幽门螺杆菌口腔定植和胃肠疾病的关联性研究

陈骏 何祥一 吴凌莉 车团结

（1.兰州大学口腔医学院 口腔修复教研室；2.兰州大学 生命科学院细胞生物学研究所，兰州 730000）

自从Marshall等[1]从胃黏膜上分离培养出幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H.pylori）以来，H.pylori的研究已取得了突破性的进展，已证实其是各型慢性胃炎的主要病原体，并且是胃癌的早期危险因素[2]。H.pylori主要定居在胃黏膜上，但其传播途径尚不明了。Krajden等[3]从口腔中分离出H.pylori，证实了口腔内有H.pylori的定植和寄居，并且是人体H.pylori的第二储菌库。牙周健康状况与H.pylori的定植关系密切[4]，牙周病患者牙菌斑的酸性微生态环境，牙周袋内较低的氧化还原电位，都为H.pylori提供了理想的生存环境。口腔中的H.pylori可以随唾液源源不断地被吞咽到胃中，这可能是胃病复发的重要因素[5-8]，Young等[9]研究发现口腔中的H.pylori和胃内的H.pylori在形态学上并没有区别，其生化特性和免疫特性也相似。彭惠等[10]检测发现胃黏膜与唾液中H.pylori的2种vacA基因型的一致率为98%。但也有学者认为H.pylori在口腔中的存在是一过性的，口腔与胃内H.pylori感染无明显相关性[11-12]。

本研究采用细菌培养的方法，通过唾液检测胃肠疾病患者口腔中的H.pylori，进一步分析、探讨口腔中H.pylori的定植与年龄、性别、牙周状况及不同胃肠疾病的关联性。

1 材料和方法

1.1 研究对象

1.1.1 胃肠疾病组 选取2009年11月—2010年4月间因上消化道症状在甘肃省白银市第一人民医院消化内科接受胃镜检查且被确诊为胃肠道疾病的173名患者为研究对象。其中男性73人，女性100人。年龄为15～78岁，65岁及以上15人，45～64岁67人，35～44岁55人，35岁以下36人。消化性溃疡23人；糜烂性胃炎18人；浅表性胃炎92人；返流性胃炎28人；萎缩性胃炎9人；其他3例，包括胃癌2例及疣状胃炎1例。根据WHO的社区牙周指数（community periodontal index，CPI）分值，牙周健康13人，牙龈出血37人，牙结石101人，牙周袋22人。所有患者3个月内未服用抗生素及铋剂或质子泵抑制剂等胃药，12个月内未接受过牙周治疗，全口牙不少于24颗，否认患有其他重要系统性疾病。

1.1.2 对照组 选取在甘肃省白银市第一人民医院口腔科接受口腔检查、无消化道症状的128人为对照。其中男性48人，女性80人；年龄23～60岁。

1.2 取样和检查

胃镜检查前，当日清晨空腹采用吐唾法收集胃肠疾病患者的全唾液。取样前用生理盐水漱口，让受检者将唾液吐入事先准备好的无菌塑料试管中，2～5mL，立即放在-80℃低温冰柜储存，备用。然后根据CPI进行牙周检测，使用统一的平面口镜和WHO推荐的CPI探针，从每例患者口腔内选择6个区段，共10个指数牙（20岁以下检查6个指数牙）。记录CPI指数及每位患者的基本资料。唾液样本及临床检查全部由一位具有5年以上工作经验的口腔本科毕业的医师完成。

1.3 诊断标准

每个区段以最重情况的指数牙记分，6个区段中最高记分为个人CPI分值。具体标准如下。0：牙龈健康；1：牙龈炎，探诊后出血；2：探诊可发现牙石，龈袋深度＜3.5mm；3：早期牙周病，龈袋深度4～5mm；4：晚期牙周病，牙周袋深度在6mm或以上。

