iNOS在16例肺癌中的表达及其临床意义

张菁华

(菏泽医学专科学校,山东 菏泽 274000)

近年来,我国肺癌的发病率及病死率已跃居恶性肿瘤首位。在癌症的诊治及预后中,iNOS受到广泛关注。近期研究显示,iNOS因促进新生血管生成而有助于血管依赖的实体瘤的生长,其在肺癌中表达的研究也炙手可热。我们应用免疫组织化学法检测16例肺癌组织标本中iNOS的表达,探讨iNOS在肺癌中的表达意义及与肺癌临床病理特征的关系。

1 临床资料

1.1 一般资料

本组资料选取菏泽市立医院病理科2010年6月～2010年12月手术切除并经病理确诊的肺癌患者的石蜡标本16例,其中鳞癌8例,腺癌8例,所有病例均有完整的临床资料。患者术前均未行放疗、化疗及生物免疫治疗,手术中取肺癌组织及淋巴结、正常肺组织[所切除肺距离病灶最远处(＞3 cm)的正常组织]。

1.2 诊断标准

依据1997年国际抗癌联盟(UICC)修订的标准进行分类和TNM分期。

1.3 主要试剂

美国Santa Cruz公司制造生产的兔抗人iNOS多克隆抗体,美国Zymed公司生产制造的SP-streptavidin/per-oxidase kit,Sigma公司生产的考马斯亮蓝 G-250染料、BSA、二巯基乙醇,德国罗氏公司生产的PVDF膜以及Pierce公司生产的ECL显色液。

1.4 免疫组化染色

采用链霉菌抗生物素过氧化酶(Streptavidin-Peroxidase,S-P)免疫组化法,按S-P试剂盒操作说明进行操作。肿瘤组织切除后,立即取标本,放入-80℃低温冰箱中保存备用。将标本置于中性福尔马林中固定,石蜡包埋,4 μ m厚度连续切片后供常规HE染色及SP法免疫组织化学染色。具体步骤:石蜡切片常规脱蜡至水,PBS洗两次各5 min,3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶,室温静置10 min,PBS洗两次各5 min,高压锅修复抗原,PBS洗两次各5 min,滴加正常山羊血清封闭液,室温20 min,甩去多余液体,滴加 iNOS一抗,室温静置1 h,PBS洗 3次每次 2 min,滴加生物素标记二抗,室温静置1 h,PBC洗3次每次5 min,DAB显色试剂盒显色10 min,PBS冲洗10 min,苏木素复染2 min、盐酸酒精分化,自来水冲洗10 min,脱水、透明、封片、镜检。对照染色,以阳性对照片作为阳性对照;以PBS液代替一抗作为阴性对照。

1.5 免疫组化结果判定及计数方法

iNOS的阳性表达为细胞浆内出现棕黄色颗粒。根据着色深浅程度及阳性胞数的多少,对表达程度进行半定量评估分级,分别评为0～3分。即染色强度:阴性对照(0分);染色弱但明显高于阴性对照(1分);染色清晰(2分);染色强(3分)。阳性细胞数≤10%为0分;11%-25%为1分;26%-50%为2分;≥51%为3分。

1.6 统计学分析

应用SPSS10.0统计分析软件,采用χ2检验,t检验,直线相关分析,以P=0.05作为检验水准。

2 结果

免疫组织化学结果显示肺癌组织中iNOS阳性例数为10例,占总数的62.5%,其中腺癌和鳞癌阳性例数分别为6例和4例(75.0%VS 50.0%),在癌旁正常组织中,iNOS的阳性例数为1,阳性率为6.3%,差异有统计学意义(P=0.00),见表 1。

表1 iNOS在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达Tab.1 Expression of iNOS in lung cancer tissues and adjacent normal tissues

3 讨论

恶性肿瘤与iNOS在不正常的生理相关浓度下产生高水平表达有关[1]。iNOS在健康人体组织中不表达或低表达,而通常在炎症或肿瘤等病理条件下诱生。iNOS为Ca2+非依赖性,在细胞因子及其他细胞毒性物质的作用下产生大量的一氧化氮(NO)。NO是大多数组织中关键的第二信使,持续合适浓度的NO促进肿瘤的生长和转移,过高浓度的NO则产生抗瘤效应。iNOS诱导合成纳摩尔(nmol)水平的NO,较正常生理条件下的 NO浓度约高1 000倍,但却比引起细胞凋亡的活性低1-2个数量级,所以iNOS诱导生成的NO在肿瘤发生、发展过程中主要起促进作用[2]。iNOS诱导生成的NO在NPC中可能起了关健性的作用[3]。

血管增生是肿瘤生长和转移至关重要的条件[4]。iNOS表达能影响肿瘤血管生成,促进肿瘤生长,因此与肿瘤的恶性程度密切相关[5,6]。近年来研究表明,iNOS活性的增高与肿瘤血管生成有关[4],与本研究得出的肺癌组织中iNOS表达高于癌旁正常组织的结果一致。

表2 iNOS表达与各临床病理特征间的关系Tab.2 Correlation of iNOS expression and clinical/pathological characteristics

本研究发现肺癌中iNOS的表达与性别和年龄有关。在日常生活中,男性较女性、老年较青壮年更多接触到烟雾环境。有研究证明,吸烟肺癌患者的iNOS较不吸烟患者的阳性率高[7]。与本研究得出的男性患者肺癌组织中iNOS的阳性率高于女性的结果一致。

本次研究结果提示,iNOS在肺癌细胞中高表达,表明iNOS在一些恶性肿瘤发生和发展中起着重要的作用。

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