欧洲越桔提取物改善小鼠葡萄膜炎的机制研究

姚 楠，李小迪，李善兵，何蓉蓉，栗原博

(1.广东省中医研究所，广东广州 510095;2.暨南大学中药及天然药物研究所，广东 广州 510632)

目前葡萄膜炎的发病机制尚未完全明确，缺乏理想的预防及治疗措施［1］。葡萄膜炎动物模型的研究发现内毒素诱导的葡萄膜炎大鼠眼内存在氧化应激［2］。欧洲越桔属于杜鹃花科越桔亚科植物，富含花色苷类化合物。本课题组首次发现欧洲越桔提取物(bilberry extract，BE，含有 42.04% 的花色苷)［3］对束缚应激以及葡萄膜炎小鼠眼内氧化应激状态都具有一定的改善作用［4－5］。在此，本研究对改善作用的机制进行了初步探讨，研究了葡萄膜炎小鼠眼内一氧化氮诱导型合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)mRNA的表达水平，核转录因子 κB(nuclear transcription factor-kappa B，NF-κB)中的 NF-κB p65 mRNA以及蛋白的表达水平。

1 材料与方法

1.1 试剂 欧洲越桔提取物(bilberry extract，BE)(批号:28770/M1)购自意大利Indena S.p.A.公司，伤寒沙门菌脂多糖LPS购自美国Sigma-Aldrich公司。

1.2 动物 体质量18～22 g，6周，♂，SPF级BALB/C小鼠90只，购自广东省医学实验动物中心，许可证号:SCXK(粤)2008-0002。饲养温度为(23±2)℃，照明时间为12 h·d－1(7:00～19:00)。适应性饲养1周后进行实验。

1.3 方法 将90只♂ BALB/C小鼠随机分为正常(Control)对照组、模型(LPS)组、BE低剂量(LPS+BE 50 mg·kg－1)组、BE 中剂量(LPS+BE 100 mg·kg－1)组和 BE 高剂量(LPS+BE mg·kg－1)组共5组，每组18只小鼠。BE不同剂量给药组连续5 d灌胃给予BE，Control组和LPS组给予同体积蒸馏水，每天1次。在第5天LPS组和BE各剂量组小鼠灌胃后立即进行LPS(来源于伤寒沙门菌)足底皮下注射，注射剂量为100 μg/只，24 h后乙醚麻醉处死小鼠收集眼球。通过半定量RT-PCR技术检测眼组织iNOS和NF-κB p65基因表达，并且通过 Western blot技术检测眼组织NF-κB p65蛋白表达。

2 结果

2.1 欧洲越桔提取物对注射LPS后小鼠眼组织iNOS mRNA和NF-κB p65 mRNA表达的影响 见 Tab 1。

Tab 1 Effects of bilberry extract(BE)on expression of iNOS and NF-κB p65 mRNA levels in eyes of micetreated with LPS(±s，n=18)

Tab 1 Effects of bilberry extract(BE)on expression of iNOS and NF-κB p65 mRNA levels in eyes of micetreated with LPS(±s，n=18)

##P＜0.01 vs control group;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs LPS group

Group Dose/mg·kg－1 iNOS NF-κB p65 Control 0.000 ±0.000 0.133 ±0.016 LPS 0.193 ±0.026## 0.207 ±0.011##LPS+BE 50 0.194 ±0.029 0.193 ±0.013 LPS+BE 100 0.194 ±0.020 0.148 ±0.018＊＊LPS+BE 200 0.169 ±0.019* 0.139 ±0.014＊＊

2.2 欧洲越桔提取物对注射LPS后小鼠眼组织NF-κB p65蛋白表达的影响 见Tab 2。

Tab 2 Effects of bilberry extract(BE)on expression of NF-κB p65 protein levels in eyes of mice treated with LPS(±s，n=18)

Tab 2 Effects of bilberry extract(BE)on expression of NF-κB p65 protein levels in eyes of mice treated with LPS(±s，n=18)

##P ＜0.01 vs control group;＊＊P ＜0.01 vs LPS group

Group Dose/mg·kg－1 NF-κB p65 Control 0.380 ±0.048 LPS 0.908 ±0.071##LPS+BE 50 0.817 ±0.063 LPS+BE 100 0.771 ±0.038＊＊LPS+BE 200 0.674 ±0.046＊＊

3 讨论

我们的研究结果已经发现NO水平在葡萄膜炎动物模型中明显升高［5－6］。在本实验中，与空白组相比，模型组iNOS mRNA表达的明显增高，促使 iNOS酶活性提高，最终导致NO水平升高，而高剂量的 BE能明显降低 iNOS mRNA的表达水平，从而降低 NO的水平。NF-κB p65是一种启动iNOS等氧化应激相关基因表达的核转录因子，氧化应激可以诱导无活性的转录因子NF-κB三聚体转变成有活性的NF-κB二聚体进入细胞核内，发挥其转录调控作用［7］，而且NF-κB 与葡萄膜炎的发病密切相关［8］。我们针对 NF-κB p65的半定量RT-PCR检测和Western blot检测的结果很相似:在LPS组中，NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达都明显升高，同时中剂量和高剂量的BE不仅明显降低了其mRNA的表达水平，而且也降低了其蛋白表达水平，还表现出一定的量效关系。

综上所述，欧洲越桔提取物改善葡萄膜炎小鼠眼组织氧化应激状态可能与其降低NF-κB p65的表达有关，其具体的机制有待深入研究。

［1］ 姚 楠，何蓉蓉，栗原博.内毒素诱导的葡萄膜炎动物模型研究进展［J］.眼科研究，2010，28(12):1187－90.

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［4］ 姚 楠，何蓉蓉，栗原博.欧洲越桔提取物对小鼠眼内氧化应激状态的影响［J］.中国药理学通报，2010，26(5):694－5.

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