反相高效液相色谱法测定茵陈合血胶囊中黄芩苷含量＊

2011-07-28蒋大义杨宏图马惠莱王惠玲

中国药业 2011年18期

蒋大义，张娓，杨宏图，马惠莱，王惠玲，常翠

(广东省深圳市人民医院·暨南大学第二附属医院药学部，广东深圳 518020)

茵陈合血胶囊由茵陈、七寸金、黄芩、制大黄、甘草组方，是将临床应用多年、用于防治围产期母婴ABO血型不合的协定处方加以改进研制而成。为有效控制产品质量，保证临床用药安全有效，笔者选择活性成分明确的黄芩苷作为质量控制指标，采用反相高效液相色谱法测定茵陈合血胶囊中黄芩苷的含量[1－3]，报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－20A型高效液相色谱仪，包括DGU－20A3脱气机、LC－20AT溶剂输送泵、SIL－20A自动进样器、CTO－20A柱温箱、SPD－20A紫外－可见检测器、CBM－20A系统控制器、LCSolution(Ver.1.21)工作站等;pHS－29A型精密pH计(上海雷磁仪器厂);电热恒温水浴锅(广东省汕头市医用设备厂);日本AND电子分析天平;DS系列超声波清洗器(天津市东康科技有限公司);FY－3C型真空泵(温岭市飞越机电有限公司)。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为10715－200212);茵陈合血胶囊(自制，批号为20100205，20100315，20100626);甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:岛津 Shimpak VP －ODS柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水－冰醋酸(52∶48∶1);流速:1.0 mL/min;检测波长:280 nm;进样量:10 μL;柱温:25℃。理论板数以黄芩苷计为5763。在此条件下，色谱图见图1，黄芩苷色谱峰与杂质完全分离，保留时间为9.18 min，阴性对照无干扰。

2.2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

精密称取对照品10.59 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品贮备液(每1 mL含黄芩苷0.2118 mg);再精密量取该溶液3 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(于2～8℃保存)。取样品胶囊内容物0.5 g(相当于1粒的量)，精密称定，置50 mL量瓶中，加入70%乙醇适量，超声处理30 min，冷却后，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，并用70%乙醇稀释至刻度，用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，取续滤液，即得供试品溶液。按照茵陈合血胶囊的制备工艺制备不含黄芩苷的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

标准曲线绘制:分别精密量取黄芩苷对照品贮备液(211.8 mg/L)1，2，3，4，5，6 mL，置 20 mL 容量瓶中，定容，摇匀，在拟定的色谱条件下进样分析，以峰面积(Y)为纵坐标、相应质量浓度(X)为横坐标进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程 Y=368.87 X+0.158，r=0.9998(n=6)。结果表明，黄芩苷质量浓度在 10.55 ～63.30 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为20100205)约0.25 g，精密加入黄芩苷对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备，依法操作测定含量，计算回收率。结果见表1。

精密度试验:配制质量浓度为 12.00，36.00，60.00 mg/L 的对照品溶液各5份，连续测定2 d，计算日内和日间的精密度。结果见表2。

稳定性试验:配制质量浓度为18.00，24.00 mg/L的供试品溶液，置室温或 37 ℃恒温水浴中，于 0，0.5，1，2，4 h 时取出适量，自然冷却，观察溶液外观并测定含量。结果供试品溶液在不同时间的外观均澄清、无浑浊，色谱峰面积及峰形无变化，含量见表3。