反相高效液相色谱法测定厄多司坦胶囊的含量

吴伟明，王 军，吴妙妙

(温州医学院附属第二医院药剂科，浙江 温州 325027)

厄多司坦属黏痰溶解药[1]，为前体药物，其分子结构中含有被封闭的巯基(－SH)，通过肝脏生物转化成含有游离巯基的活性代谢产物而发挥黏痰溶解作用，另外还具有增强黏膜纤毛运转功能等作用。厄多司坦可提高抗生素在支气管炎症部位的浓度，具有良好祛痰镇咳和清除自由基的活性作用，临床主要用于急性和慢性支气管炎、鼻窦炎、耳炎、咽炎和感冒等引起的呼吸道阻塞及黏液黏稠[1]。为了进一步控制该制剂的质量，笔者建立了一种比较灵敏和简便的厄多司坦胶囊的含量测定方法。现报道如下。

1 仪器与试药

HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，包括G1311A 1100/1200四元泵，G1314A 1100可变波长检测器;Chem32安捷伦色谱工作站(agilent，Version 6.1);FA1004N型电子天平(上海精密科学有限公司，d=0.1 mg);TU－1901型双光束紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);pHS－3C型精密pH计(上海精密科学仪器有限公司，编号为025016)。厄多司坦对照品(纯度为99.7%，批号为20081005)，厄多司坦胶囊(规格为300 mg/粒，批号为091101，091115，091201)，均由浙江康乐药业有限公司提供;甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil ODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，柱前加保护柱(4 mm ×4 mm，5 μm);流动相:pH 为 6.8的磷酸缓冲液(磷酸二氢钠 1.95 g+0.1mol/L 氢氧化钠 55 mL，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤)－甲醇(95∶5);柱温:室温;流速:1.0 mL/min;检测波长:237 nm;进样量:20 μL。用外标法测定。

2.2 溶液制备

精密称取样品适量(约相当于厄多司坦25 mg)，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，精密吸取续滤液250 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按处方制备不含厄多司坦的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。精密称取厄多司坦对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得100 μg/mL的对照品贮备液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:精密吸取2.2 项下 3 种溶液各 20 μL，注入液相色谱仪，在拟订的色谱条件下，色谱图见图1。可见，供试品溶液与对照品溶液色谱在同一保留时间有相同的色谱峰出现，而阴性对照品溶液色谱则无此峰，说明辅料对测定无干扰。厄多司坦保留时间约为6.69 min，理论板数按厄多司坦峰计算为4822。

线性关系考察:分别精密吸取对照品贮备液适量，加流动相稀释成质量浓度分别为50，40，25，20，10，4，1 μg/mL 的溶液。在上述色谱条件下取以上溶液各20 μL注入液相色谱仪中，测定峰面积。以厄多司坦质量浓度(X，μg/mL)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得回 归 方 程 Y=20.289X－5.001，r=0.9997(n=5)。结果表明，厄多司坦质量浓度在 1～50 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取质量浓度为20 μg/mL的对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积。结果的 RSD为0.87%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品，依法制备供试品溶液，连续进样6次。结果峰面积的 RSD为0.92%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，12，24 h时进样，测定峰面积。结果的 RSD为1.05%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

图1 高效液相色谱图

加样回收试验:取对照品约40 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密量取2，6，8 mL，置25 mL容量瓶中，再分别加入已测知含量的供试品溶液适量，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各1 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，即得低、中、高3组供试品溶液，每组2份。另取对照品贮备液，加流动相稀释，制成25 μg/mL的对照品溶液，依法测定，按外标法计算回收率。结果见表1。

表1 厄多司坦加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，吸取20 μL进样，按外标法以峰面积计算含量。结果批号为091101，091115，091201的3批样品中厄多司坦含量分别为标示量的98.52%，99.07%，98.76%(n=3)。

3 讨论

厄多司坦是氨基酸衍生物，分子结构中既有酸性基团也有碱性基团，故流动相的pH决定了样品分子以何种形式存在，从而决定样品在色谱柱上的保留与峰形。文献[2－3]采用水－乙腈－三氟醋酸或1 mmol/L醋酸铵－乙腈(80∶20，pH=3.2)为流动相，对柱子损伤较大。为此，本研究中采用了比较廉价易得的流动相，如甲醇、水和磷酸盐缓冲溶液，并调整各流动相比例及流速，同时考察了反相色谱柱在其耐受的pH(即pH为2～8)条件下，厄多司坦色谱峰形及保留与流动相pH之间的关系。但由于厄多司坦极性较大，采用十八烷基键合硅胶为固定相做反相色谱分离时容量因子较小，在试验中选择流动相时曾尝试25%甲醇、5%甲醇等，主成分峰保留时间均小于3 min，与相邻杂质峰分离度不符合要求。最后发现选择以甲醇－pH=6.8的磷酸盐缓冲溶液(5∶95)为流动相时，样品不仅保留好且峰形较好。

厄多司坦在热水中微溶，易溶于甲醇。曾尝试加热水溶解，但杂质峰明显增加，可能加热导致其分解;当以甲醇为溶剂时，其对照品溶液紫外图谱显示237 nm波长处有最大吸收峰，但有肩峰出现;以流动相为溶剂配制的厄多司坦对照品溶液在237 nm波长处有最大吸收峰，且峰形较理想。因此，选择流动相为溶剂。

取对照品贮备液，在190～360 nm波长处扫描，结果厄多司坦在237 nm波长处有最强吸收。为便于检测，选择检测波长为237 nm。

本试验对厄多司坦的含量测定方法进行了系统研究，结果显示，方法灵敏度高、操作简便、结果准确，辅料不干扰测定结果。

[1]刘 萍，边 强.黏痰溶解药物——厄多司坦[J].国外医药·合成药、生化药、制剂分册，1996，17(4):239.

[2]Kim H，Chang KY，Lee HJ，et al.Sensitive determination of erdostein in human plasma by use of automated 96－well solid－phase extraction and LC－MS/MS[J].Pharm Biomed Anal，2004，34(3):661.

[3]Savu S，Mitrea M，Silvestro L，et al.HPLC with on－line mass spectrometry detection application to elucidate Erdosteine metabolism:preliminary study[J].Clin Pharrnacol Ther，2000，38(8):415.