高效液相色谱法测定颠茄草中硫酸阿托品含量

2011-07-29石国明李志红

中国药业 2011年19期

孔泉，石国明，李志红，邱松

(河南羚锐制药股份有限公司，河南信阳 464000)

颠茄草为茄科植物颠茄的干燥全草，是制备颠茄浸膏和提取阿托品的原料。阿托品为主要有效成分，而历版《中华人民共和国药典》[1－3]中均采用酸碱滴定法测定总生物碱含量，但操作烦琐，误差大。笔者采用高效液相色谱法测定颠茄草中硫酸阿托品的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－20A型高效液相色谱仪(自动进样器)，SPD－20A型检测器，岛津化学工作站。硫酸阿托品对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为100040－200510);乙腈为色谱纯，水为纯化水，磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸为分析纯;颠茄草由河南羚锐制药股份有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验[4]

色谱柱:XDB －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:磷酸盐缓冲液(取6.8 g磷酸二氢钾溶于1000 mL水中，加入10 mL三乙胺，用磷酸调pH至2.8)－乙腈(93∶7);检测波长:210 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL。在此条件下，高效液相色谱图见图1。

2.2 溶液制备

取本品的中粉约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇10 mL、浓氨试液8 mL与乙醚20 mL的混合溶液适量，静置12 h，加乙醚70 mL，加热回流3 h，至生物碱提尽，提取液置水浴上蒸去大部分乙醚，移置分液漏斗中，用0.5 mol/L硫酸溶液分次振摇提取，每次10 mL，至生物碱提尽，合并酸液，用三氯甲烷分次振摇提取，每次10 mL，至三氯甲烷层无色，合并三氯甲烷液，用0.5 mol/L硫酸溶液10 mL振摇提取，弃去三氯甲烷，合并前后两次得到的酸液，滤过，滤器用0.5 mol/L硫酸溶液洗涤，合并洗液与滤液，加过量的浓氨试液使成碱性，迅速用三氯甲烷分次振摇提取，至生物碱提尽，合并三氯甲烷液，蒸干，用流动相适量使溶解，并定容至10 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取硫酸阿托品对照品适量，加流动相制成每1 mL含48 μg的溶液，即得对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:取对照品溶液，稀释至一定质量浓度，进样量分别为 0.0688，0.344，1.032，1.72，3.44 μg，进样体积均为 10 μL。以对照品进样量(μg)为横坐标、峰面积值为纵坐标作图。回归方程为 Y=1477.9228 X+9.5137，r=1.0000(n=5)。结果表明，硫酸阿托品进样量在0.0688～3.44 μg之间与峰面积值线性关系良好。

重复性试验:取同一颠茄草样品6份，按供试品溶液的制备方法进行处理，进样测定。结果的 RSD=0.86%(n=6)，表明方法重现性良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样测定。结果峰面积积分值的 RSD=0.21%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:将供试品溶液配制好后，于24 h内每隔一定时间测定1次。结果的 RSD=0.52%，表明硫酸阿托品在24 h内基本稳定。

加样回收试验:称取已知含量的样品约1 g，精密称定，分别加入不同量的硫酸阿托品对照品，同供试品溶液制备后测定含量，计算回收率。结果见表1。