胶体金与蛋白芯片结核抗体检测方法在结核病辅助诊断中的临床价值

刘尚武 李王平 邹远妩 金发光 穆德广

胶体金法与蛋白芯片法是二种常用的临床结核抗体检测方法，在结核的辅助诊断中具有一定的临床价值。我们对2010年2月1日至4月30日新入陕西省结核病防治院333例患者同时进行二种不同方法检测结核抗体，结果发现，胶体金法检测结核抗体均阳性，而蛋白芯片法进行结核抗体检测阳性率显著较低。收集患者资料，分析二种检测方法结果的差异性，探讨此二种方法在结核病辅助诊断中的临床价值。

资料与方法

一、一般资料

收集2010年2月1日至4月30日所有新入陕西省结核病防治院的患者(包括院外诊断明确及疑诊住院患者，不论性别及年龄)的实验室检查结果及部分与本实验相关的临床资料。新入患者共364例，其中同时进行胶体金法及蛋白芯片法检测结核抗体者333例纳入统计，其中男性207例，女性126例，年龄最小14岁，最大77岁，平均年龄39.66岁。

二、观察方法

所有患者入院后采集血清同时用胶体金法及蛋白芯片法进行结核抗体检测。收集所有胶体金法检测呈阳性的患者资料并分析其蛋白芯片法检测结果，将胶体金法与蛋白芯片法结核抗体检测结果进行对比分析并与患者最终诊断进行统计学分析。胶体金法采用上海奥普生物医药有限公司生产的结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒(商品名:迪比多)。蛋白芯片法采用南京大渊生物技术工程有限责任公司生产的结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒(蛋白芯片)，具体检测方法按说明书操作。

三、统计学分析

数据用SPSS13.0软件进行分析，采取4格表资料的χ2检验方法，对不同抗原间两两进行比较，P＜0.05表示差异有显著性。

结 果

一、胶体金法与蛋白芯片法检测

333例胶体金法阳性患者最终诊断结果，结核病309例(92.79%)，其中继发型肺结核216例、结核性胸膜炎72例、肺外结核21例;其它诊断24例(7.21%)，其中肺癌9例、支气管扩张9例、肺炎6例。胶体金法检测假阳性率为7.21%(24/333)。

用蛋白芯片法对333例胶体金法阳性患者进行抗原抗体检测结果，见表1。

LAM 与16 KDa:χ2=169.169，P ＜0.01;LAM 与38 KDa:χ2=0.506，P=0.527 ＞0.05;16 KDa与38 KDa:χ2=153.339，P ＜0.01

蛋白芯片法阳性患者不同诊断结果，见表2。

二、胶体金法与蛋白芯片法阳性结果一致性分析

333例患者中，二种检测方法即胶体金法及蛋白芯片法(16 KDa、LAM、38 KDa抗原)检测均阳性者仅30例(包括支气管扩张3例、肺炎3例)，结果一致总阳性率仅为9.01%(30/333)，假阳性率为20%(6/30)。

表1 333例胶体金法阳性患者蛋白芯片法检测结果Table 1 The detection results in 333 tuberculosis positive patients by colloidal gold immunization method with protein chip

表2 蛋白芯片法阳性患者诊断结果Table 2 The diagnosis results of tuberculosis positive patients with protein chip

胶体金法阳性，蛋白芯片三种抗原全部阴性共111例(其中肺癌9例，肺外结核6例)，假阴性率为35.92%(111/309)。确诊为肺癌的患者无一例蛋白芯片法检测阳性。38 KDa抗原与LAM抗原同时阳性例数为180例，占二者总阳性的45.11%(180/399)。

三、痰检结果

333例患者痰涂片抗酸杆菌检查阳性例数105例，阳性率为31.53%。结核菌培养阳性例数102例，阳性率为30.63%。

讨 论

胶体金法是利用斑点免疫胶体金渗滤技术(dot immu no gold filtration assay，DIGFA)，将结核分支杆菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维素膜上，膜上肺结核抗原捕获人血清样品中结核分枝杆菌抗体，被捕获的结核IgG抗体可用葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A，SPA)胶体金缀合物标记呈色(SPA能与IgG特异性结合)，形成红色斑点，根据是否出现红色斑点即可判断阴、阳结果，从而判断是否存在结核分枝杆菌抗体(说明书)。蛋白芯片法试剂盒由芯片和试剂两部分组成，芯片以微孔滤膜为载体，同时将结核菌的特异性细胞壁脂多糖抗原LAM和经基因工程重组DNA技术生产纯化的结核菌16KDa和38KDa特异性抗原固定在特制的载体上，利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝集作用，捕捉被检样品中特异性抗体，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，复合物再与胶体金标记的兔抗人IgG作用，在膜上形成紫红色的斑点。然后通过芯片识别系统进行结果分析。分别测定抗结核菌的特异性细胞壁脂多糖LAM的抗体、16 KDa抗体和38 KDa的抗体，如一种抗体阳性，则判断该患者抗结核分枝杆菌抗体阳性(说明书)，此两种方法为临床常用的结核辅助诊断的方法。其中结核分枝杆菌的LAM是结核分枝杆菌细胞壁的重要组成成分，具有较强的抗原性，能够刺激结核菌感染者产生抗体，而其他分枝杆菌由于表面LAM含量低，不能刺激机体产生高水平的抗体量，故LAM抗体的特异性和敏感性都较高。16 KDa的基因型为MPT63，该基因仅发现于结核菌复合群，与常见的鸟分枝杆菌的蛋白没有血清交叉反应。38 KDa是由细胞分泌的一类脂蛋白，其与细胞膜或者菌体表面的脂肪结构相连，分枝杆菌中只有结核菌和牛分枝杆菌分泌38 KDa蛋白，而人结核菌的反应强度比牛分枝杆菌高10倍［1-2］。

