿止痛为君药，骨碎补、续断、牛膝补肝肾、接骨续筋为臣药，红花、元胡等活血化瘀、止痛为佐使。在临床使用中，愈骨胶囊具有缓解肿痛、促进骨折愈合的作用，但尚缺乏动物实验药理数据证明。为此，本课题组研究不同剂量愈骨胶囊在镇痛、抗炎方面的作用，为其在临床合理使用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

ME235s型电子天平(德国赛多利斯有限公司)；UV-2501型紫外分光光度仪(日本岛津公司)；HWS24型电热恒温水浴箱(上海一恒科学仪器有限公司)；5430 R型台式高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)。

1.2 试药

愈骨胶囊(重庆市中医院药物研究部，批号:091215)；阿司匹林(山东新华制药股份有限公司，批号:0702238)；吲哚美辛(山西亨瑞达制药有限公司，批号:080501)；冰醋酸(分析纯，上海化学试剂有限公司)；二甲苯(分析纯，重庆瑞平化工有限公司)；伊文思蓝(国药集团化学试剂有限公司)。

1.3 动物

清洁级昆明种小鼠，♀♂兼用，体重(20±2)g，由重庆医科大学实验动物中心提供(动物生产合格证号:SCXK(渝)2007-0001)。

2 方法与结果

2.1 小鼠热板法观察愈骨胶囊的镇痛作用[1]

筛选在(55±0.5)℃恒温热板出现添后足反应时间＞5 s且＜30 s的♀小鼠50只，随机均分为5组，即生理盐水、吲哚美辛(0.02 g·kg-1)和愈骨胶囊高、中、低剂量(0.8、0.4、0.2 g·kg-1)组。给药前，将小鼠投入热板以出现舔后足为疼痛反应指标，间隔5 min测痛阈值1次，将3次测定值的平均值作为给药前痛阈值。同法测定各组小鼠给药后60、90、180 min的痛阈值。愈骨胶囊对热刺激所致小鼠疼痛反应痛阈值的影响见表1。

表1 愈骨胶囊对热刺激所致疼痛反应痛阈值的影响(±s，n＝10)Tab 1Effect of Yugu capsules on threshold of pain reaction in mice induced by heat stimulatio(n±s，n＝10)

表1 愈骨胶囊对热刺激所致疼痛反应痛阈值的影响(±s，n＝10)Tab 1Effect of Yugu capsules on threshold of pain reaction in mice induced by heat stimulatio(n±s，n＝10)

与生理盐水组比较:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.NS group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

180 min 19.10±4.1119.04±4.0521.62±4.1421.31±4.21＊24.52±3.92＊分组生理盐水组吲哚美辛组愈骨胶囊低剂量组愈骨胶囊中剂量组愈骨胶囊高剂量组剂量-20 mg·kg-1 0.2 g·kg-1 0.4 g·kg-1 0.8 g·kg-1给药前痛阈值/s 18.20±4.3017.90±3.6019.34±3.5217.97±3.3619.85±4.22给药后不同时间痛阈值/s 60 min 18.13±4.3328.28±3.57＊＊19.80±3.4219.06±3.5621.11±3.8590 min 18.84±4.0022.22±4.28＊21.46±4.1019.48±3.3122.94±4.20

结果表明，与给药前比较，给药后60 min时，吲哚美辛组小鼠热刺激所致疼痛反应痛阈值极显著延长(P＜0.01)，但在180 min时作用减弱；在给药后180 min时，愈骨胶囊高、中剂量组小鼠的痛阈值显著延长(P＜0.05)。

2.2 扭体法观察愈骨胶囊的镇痛作用[2]

取♂小鼠60只，随机均分为6组，即正常、模型、阿司匹林(0.2 g·kg-1)和愈骨胶囊高、中、低剂量(0.8、0.4、0.2 g·kg-1)组。在末次给药30 min后，各组小鼠ip0.6%冰醋酸0.1 mL·10 g-1，扭体反应表现为小鼠腹部收缩内陷、躯体扭曲、后肢伸展及蠕动。记录各组小鼠15 min内发生扭体的次数，计算抑制率:抑制率(%)＝(模型组肿胀度－给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100%。愈骨胶囊对醋酸致小鼠扭体反应的影响见表2。

结果表明，与正常组比较，模型组对醋酸致扭体反应明显，提示模型复制成功。与模型组比较，15 min内，愈骨胶囊高、中、低剂量组小鼠的扭体次数显著减少(P＜0.01或P＜0.05)。

2.3 二甲苯致小鼠耳肿胀模型观察愈骨胶囊的抗炎作用

表2 愈骨胶囊对醋酸致扭体反应的影响(±s，n＝10)Tab 2Effect of Yugu capsules on frequency of writhing response in mice induced by acetic aci(d±s，n＝10)

表2 愈骨胶囊对醋酸致扭体反应的影响(±s，n＝10)Tab 2Effect of Yugu capsules on frequency of writhing response in mice induced by acetic aci(d±s，n＝10)

与正常组比较:＊P＜0.01；与模型组比较:#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group:＊P＜0.01；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