1.4 H.pylori的培养和鉴定

1.4.1 混合抗生素 称取万古霉素0.016 g、两性霉素B 0.016 g、多黏菌素0.000 6 g，将其在紫外线下照射1 h，均匀混合。再称取甲氧苄胺嘧啶0.008 g，溶于10mL蒸馏水中，并加乳酸一滴，煮沸10min，将混合抗生素加入，用灭菌蒸馏水加至40mL，混匀，4℃保存，备用。

1.4.2 培养基 将5.2 g脑心浸液琼脂粉加入100mL去离子水中，微波炉加热，配成100mL脑心浸液琼脂，取15mL待温度降至45～50℃时加入脱纤维绵羊血0.8mL和混合抗生素0.4mL，将pH值调至7.5，倒入24孔培养板，冷却。

1.4.3 培养 吸取0.01mL唾液，滴于固体培养基，用接种环涂开，将培养平板置于密闭玻璃干燥器内，用抽气泵抽至负压73 kPa后，灌入气体使终浓度分别达到5%O2、85%N2、10%CO2，保持湿度＞95%，37 ℃电热恒温培养箱内培育1～4 d，观察H.pylori生长情况。

1.4.4 鉴定 刮取一环细菌置入尿素酶试剂中，37℃、1min后，试剂变成红色或紫红色为阳性（尿素酶实验）；在一张载玻片上滴加3%H2O2液，刮取一环菌落置入后，可以见到连续不断的气泡生成（触酶试验）；刮取菌落放置在浸有氧化酶试剂的滤纸上，在接触部位出现深蓝黑色（氧化酶试验）。经以上3种实验鉴定，结果均为阳性，可证明H.pylori高质量培养成活，以排除来自口腔的其他相似细菌。

1.5 统计学方法

采用SPSS16.0软件包对实验数据进行处理，对各组结果的差异性采用χ2检验，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 H.pylori的培养和鉴定结果

经肉眼观察菌落呈凸起圆形，半透明，边缘整齐，光滑，灰白色，直径为1.5～8.0mm。普通显微镜下观察H.pylori为海鸥状、S状弯曲菌，革兰染色为阴性。用无菌接种环取菌落，置于尿素酶试剂盒中，2min内试剂由黄色变为红色，触酶试验及氧化酶试验结果均为阳性（图1）。

2.2 唾液中H.pylori的检测

173例胃肠疾病患者口腔唾液中H.pylori阳性率为40.46%（70/173），128例对照组患者口腔唾液中H.pylori阳性率为43.75%（56/128），2组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 口腔中H.pylori感染与胃肠疾病的关系

在萎缩性胃炎组H.pylori阳性率为77.78%（7/9），明显高于浅表性胃炎组36.96%（34/92）和消化性溃疡组26.09%（6/23），且差异有统计学意义（P＜0.05）。在糜烂性胃炎组H.pylori阳性率为61.11%（11/18），与消化性溃疡组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 性别及年龄因素对口腔中H.pylori感染的影响

在173例胃肠疾病患者中，男性H.pylori阳性率为49.32%（36/73），女性H.pylori阳性率为34.00%（34/100），男性高于女性，差异有统计学意义（P＜0.05）。其中45～64岁年龄组H.pylori阳性率为56.72%（38/67），明显高于35～44岁年龄组30.91%（17/55）及35岁以下年龄组19.44%（7/36），差异有统计学意义（P＜0.05）。2.5 H.pylori阳性率与牙周状况之间的相关关系

牙周健康组、牙龈出血组、牙结石组、牙周袋组H.pylori阳性率分别为15.38%（2/13）、24.32%（9/37）、42.57%（43/101）、72.73%（16/22）。牙周健康组H.pylori阳性率与牙周袋组H.pylori阳性率相比，其差异有统计学意义（P＜0.05）。口腔中H.pylori的检出率与患者口腔牙周疾病的严重程度呈正相关。

