Claudin－1和上皮型黏附素在胃癌中的表达

王海琴 佘晓玲 霍继荣 龙利民 (中南大学湘雅二医院老年病科，湖南 长沙 400)

肿瘤是危害人类健康最严重的疾病，而它的侵袭和转移是恶性肿瘤的重要特征，是导致患者致死性的重要原因。胃癌的发生发展是一个多因素、多阶段的复杂过程，涉及多个基因和多种分子水平变化，而细胞间的黏附力丢失常导致细胞连接的破坏，且与肿瘤细胞的浸润和转移相关。Claudin－1蛋白是新近发现的上皮细胞间紧密连接骨架蛋白，其有维持细胞极性和屏障的功能〔1〕。本实验将应用免疫组织化学方法检测96例胃癌中Claudin－1及上皮型黏附素(E－cad)的表达情况，探讨二者在胃癌发生发展中的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 收集胃癌根治手术切除后标本96例，患者年龄为28～76岁，平均56．5岁，其中男性65例，女性31例，术前均未进行任何放化疗。同时选取病理证实切端无癌的正常胃黏膜组织30例作为对照。

1.2 免疫组织化学方法检测两种蛋白的表达 实验用的兔抗人Claudin－1和鼠抗人E－cad单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学采用S－P法进行。

1.3 结果判定标准 Claudin－1蛋白阳性染色均位于细胞膜和细胞质，E－cad蛋白阳性染色位于细胞膜，呈棕黄色为阳性细胞，合并计算高倍镜下(×400)随机选择的5个视野中阳性细胞占全部计数肿瘤细胞的百分率，平均每个视野细胞质(膜)呈阳性反应的细胞数≥10%为阳性，无明显阳性反应或阳性反应的细胞数＜10%为阴性。

1.4 统计学方法 本实验采用卡方检验，并计算Claudin－1和E－cad的相关性，所有统计数据均用SAS软件分析完成。

2 结果

2.1 Claudin－1和 E－cad在胃癌、正常胃黏膜组织的表达 Claudin－1和E－cad在胃癌中表达的阳性率明显低于正常胃黏膜组织(P ＜0．01)。见表1，图 1。

2.2 Claudin－1、E－cad的表达与胃癌临床病理特征的关系 胃癌中Claudin－1和E－cad蛋白的表达与分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关(P＜0．05)，见表2。而与患者的年龄及性别无明显相关(P＞0．05)。

表1 Claudin-1及E-cad在胃癌、正常胃黏膜的表达〔n(%)〕

表2 胃癌中Claudin-1及E-cad的表达与临床病理特征的关系〔n(%)〕

图1 Claudin-1及E-cad在胃黏膜中的表达(DAB，×200)

2.3 Claudin－1与E－cad在胃癌中表达的关系 经相关分析，胃癌中 Claudin－1和 E－cad蛋白的表达呈正相关(r=0．350 2，P ＜0．05)。

3 讨论

Claudins是一类跨膜蛋白，是从鸡肝中得到的一种紧密连接的片段，迄今在人体内发现至少有24种不同蛋白，其序列的一致性为 12．5% ～69．7%，分子量大约为20～27 kD 之间〔2〕，每一种分子均有4个疏水跨膜区域，N末端和C末端位于细胞膜内，在细胞膜外形成两个长度不等的环，膜内的C末端与胞质内的闭合蛋白 ZO－1，ZO－2，ZO－3 相连，膜外的两个环与邻近细胞的同型环相接，如此构成细胞间紧密连接，紧密连接具有栅栏功能和屏障功能〔3〕，栅栏功能把细胞分成顶侧区和基侧区，阻止两个不同功能区之间的物质相互弥散，维持细胞的极相排列，而屏障功能则对分子大小、离子类型、细胞渗透性有选择性，并调节不同功能区之间小分子运输，维持组织的内稳态。近年有研究显示，多种上皮性恶性肿瘤claudins有异常表达，并且与这些肿瘤发生和发展有密切关系〔4，5〕。钙黏附素是一组Ca2+依赖跨膜蛋白，包括至少9个基因家族，其中以E－cad最为重要，是钙依赖的黏附素家族的一个经典成员。近年来，有关紧密连接蛋白及黏附分子功能的研究日趋增多，并证实了其在肿瘤发生发展中的重要作用〔6〕。

本结果显示胃癌Claudin－1和E－cad的阳性表达率比正常胃黏膜组织明显降低，且都与胃癌的分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移密切相关。既提示Claudin－1和E－cad在胃癌发生发展中可能起相当重要的作用，又由于分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移是与胃癌患者预后密切相关的因素，因此提示它们可能与患者的预后密切相关。本实验结果提示二者在胃癌的发生发展中具有正向的协同效应。在正常上皮细胞间不仅要维持上皮细胞结构的完整性和稳定性，还要通过与细胞骨架等胞浆内成分的连接进行信息传递〔7〕，而肿瘤进展时紧密连接完整性的破坏，可能是导致肿瘤细胞生长所需的营养因子及其他因子扩散的原因之一。还有研究显示Claudin－1与E－cad参与特定细胞连接与黏附信号的传递，影响细胞迁移〔8〕，间接参与细胞骨架和细胞的信号传导〔9〕，进而影响肿瘤的生物学行为。总之，Claudin－1和E－cad在胃癌组织中表达下调，二者可能与胃癌的发生发展有关，联合检测Claudin－1和E－cad可能更有助于判断胃癌的预后。

1 Fritzsche FR，Oelrich B，Johannsen M，et al．Claudin－1 protein expression is a prognostic marker of patient survival in renal cell carcinomas〔J〕．Clin Cancer Res，2008;14(21):7035－42．

2 Huo Q，Kinugasa T，Wang L，et al．Claudin－1 protein is a major factor involved in the tumorigenesis of colorectal cancer〔J〕．Anticancer Res，2009;29(3):851－7．

3 郭宏艳，吕 苗，杨国嵘，等．Claudin－1、SMA和P63在乳腺皮增生及乳腺癌组织中的表达及其诊断价值〔J〕．西北国防医学杂志，2009;30(2):123－5．

4 陈 琳，姜 泊，张亚历，等．紧密连接蛋白claudin－1基因的克隆和大肠癌细胞表达载体的构建〔J〕．南方医科大学学报，2007;27(3):349－51．

5 Dos Reis PP，Bharadwaj RR，Machado J，et al．Claudin 1 overexpression increase invasion and is associated with aggressive histological features in oral squamous cell carcinoma〔J〕．Cancer，2008;113(11):3169－80．

6 刘爱东，刘士生，许志萍，等．E－Cadherin在胃癌中的表达及意义〔J〕．广东医学，2007;28(11):1806－7．

7 胡孟钧，徐航娣，魏建丽，等．子宫颈上皮内瘤变进展过程中Claudin－1的表达及意义〔J〕．临床与实验病理学杂志，2007;23(5):629－30．

8 杨庄青，黄云超，邹天宁，等．E－cadherin、claudin－1联合检测与乳腺癌侵袭转移关系的研究〔J〕．现代肿瘤医学，2008;16(11):1904－6．

9 许晓勇，胡乃中．紧密连接蛋白claudins和胃癌〔J〕．国际消化病杂志，2009;29(1):8－10．