分组正常组模型组阿司匹林组愈骨胶囊低剂量组愈骨胶囊中剂量组愈骨胶囊高剂量组剂量/g·kg-1抑制率/%----48.2218.0823.0129.040.20.20.40.815 min内扭体次数-36.5±5.82＊18.9±4.38##29.9±6.22#28.1±7.48#25.9±6.10##

取♂小鼠60只，分组及给药同“2.2”项下方法。在ig第7天末次ig给药30 min后，将二甲苯均匀涂于小鼠右耳廓前后两面，左耳不做任何处理，每只小鼠20 μL。20 min后，将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9 mm打孔器在耳部同一位置打下圆形耳片，用电子天平称取耳片重量，右耳片重量减去左耳片重量即为肿胀度，计算抑制率:抑制率(%)＝(模型组肿胀度－给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100%。愈骨胶囊对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响见表3。

表3 愈骨胶囊对二甲苯致耳肿胀的影响(±s，n＝10)Tab 3Effect of Yugu capsules on degree of ear swelling in mice induced by xylene(±s，n＝10)

表3 愈骨胶囊对二甲苯致耳肿胀的影响(±s，n＝10)Tab 3Effect of Yugu capsules on degree of ear swelling in mice induced by xylene(±s，n＝10)

与正常组比较:＊P＜0.01；与模型组比较:#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group:＊P＜0.01；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

45.889.8212.2614.39分组正常组模型组阿司匹林组愈骨胶囊低剂量组愈骨胶囊中剂量组愈骨胶囊高剂量组剂量/g·kg-1抑制率/%----0.20.20.40.8肿胀度/mg 0.21±0.1110.36±1.00＊5.61±0.80##9.34±1.01#9.10±1.12#8.88±1.52##

结果表明，与正常组比较，模型组小鼠耳肿胀度显著升高，提示模型复制成功。与模型组比较，阿司匹林组小鼠耳肿胀度显著降低(P＜0.01)；愈骨胶囊高、中、低剂量组小鼠耳肿胀度显著降低(P＜0.01或P＜0.05)。

2.4 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加模型观察愈骨胶囊的抗炎作用

取♂小鼠60只，随机均分为6组，分组及给药同“2.2”项下方法。第7天ig给药后1 h，小鼠尾iv 0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1 mL·10 g-1，随即ip0.5%冰醋酸溶液0.1 mL·10 g-1，20 min后脱颈椎处死，打开腹腔，用6 mL生理盐水分数次洗涤腹腔，吸管吸出全部洗涤液，合并后加入生理盐水至10 mL，3000 r·min-1离心15 min，取上清液于590 nm波长处测定吸光度(OD)值。愈骨胶囊对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响见表4。

结果表明，与正常组比较，模型组小鼠腹腔毛细血管通透性显著增强，提示模型复制成功。与模型组比较，阿司匹林组小鼠OD值显著降低(P＜0.01)；愈骨胶囊高、中剂量组小鼠OD值显著降低(P＜0.05)，但各剂量组间无统计学差异。

3 讨论

骨折早期因局部筋脉损伤，血离经脉，癖积不散，常伴有疼痛、肿胀、功能障碍等症状，治则以活血化癖、消肿止痛为主。愈骨胶囊处方中血竭、红花、元胡等并用能起到活血化瘀、消肿止痛的功效，可达到上述骨折初期治疗原则的要求。

表4 愈骨胶囊对醋酸致腹腔毛细血管通透性增加的影响(±s，n＝10)Tab 4Effect of Yugu capsules on the increase of capillary vessel permeability induced by acetic aci(d±s，n＝10)

表4 愈骨胶囊对醋酸致腹腔毛细血管通透性增加的影响(±s，n＝10)Tab 4Effect of Yugu capsules on the increase of capillary vessel permeability induced by acetic aci(d±s，n＝10)

与正常组比较:＊P＜0.01；与模型组比较:#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group:＊P＜0.01；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

分组正常组模型组阿司匹林组愈骨胶囊低剂量组愈骨胶囊中剂量组愈骨胶囊高剂量组剂量/g·kg-1--0.20.20.40.8 OD 0.04±0.010.33±0.08＊0.18±0.06##0.28±0.080.26±0.05#0.27±0.06#

愈骨胶囊作为重庆市中医院验方已使用多年，本研究依据目前临床使用剂量，设计高、中、低剂量研究愈骨胶囊的抗炎、镇痛作用及量效相关性。结果表明，愈骨胶囊能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀及醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，能延长热刺激所致小鼠疼痛反应的痛阈值和减少醋酸所致小鼠扭体次数，说明愈骨胶囊具有一定抗炎、镇痛功效，能够改善骨折初期疼痛、肿胀等症状。但在实验剂量范围内愈骨胶囊对实验动物的抗炎、镇痛作用无明显剂量相关性。说明在抗炎、镇痛作用方面，愈骨胶囊目前临床使用剂量是合理的。

[1]李菁，王颖莉，李鹏，等.高载药量萘普生微乳的制备及其抗炎镇痛作用实验研究[J].中国药房，2010，21(5):406.

[2]李仪奎.中药药理实验方法学[M].第2版.上海:上海科学技术出版社，2006:245.