3 讨论

H.pylori感染是常见的慢性感染性疾病，全世界约有50%的人群感染H.pylori。长期以来，多数学者认为H.pylori仅寄居于人类，且胃是其惟一的生存环境，只在人与人间传播[3，13-14]。Tursi等[15]提出H.pylori的传播方式主要有粪—口、口—口、胃—口、胃—胃。可见口腔在H.pylori传播中占据重要地位，但其传播方式仍不明确。而口腔作为人体的重要“菌库”之一，唾液中的微生物主要来自黏膜、舌背、牙菌斑和龈沟等处，牙菌斑及牙周袋又是H.pylori聚集的主要区域。Miyabayashi等[16]认为口腔与胃内的H.pylori具有同源性。在临床上消化科采用三联疗法治疗由H.pylori感染引起的胃、十二指肠炎性病变，但是病变复发和再次感染H.pylori常给医务工作者和患者带来困扰，其原因可能是口腔中H.pylori随唾液源源不断地被吞咽到胃，药物能清除胃肠消化道的H.pylori感染，但对唾液中的H.pylori清除效果不明显[17]。有学者[18-20]采用聚合酶链反应检测患者口腔及胃内的H.pylori菌株，发现两者截然不同，认为H.pylori只是暂时存留于口腔，对胃H.pylori感染不起主要作用。也有学者[11-12，19，21]认为H.pylori是一种条件致病菌，广泛存在于健康人和慢性胃炎患者的口腔内，一般不会致病，当环境改变时才导致胃病的发生。

本研究利用细菌培养法，结合氧化酶、快速尿素酶和触酶试验对H.pylori进行检测和鉴定。细菌培养法是H.pylori检测的“金标准”之一，尤其快速尿素酶检测方法简单，费用低，诊断速度快，是临床上最常用的诊断方法之一。本研究对173例胃肠疾病患者唾液中的H.pylori进行检测，H.pylori阳性率为40.46%，对照组H.pylori阳性率为43.75%，说明H.pylori广泛存在于健康人和胃肠疾病患者的口腔内，是一种条件致病菌。在不同胃肠疾病患者的口腔唾液中，将H.pylori阳性率进行比较发现，萎缩性胃炎组最高，为77.78%，糜烂性胃炎组为61.11%，表明患者口腔H.pylori感染与萎缩性胃炎和糜烂性胃炎间存在密切的相关性。

不同年龄性别分组中，性别差异显著。男性的口腔自我保健意识较女性薄弱，无良好的口腔卫生和就医习惯。较差的牙周状况、肿胀的牙龈以及粗糙的牙石表面，都为H.pylori在口腔中定植和致病提供了有利条件，45～64岁中年组H.pylori阳性率为56.72%，明显高于低年龄组（P＜0.05），使口腔中的H.pylori成为胃肠道疾病发生的重要隐患。

在以CPI分值分组的4组患者中，牙周袋组患者H.pylori阳性率高达72.73%，明显高于其余3组，提示口腔中H.pylori的阳性率可能与患者口腔牙周疾病的严重程度呈正相关，甚至成为胃肠道疾病发生及复发的重要原因。牙周病患者牙周袋内有大量的牙菌斑、软垢、牙石、食物残渣、炎症性渗出液，这些物质为口腔中H.pylori的定植提供了适宜的温度、湿度、酸碱度及营养等环境；牙周袋的深度为H.pylori的生存提供了良好微生态环境及一定的保护，使牙周袋成为H.pylori的永久聚集地。

综上所述，H.pylori广泛存在于健康人和胃肠疾病患者的口腔内，是一种条件致病菌。本研究结果丰富了牙周疾病与全身疾病之间的关系，提示控制牙周疾病可能是预防胃黏膜H.pylori再感染的重要措施之一。口腔中H.pylori的来源、致病机制以及与胃内H.pylori感染的关系，尚需更深入的基础和临床研究。

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