在本研究中，364例入院患者333例胶体金法结核抗体检测阳性，最终确诊为结核病309例(92.79%，309/333)，其它诊断24例(占7.21%)，胶体金法敏感性较高，阳性率为91.84%，假阳性率为7.21%，与文献报道相似［3-4］。而蛋白芯片法三种抗原检测全部阴性111例(占33.33%)，敏感性显著低于胶体金法。但在蛋白芯片法三种抗原检测的患者中，其中9例肺癌患者抗体检测结果均为阴性，是否可以作为临床排除肺癌的部分依据还需要更多的资料来证实。非结核诊断共15例，阴性符合率为13.5%(15/111)。在蛋白芯片法三种抗原检测比较中发现，16 KDa抗原阳性率最低，与报道相符［5］。但42例患者中，蛋白芯片法三种抗原检测结果全部阳性30例，占71.43%(30/42)，说明16 KDa检出阳性率虽低，但若阳性，则38 KDa与LAM抗原阳性率高。38 KDa与LAM抗原阳性率分别为58.56%及61.26%。333例患者痰涂片检查阳性例数105例，阳性率为31.53%。结核菌培养阳性例数102例，阳性率为30.63%，与国内报道相符。

对以上统计数据分析后发现，胶体金法有较高的敏感性，假阳性率小于10%，而蛋白芯片检测结核抗原阳性的标准为任一抗原阳性即结果可作为阳性，3种抗原中16 KDa阳性率显著低于38 KDa与LAM，差异具有显著性，但38 KDa与LAM 2种抗原之间差异无显著性。3种抗原总阳性率为(任一阳性即为阳性结果)66.67%(222/333)。38 KDa与LAM两种抗原在该组病例不同结核病类型中的阳性结果比较差异无显著性。其中在肺结核及结核性胸膜炎两种诊断中的阳性率并无明显差异，而肺外结核阳性率高的原因考虑与肺外结核在本组病例中占有比例较少有关。

有资料认为，在蛋白芯片法中，三种抗原联合抗体检测具有以下意义:三者全阳性，说明有活动性结核存在;两者阳性，结合临床表现，可能有结核菌感染的存在;单项阳性，在体液中有意义，在血清中可能说明曾有过结核菌感染或处于结核病的恢复期;三者全阴性，可能没有结核菌感染或患者免疫力低而无法检测出来［1］。这与本组病例所观察结果不一致，本研究病例中，三者全阳性者30例，其中有其它诊断6例，而全阴性达111例，占33.33%，其中非结核诊断仅15例，与前述结论差异明显。由于该组资料来自结核病专科医院，入院患者多为院外已确诊而转院的结核病患者，其它诊断病例占总人群数比例少，因而胶体金法阳性率高。若在综合医院进行该项检查结果统计，可能结果会不同。

痰抗酸杆菌检查或培养是诊断结核病的金标准，但因阳性率低，临床上需要通过病理协助诊断或通过血沉、TB-DNA-PCR、结核抗体、PPD等资料进行综合分析以确定或排除诊断。结核抗体检测是一种快速、简便且较为敏感的结核辅助诊断方法。通过该组资料分析发现，胶体金法检测结核抗体在结核病的辅助诊断价值中要高于蛋白芯片法。虽然蛋白芯片法检测结核抗体阳性的标准为任一抗原检测阳性即可认为是阳性结果，但其阳性率仍显著低于胶体金法。蛋白芯片法敏感性较低，但总体与文献报道差异不大［6］。蛋白芯片法三种抗原之间检测结果差异较大，本组资料与文献报道一致［5］。这种抗原检测阳性结果差异性是否与抗原本身的特点有关，目前该方面的报道较少，结果不得而知。此外，是否使用胶体金法对此蛋白芯片法三种抗原进行检测结果会有不同，亦不得而知。目前市场上结核抗体检测试剂盒种类较多，但以胶体金法及蛋白芯片法为主，但检测的抗原类型不尽相同，可能影响了检测的结果，使得其对结核病的辅助诊断价值减低。因此，建议在采用不同试剂盒进行结核抗体检测时，使用尽可能相同或相交的抗原进行，以提高辅助诊断判断价值。

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